功能評價常用動物模型建立

功能評價常用動物模型建立第1頁/共41頁一、高血脂及動脈粥樣硬化二、糖尿病及其動物模型建立三、肥胖癥與動物模型建立四、貧血癥及其動物模型建立第2頁/共41頁一、高血脂及動脈粥樣硬化第3頁/共41頁高血脂及動脈粥樣硬化1．概念高血脂：血脂主要包括血漿中的膽固醇(Ch)、膽固醇酯，甘油三酯（TG），這些血脂成份高于正常上限即稱為高脂血癥。由于血漿中的脂類是與蛋白質載體結合運輸的，所以，所謂的高血脂癥實際上是高脂蛋白血癥。即LDL，VLDL濃度過高。動脈粥樣硬化：是高血脂及脂質代謝障礙的結果，它進一步導致冠心病，是嚴重危害人類健康的一種常見病，其已成為許多發(fā)達國家居民死亡的主要原因，在我國，近年來發(fā)病率明顯上升。第4頁/共41頁2.動脈粥樣硬化發(fā)生機制

動脈內膜的脂質、碳水化合物、血液成份沉積，平滑肌細胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化，形成了粥樣斑塊—粥瘤。所以動脈粥樣硬化包括兩個含義：即粥瘤和硬化，前者指脂質沉積和壞死，形成粥樣病灶，后者指膠原纖維增生。

HDL的濃度與發(fā)生動脈粥樣硬化呈負相關。第5頁/共41頁3.發(fā)生原因：醫(yī)學研究證明，膳食脂肪攝入總量，尤其是飽和脂肪酸攝入量與高脂血癥及動脈粥樣硬化發(fā)病率呈明顯正相關。動物試驗證明，用含膽固醇高的食物以及純膽固醇喂動物，能產生典型的動脈粥樣硬化。就膳食因素而言，高熱能，高脂肪（尤其是動物性脂肪）、高碳水合化合物飲食是引起肥胖，高血脂、動脈粥樣硬化的重要因素。第6頁/共41頁除此之外，還有遺傳因素，過量飲酒，一些無機鹽，各種原因引起的肝損傷等亦可引起高血脂癥、動粥癥。研究證明，不飽和脂肪酸，尤其是亞油酸，有多種生理功能，特別是可降血脂，膽固醇只有與亞油酸結合才能在體內運轉，這樣膽固醇就不易在動脈管壁上沉積，從而起到預防動脈硬化和動粥，高血脂等作用。第7頁/共41頁4．高血脂與動脈粥樣硬化模型（1）小鼠高血脂模型動物：雄性小鼠，體重18～22g。飼料：1%膽固醇，10%豬油，0.3%膽酸，其它為常料成份。方法：高脂飼料，連續(xù)飼喂7天，血清Ch可高達

530±m(xù)g/dl；或：雄性昆明種小鼠，18～

22g，靜注或腹注TritonWR-1399，可引起血清TC，TG大幅度升高；靜注400mg/kg/次，

3h即出現高血脂，5～6h后血清TC可增加1倍以上，12h左右達峰值，至72h仍高于正常。腹注：與靜注相似，劑量需大一些，時間長一些。第8頁/共41頁（2）大鼠高血脂癥模型：動物：雄性大鼠：150～250g。飼料：1～4%膽固醇，10%豬油，0.2%甲基硫氧嘧啶，86～89%基礎飼料。方法：飼喂2-4W可致高血脂癥；或10%蛋黃粉，

