實(shí)驗(yàn)一 紫外吸收光譜法測定雙組分混合物

實(shí)驗(yàn)一紫外吸收光譜法測定雙組分混合物實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)會用解聯(lián)立方程組的方法，定量測定吸收曲線相互重疊的二元混合物。2.熟悉紫外光譜儀的操作。二、方法原理：根據(jù)郎伯—比耳定律紫外可見分光光度法很容易定量測定在此光譜區(qū)有吸收的單一成分。由兩種組分混合物中，若彼此都不影響另一種物質(zhì)的光吸收性質(zhì)，可根據(jù)相互間光譜重疊的程度采用相對應(yīng)的方法來定量測定如當(dāng)兩組分部分重疊時選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL仍可按測定單一組分的方法處理當(dāng)兩組分吸收峰大部分重疊時，則宜采用解聯(lián)立方程組或雙波長等方法進(jìn)行測定。解聯(lián)立方程組的方法是以郎伯—比耳定律及吸光度的加和性為基礎(chǔ)時測定吸收光譜曲線相互重疊的二元組分的一種方法。三、儀器和試劑1．TU-1901紫外-可見吸收光譜儀2．0.020mol/LKMnO4溶液（其中含H2SO40.5mol/L,含KIO42.0g/L3．0.020mol/LK2CrO7溶液（其中含H2SO40.5mol/L,含KIO42.0g/L四、實(shí)驗(yàn)步驟1.的0.020mol/LKMnO4置為、0.0008mol/L、0.0012mol/L、0.0016mol/L標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（其中的濃度為0.25mol/L2.分別取一定量的0.020mol/LK2CrO7溶液配置成濃度為0.0004mol/L、0.0008mol/L、0.0012mol/L、0.0016mol/L標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（其中的濃度為0.25mol/L3.在分光光度計(jì)上利用“光譜測量”功能，以1cm英吸收池，繪制上述溶液在700nm～400nm吸收光譜。條件為：狹縫間隔1.0nm，掃描速度中速（操作見“用TU—1901分光光度計(jì)進(jìn)行光譜掃描”4.在TU——1901光光度計(jì)上“光度測量”功能“用TU—1901分光光度計(jì)進(jìn)行光度測量”測定上述溶液在兩個吸收峰處的吸光度。5.將未知樣品溶液稀釋10（其中H2SO4的濃度為定未知樣品在兩個吸收峰處的吸光度。五、結(jié)果計(jì)算1.由實(shí)驗(yàn)步驟4所得吸光度別求得KMnO4和在兩個最大吸收峰處的四個摩耳吸收系數(shù)。2.由實(shí)驗(yàn)步驟4所得吸光度，列出二元一次方程組，求得未知樣品KMnO4和K2CrO7的濃度。六、問題與討論1.今有一光譜曲線相互重疊的三元混合體系，能否用解聯(lián)立方程式的方法來進(jìn)行測定？如何測定？實(shí)驗(yàn)二有機(jī)化合物的紫外吸收曲線的繪制及溶劑效應(yīng)一、試驗(yàn)?zāi)康模?．熟悉利用紫外光譜儀對有機(jī)化合物紫外吸收曲線的繪制方法。2．了解溶劑環(huán)境對化合物紫外吸收曲線的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理：每種具有不飽和結(jié)構(gòu)的有機(jī)物的紫外吸收曲線各有不同，據(jù)此可以進(jìn)行定性分