5%豬油，0.5%膽酸鈉，85%基礎飼料，每天喂15～20g，持續(xù)2-4W，血脂可升高達

250～500mg/dl，但只能用于降血脂作用實驗，造型12W以上可進行抗動脈粥樣硬化實驗。第9頁/共41頁或10%膽固醇，20%豬油，1%甲基硫氧嘧啶和2%膽酸鈉的脂肪乳劑，灌胃一周后，可成功地復制出高血脂癥模型。血清TC可達14.15±0.23mmol/L,TG達2.78±0.23mmol/L該乳劑配法：豬油20g置燒杯加熱融化，加入10g膽固醇溶化，再加2g膽酸鈉和1g甲基硫氧嘧啶充分攪勻，然后加入吐溫-8020ml，丙二醇20ml，餾水30ml，攪拌，溶解后，冷至室溫，再加餾水至100ml，混勻，即成脂肪乳劑，用時37℃水浴融化。第10頁/共41頁⑶家兔高血脂及動脈粥樣硬化模型動物：2kg家兔。飼料：15%蛋黃粉，0.5%膽固醇，5%豬油，80%基礎料。3周后，血清膽固醇升高，6周后，主動脈斑塊發(fā)生率可達100%，血清膽固醇升高，至2000mg/dl.也可單獨飼喂Ch，每天0.3g，4個月后出現斑塊，每天服0.5g，3個月后出現斑塊，每天服1.0g，2個月可出現斑塊。第11頁/共41頁⑷豬動脈粥樣硬化模型：高脂飼料：普通飼料中拌入15%豬油及1～1.5%膽固醇，連續(xù)飼喂1個月，血漿Ch由100mg/dl升至250～400mg/dl，6～8月后血漿Ch濃度下降，但是A及冠狀A已發(fā)生硬化，主要影響心外膜下冠狀A及其主要分支，有的動物并發(fā)心肌梗死。第12頁/共41頁⑸猴高脂血癥及動脈粥樣硬化模型動物：3-6歲恒河猴，體重3.5～10.5kg。高脂食物：50%麥粉，8%玉米粉，1%膽固醇，8%蛋黃，8%豬油，17%白糖及適量小蘇打和食鹽。加工：先將麥粉、玉米粉、麥麩發(fā)酵后加入適量小蘇打，再加入其它成分，拌勻制糕，烤箱燒熟后飼喂。喂食：自由飲水，每日限量一次蔬菜和水果。模型：一月后可造成實驗性高血脂癥，血清膽固醇較正常升高3.1～3.2倍。第13頁/共41頁二、糖尿病及其動物模型建立第14頁/共41頁糖尿病及其動物模型建立1．糖尿病概念糖尿病是遺傳因素和環(huán)境因素長期作用所致的一種慢性全身性代謝病，以持續(xù)性高血糖和尿糖為主要特征。糖尿病已成為危害人類健康的重要疾病之一，在美國，每年死于糖尿病并發(fā)癥的人數超過16萬。我國，隨著經濟發(fā)展和人們飲食結構的改變以及人口老齡化，糖尿病數量迅速增加，目前達2000多萬人，預計2010年將達到6300萬人，將居世界首位。糖尿病并發(fā)癥主要有視網膜病變，患者臟病可能性較正常人高2-4倍，患中風危險性高5倍，一半以上的老年糖尿病患者死于心血管疾病。還可導致其它多種并發(fā)癥及繼發(fā)癥。第15頁/共41頁２．糖尿病分型國際上將糖尿病分為四型：Ⅰ型、Ⅱ型、其它特異型和妊娠糖尿病四型。常見的為Ⅰ和Ⅱ型。Ⅰ型糖尿?。河址Q胰島素依賴型糖尿病。此型的發(fā)病是由于胰島β細胞受到細胞介導性自身免疫性破壞，從而導致了胰島素的絕對缺乏所致。發(fā)生原因：遺傳因素+環(huán)境因素（如病毒感染等）Ⅰ型糖尿病主要發(fā)生于兒童和青少年，也可發(fā)生在任何年齡。Ⅱ型糖尿病：又稱為非胰島素依賴型糖尿病。其特點是胰島素分泌正?；蛟龈?，但β細胞對葡萄糖制激反應減弱?；颊吣挲g多在40歲以上，常伴有肥胖，肥胖是Ⅱ型糖尿病的重要誘因之一。發(fā)生原因：遺傳因素+其它誘因。除肥胖以外，飲食結構不合理，熱量攝入過多，缺乏體力活動，吸煙等也是Ⅱ型糖尿病的誘因。第16頁/共41頁3.肥胖引起糖尿病的機制是：

胰島素受體對胰島素不敏感。病初，代償性增加胰島素分泌，形成高胰島素血癥，久而久之，胰島素的不敏感進一步發(fā)展，形成胰島作用受阻，產生胰島素抵抗，這種高胰島素血癥引起的胰島素受體敏感性下降所致的胰島素作用受阻，其實質上為胰島素相對缺乏。胰島素β細胞長期的代償分泌，最終會導致β細胞功能降低，胰島素分泌不足，則胰島素缺乏產生糖尿病。目前臨床上口服的降糖藥都有副作用，因此找降糖保健食品成為人們的關注點。降糖保健食品適用于Ⅱ型糖尿病人和空腹血糖水平處于亞健康狀況的人。第17頁/共41頁4．營養(yǎng)與糖尿病關系最密切的是碳水化合物。碳水化合物與血糖的關系與碳水化合物結構有關，不能一概而論，必須分清高糖飲食與高碳水化合物飲食的區(qū)別：高糖飲食：富含果糖、葡萄糖、蔗糖和乳糖高碳水化合物飲食：以淀粉和其它復雜碳水合物為主。第18頁/共41頁

各種碳水化合物升高血糖作用的大小以血糖指數來表示

食物名稱膳食含量（%）血糖指數（%）葡萄糖0

100

麥芽糖080-90

馬鈴薯0.780-90

早秈米1.4

70-80

白面包3.660-90

全麥面包5.850-59

燕麥6.640-49

黑豆10.230-39

扁豆13.420-29

大豆15.510-19第19頁/共41頁5．糖尿病模型⑴胰腺切除法致糖尿病模型：（需作手術）⑵化學性糖尿?、偎难踵奏ぬ悄虿∷难踵奏な且环Nβ細胞毒劑，可選擇性地損傷動物胰島β-C方法：注射法：臨用前配成1～5%水溶液，注射前應禁食24～48h，注射時應在30s內注射完成，注射越快越好。飲食上給予低蛋白和高動物脂肪食物能增加糖尿病的發(fā)生率注射后呈三個時相變化：高糖期：早期、短暫，約1～4h。低糖期：早期后約持續(xù)48h的低糖相。持久性高糖相：48h后，由于β—細胞損傷，導致持久性高血糖，形成糖尿病。大劑量四氧嘧啶可致大部分β細胞破壞，使犬、貓產生永久性糖尿病。第20頁/共41頁

三、肥胖癥與動物模型建立第21頁/共41頁肥胖癥與動物模型建立1．肥胖病發(fā)生情況肥胖病是現代社會文明病之一，過去以歐美發(fā)達國家發(fā)病率很高，現在發(fā)展中國家隨著經濟條件改善，肥胖患者也明顯增加。據報道，美國平均體重超重率達33.3%,肥胖率22%，婦女胖者已達40%；東歐較嚴重，其中有些國家婦女肥胖率高達40～50%。墨西哥婦女肥胖率也高達40%。中國成年人體重超標者達40%左右，北京市人口肥胖率竟達45%，居全國第一，南京達20%左右……，近年來呈明顯上升趨勢，而且兒童肥胖率越來越趨高。肥胖已成為社會性公共問題。第22頁/共41頁2．肥胖癥的標準體重超過標準體重10%者為超重；超過20%，且脂肪量超過30%者為肥胖；體重超標30～50%，脂肪量超過35～45%者為中度肥胖；體重超標50%以上，脂肪量超過45%以上者為重度肥胖。第23頁/共41頁3．肥胖癥的分類：可分為兩種：即單純性肥胖和繼發(fā)性肥胖。單純性肥胖主要是長期熱能攝入>消耗引起繼發(fā)性肥胖主要是由于內分泌或代謝疾病引起。各類肥胖癥中以單純性肥胖為主，約占肥胖癥的95%以上。第24頁/共41頁4．肥胖癥的病因：主要因素有：飲食，遺傳、勞作、運動、精神因素及其它疾病因素。5．肥胖癥的危害可導致心血管疾?。ǜ哐Y、高血壓、動脈硬化）、糖尿病、腫瘤、脂肪肝。第25頁/共41頁6．肥胖癥動物模型僅介紹營養(yǎng)性肥胖模型實驗動物：剛斷，SD大鼠，體重50g。飼料配方：每100g基礎飼料中加入奶粉10g，豬10g，雞旦1個，濃魚肝油10滴（含VA17000μ，