析。紫外可見吸收光譜法主要研究的分子躍遷類型為n-π*及π-π*對應(yīng)的吸收帶為R帶及K帶（共軛雙鍵含苯環(huán)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)還具有特有的B帶精細(xì)結(jié)構(gòu)及E吸收帶有機(jī)化合物的吸收曲線的影響因素有助色團(tuán)的影響溶劑的極性，溶液的pH值等，他們會使得曲線的最大吸收峰發(fā)生紅移或藍(lán)移。三、儀器及試劑：1．儀器：具有掃描功能的紫外可見分光廣度計(jì)2．樣品：丙酮、苯酚3．其他溶劑及藥品：純水、乙醇、正己烷、環(huán)己烷、甲醇，氫氧化鈉四、實(shí)驗(yàn)步驟：1．溶劑對丙酮（n-π*）紫外吸收光譜的影響。在三個25ml具塞比色管中，分別加0.10mL丙酮，分別用水、乙醇、正己烷稀釋至刻度，搖勻。1cm英吸收池（加蓋）盛裝溶液，各自的溶劑做參比，在紫外區(qū)做波長掃描得到丙酮在三種溶劑中的紫外吸收光譜觀察隨著溶劑極性的增強(qiáng)，丙酮的λmax有何變化。2．溶劑極性和pH值對苯酚紫外吸收光譜的影響在四個25ml具塞比色管中，分別加入苯酚的環(huán)己烷、甲醇、純水0.1mol/L氫氧化鈉溶液各（濃度均為0.468mol/L用對應(yīng)溶劑稀釋至刻度勻。用1cm石英吸收（加蓋裝溶液各自的溶劑做參比在紫外區(qū)做波長掃描。得到苯酚在四種溶劑中的紫外吸收光譜計(jì)算4管λmax處的摩爾吸光系數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果將上述兩個實(shí)驗(yàn)得到的吸收曲線分別打印，并在曲線圖上標(biāo)出各自代表的溶劑。六、問題與討論：1．當(dāng)溶劑從非極性轉(zhuǎn)變?yōu)闃O性時，丙酮和苯酚的紫外吸收光譜有何變化？為什么？2．苯酚的紫外吸收曲線在純水和0.1mol/L氫氧化鈉溶液中有什么變化？為什么？3通過以上的實(shí)驗(yàn)操作總結(jié)在進(jìn)行紫外-可見光譜法測定時應(yīng)注意哪些問題？實(shí)驗(yàn)三氣-質(zhì)聯(lián)用儀的結(jié)構(gòu)及使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私赓|(zhì)譜儀的基本結(jié)構(gòu)，熟悉各個組成部分功能二、實(shí)驗(yàn)原理質(zhì)譜數(shù)據(jù)實(shí)際是三維數(shù)據(jù)保留時間質(zhì)量數(shù)和豐度如果把某一時刻所有離子豐度相加，將得到總離子流圖（TIC三、實(shí)驗(yàn)試劑和儀器安捷倫GC6890N-5973N型氣-質(zhì)聯(lián)用儀HP-5MS交聯(lián)石英柱（30m×250μm×0.25μm）待測化合物樣品10μL微量注射器四、實(shí)驗(yàn)步驟1．觀察質(zhì)譜儀結(jié)構(gòu)：真空泵、電子電離源、四極桿質(zhì)量分析器和電子倍增器。2．設(shè)定參數(shù)：柱溫：120℃→270℃；

進(jìn)樣口：250℃；Aux：285℃載氣（氦氣1mL/min；3．?dāng)?shù)據(jù)采集：用微量注射器準(zhǔn)確吸取1.0uL被測樣品注入后進(jìn)樣口樣品內(nèi)不同組分經(jīng)色譜柱分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀并且進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。4．?dāng)?shù)據(jù)分析（1）峰純度檢測PeakPurity：（2）信噪比測定SignaltoNoise：五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果請將檢測結(jié)果添入表中峰號保留時間（）信噪比峰純度1#2#3#六、思考題1.質(zhì)譜儀為什么要求真空狀態(tài)？如何達(dá)到真空狀態(tài)的？實(shí)驗(yàn)四全掃描數(shù)據(jù)采集及定性分析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康木毩?xí)并掌握全掃描數(shù)據(jù)的定性分析二、實(shí)驗(yàn)原理全掃描數(shù)據(jù)采集（SCAN是對所定義的整個質(zhì)量范圍進(jìn)行采集，主要用于未知樣品的分析。三、實(shí)驗(yàn)試劑和儀器安捷倫GC6890N-5973N型氣-質(zhì)聯(lián)用儀HP-5MS交聯(lián)石英柱（30m×250μm×0.25μm）待測化合物樣品10μL微量注射器四、實(shí)驗(yàn)步驟1設(shè)定SCAN參數(shù)：SolventDelay：3min；掃描質(zhì)量范圍：30-350；閾值：60采樣點(diǎn)：3；掃描速度：2.33scans/sec；電離電壓：70eV2數(shù)據(jù)采集：用微量注射器準(zhǔn)確吸取1.0uL被測樣品注入后進(jìn)樣口樣品內(nèi)不同組分經(jīng)色譜柱分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀并且進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。3定性分析：⑴本底扣除：BSB⑵譜庫檢索：LibraryResearch五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

請將全掃描采集數(shù)據(jù)的結(jié)果填入表中峰號保留時間（min）名稱或結(jié)構(gòu)式1#2#3#六、思考題1.全掃描數(shù)據(jù)采集原理及適用性。實(shí)驗(yàn)五選擇離子數(shù)據(jù)采集及定量分析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)選擇離子數(shù)據(jù)采集方法的建立掌握選擇離子數(shù)據(jù)的定量分析二、實(shí)驗(yàn)原理選擇離子數(shù)據(jù)采集（SIM）是指僅監(jiān)測含有所需要信息的荷質(zhì)比。由于它只對產(chǎn)生這些質(zhì)量碎片的化合物進(jìn)行檢測每個離子檢測時間相對要長可提高檢測靈敏度改善峰型和精密度法廣泛應(yīng)用于痕量分析雜基質(zhì)和常規(guī)定量分析。三、實(shí)驗(yàn)試劑和儀器安捷倫GC6890N-5973N型氣-質(zhì)聯(lián)用儀HP-5MS交聯(lián)石英柱（30m×250um×0.25um）有機(jī)化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（ug/ml）待測有機(jī)化合物樣品10ul微量進(jìn)樣注射器四、實(shí)驗(yàn)步驟1．建立SIM原始數(shù)據(jù)使用集的數(shù)據(jù)來確定SIM數(shù)據(jù)采集實(shí)驗(yàn)中要檢測的峰并將相關(guān)數(shù)據(jù)填入下表中?；衔锩Q保留時間分子離子基峰其他離子2．建立SIM數(shù)據(jù)采集方法⑴設(shè)定GC參數(shù)柱溫：120℃→230℃；進(jìn)樣口：250℃；載氣（氦氣；Aux：285℃⑵設(shè)定SIM參數(shù)：分組、選擇離子數(shù)目3．定量分析⑴設(shè)定定量積分參數(shù)：⑵建立校正方法：分別用微量注射器準(zhǔn)確吸取1.0uL各標(biāo)準(zhǔn)溶液注入進(jìn)樣口進(jìn)行數(shù)據(jù)采集建立多濃度水平校正數(shù)據(jù)庫。⑶樣品數(shù)據(jù)采集：用微量注射器準(zhǔn)確吸取1.0uL被測樣品注入后進(jìn)樣口樣品內(nèi)不同組分經(jīng)色譜

柱分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀并且進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。⑷待測樣品定量計(jì)算。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1將數(shù)據(jù)結(jié)果填入表中?；衔锩Q定量離子定性離子12樣品定量分析結(jié)果化合物名稱校正曲線方程

定性離子2樣品含量（ug/ml）六、思考題1什么是選擇離子數(shù)據(jù)采集？2比較選擇離子數(shù)據(jù)采集與全掃描數(shù)據(jù)采集異同點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)六質(zhì)譜法測定食品樣品中農(nóng)藥含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．掌握離子阱型質(zhì)譜儀的儀器結(jié)構(gòu)和基本操作；2．掌握利用質(zhì)譜方法對樣品進(jìn)行定性定量分析的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理電離后的粒子在一個交變的電磁場中會不斷的運(yùn)動過改變頻率和電壓可以使不同質(zhì)荷比的粒子依次通過質(zhì)譜儀的檢測器測器再把其響應(yīng)信號傳輸至記錄儀上得到質(zhì)譜圖，利用質(zhì)譜圖對某種組分做定性和定量分析。三、儀器結(jié)構(gòu)四、儀器與試劑1．儀器AgilentSL離子阱質(zhì)譜儀；KDSietific流動注射儀；SGE微量注射器（1000uL2．試劑液氮；磺胺二甲嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇（色譜純五、實(shí)驗(yàn)步驟質(zhì)譜條件：離子源電噴射電離源（ESI負(fù)離子模式；目標(biāo)物質(zhì)荷比m/z=278；簾氣40psi；干燥氣8L/min；干燥氣溫度350；進(jìn)樣速度300uL/h。1．定性分析：

在上述色譜條件下，將樣品直接進(jìn)樣，得到其對應(yīng)總離子流圖TIC）和質(zhì)譜圖。使用（多反應(yīng)監(jiān)測）模式檢測農(nóng)藥粒子，觀察其強(qiáng)度104以上則可判斷樣品中含有該種農(nóng)藥。2．定量分析：使用MRM模式將配制好的濃度分別為0.100.2