VitD1700μ），新鮮黃豆牙250g?；A飼料配方：大麥粉20%，脫水菜10%，豆粉20%，酵母1%，玉米粉16%，麥麩16%，魚粉

10%，食鹽2%。飼喂45天后，體重較對照組增加近1倍。第26頁/共41頁也可用Wistar大鼠，體重100g高熱能飼料：10%花生油，10%豬油，15%煉乳，

65%普通料。并以定量稀釋煉乳灌胃。

煉乳稀釋：500g加50ml蒸餾水。連續(xù)4周可造成肥胖模型。（高熱能飼料，每g熱能4.04kcal；普通飼料，每

2.96kcal/g）。第27頁/共41頁四、貧血癥及其動物模型建立第28頁/共41頁貧血癥及其動物模型建立1．貧血概念：

貧血是指單位容積血液中Hb、RBC及PCV低于正常的疾病。WHO的貧血標準：（以Hb低于下列值）

<6個月～6歲：11（g/100ml）

6個月～14歲：12（g/100ml）成年男性：13（g/100ml）成年女性：12（g/100ml）我國：成年男性：12.5（g/100ml）成年女性：11.0（g/100ml）第29頁/共41頁2．造血系統(tǒng)分三個時期：①卵黃囊造血期：由胚胎25天開始，在中胚層形成血島，出現多能造血干C，此期不能發(fā)育為成熟紅C。②肝脾造血期：胚胎40天后，血島中的造血干C經血流定植于肝脾，卵黃囊造血功能開始衰退，肝臟開始造血，脾臟主要產生淋巴細胞和單核細胞。③骨髓造血期：4個月胎兒，骨髓腔形成，脾臟中干C定植于骨髓，開始造血，至出生時幾乎全部由骨髓造血，并維持終生。新生兒至3歲以前，全身骨髓均可造血，稱為紅髓，隨著年齡增長，部分骨髓停止造血，5歲以后管狀骨髓內脂肪C增多，骨髓變黃，稱為黃髓。成年后，紅髓僅分布于脊椎骨、胸骨、肋骨，肩胛骨、鎖骨，顱骨等處，占體重的3.5～6%,老年后，造血機能減退。第30頁/共41頁當造血器官受到刺激時，黃髓可以轉化為紅髓而再次造血。機體造血是由造血組織中造血干C（HSC:HematopoienticStemCell）在多種調控因子的復雜調控下完成的。調控因子主要有3類：集落刺激因子（CSF:ColonyStimulatingFactor）；白細胞介素（IL:Interleukin）；造血負調節(jié)因子。第31頁/共41頁3．影響紅細胞生成的物質①Fe：與原卟啉原結合形成血紅素，缺乏時形成缺Fe性貧血。②Vit類：有B12，葉酸、B6、Vc等。

B12、葉酸及B6缺乏時造成惡性貧血。③紅細胞生成調節(jié)因子：以紅細胞生成素（EPO）為主，EPO對紅祖C向成熟RBC

發(fā)育起決定作用4．紅細胞的衰亡成熟紅C的平均壽命約為125天，每天約有7×107個紅C消亡，同時又有等量新生紅C進入血液循環(huán)。第32頁/共41頁5．貧血的類型A.按形態(tài)學分類：（即根據MCV，MCHC，MCH指標分類）①正紅C性貧血：特點:Hb、RBC降低,但MCV，MCHC屬于正常范圍，見于：急性失血性貧血，溶血性貧血及部分再障性貧血。②大紅C性貧血：特點：MCV大于正常上限。見于B12、葉酸缺乏的巨幼紅C貧血。③正色素小紅C性貧血：特點：MCV、

MCH

均降低，而MCHC正常，見于亞急性或慢性炎性疾患所致貧血。

④低色素小紅C性貧血：

MCV、

MCH、

MCHC

均下降。見于缺Fe性貧血。第33頁/共41頁貧血紅細胞形態(tài)：①橢圓形紅C：多見于巨幼紅C貧血。②靶形紅C：多見于地中海貧血。③鐮形紅C：多見于惡性貧血。④異形紅C：多見于微血管溶血性貧血。第34頁/共41頁B．貧血的病因學分類①失血性貧血：原因:

出血急性出血：急性失血性貧血慢性出血：導致缺Fe性貧血②再性障礙性貧血：原因：造血機能抑制,全能造血干C不能再生造血。這是一種進行性貧血。③溶血性貧血：原因：溶血毒素，免疫異常性溶血等，導致紅C破壞過多。④營養(yǎng)不良性貧血：原因：缺Fe，缺VB12，葉酸。

*

血紅素由Fe原子與原卟啉分子組成，其中Fe原子是運O2

功能中心，而且必須是Fe2+，才可能與O2發(fā)生不逆結合。

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B12、葉酸均參與血紅素合成，缺乏時血紅素不能合成而造成貧血。第35頁/共41頁6．貧血動物模型建立①苯肼致貧血模型

大鼠,200～250g,腹注苯肼60～80mg/kg,1～2次。②溶血性貧血模型：小鼠：靜式吸入H3AS氣體（450mg/m2