診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷培訓(xùn)課件

診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷靜脈真空采血（示教）白細(xì)胞計(jì)數(shù)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血紅蛋白測(cè)定血涂片制備及染色白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞（示教）血沉測(cè)定（示教）目前實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞測(cè)定方法內(nèi)容2診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷真空采血過(guò)程

3診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)4診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷

白細(xì)胞計(jì)數(shù)(顯微鏡法)[試劑]冰醋酸2.0ml,蒸餾水98ml,10g/L亞甲藍(lán)溶液3滴[操作]取一小試管，加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。用微量吸管采血20ul加入試管底部，用上清液吸洗2~3次，搖勻。充池后靜置2~3分鐘待白細(xì)胞下沉后用低倍鏡計(jì)數(shù)4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。[計(jì)算]白細(xì)胞數(shù)/L=4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)÷4×10×20×1065診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷[參考范圍]成人：4~10×109/L（4000~10000/ul）2013年行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：3.5-9.5×109/L兒童：5~12×109/L（5000~12000/ul）新生兒：15~20×109/L（15000~20000/ul）

[臨床意義]增高：生理性：新生兒、劇烈運(yùn)動(dòng)、妊娠晚期、極度恐懼與疼痛。病理性：大部分細(xì)菌性感染、尿毒癥、燒傷、手術(shù)后、傳染性單核細(xì)胞增多癥、白血病等。減少：病毒性感染、傷寒、副傷寒、瘧疾、再生障礙性貧血、放療、化療、非白血性白血病。[注意事項(xiàng)]1.一些貧血患者血液中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞會(huì)影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)，應(yīng)校正排除。2.加全血時(shí)，應(yīng)檫去吸管外周血液，再將標(biāo)本吹入試管底部，再吸上清液回洗幾次。3.滴入計(jì)數(shù)室內(nèi)的混懸液，液量要適當(dāng)，不得外溢或混有氣泡；計(jì)數(shù)室內(nèi)的細(xì)胞分布均勻。4.計(jì)數(shù)室邊線的白細(xì)胞，可數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右，避免重復(fù)或漏計(jì)。6診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷[試劑](可用生理鹽水)[操作]取一小試管，加紅細(xì)胞稀釋液1.99ml。用微量吸管采血10ul加入試管底部，用上清液吸洗2~3次，搖勻。充池后靜置2~3分鐘待紅細(xì)胞下沉后用高倍鏡計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。[計(jì)算]5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×5×10×106×200=紅細(xì)胞數(shù)/L[注意事項(xiàng)]紅細(xì)胞在計(jì)數(shù)池內(nèi)分布不均勻時(shí)應(yīng)重新充池紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(顯微鏡法)7診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷[試劑]血紅蛋白稀釋液(文-齊氏液)[原理]血紅蛋白中的亞鐵離子（Fe2+)被高鐵氰化鉀氧化為高鐵(Fe3+)血紅蛋白,再與氰結(jié)合成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白,在540nm波長(zhǎng)和液層厚度條件下,具有一定的吸光系數(shù)，根據(jù)吸光度，即可求得血紅蛋白濃度。[操作]取一試管，加血紅蛋白稀釋液5.0ml。用微量吸管采血20ul加入試管，用上清液吸洗2-3次，搖勻后靜置5-10分鐘待比色。血紅蛋白測(cè)定(手工比色法)8診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷由于儀器的差異,用吸光系數(shù)的方法已改為用高鐵血紅蛋白參考標(biāo)準(zhǔn)液相對(duì)比較的方法.即用一組已知濃度的HiCN參考液,在應(yīng)用的分光光度計(jì)上,分別測(cè)定其吸光度(A)。以A為衷縱坐標(biāo)，血紅蛋白值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。OD血紅蛋白（g/L)

20406080100120140160180

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1血紅蛋白測(cè)定(手工比色法)9診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷[參考范圍]RBC男：4~5.5×1012/L2013年行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)4.3-5.8×1012/L

女：3.5~5.0×1012/L3.8~5.1×1012/L

HB男：120-160g/L130-175g/L

女：110~150g/L

115~150g/L

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定的臨床意義

生理性增高：新生兒、高原居民、缺氧的應(yīng)急反應(yīng)等。

病理性增高：真性紅細(xì)胞增多癥、心臟病、脫水等。

減少：臨床各類貧血、白血病、手術(shù)后、產(chǎn)后、月經(jīng)期等。10診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷外周血片制作11診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷各種血膜比較12診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷瑞氏染色13診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷原理

瑞氏染色液主要染料由堿性美藍(lán)和酸性伊

紅兩種成分組成,它們與細(xì)胞內(nèi)的嗜酸性和嗜堿

性的各種物質(zhì)既有物理的吸附作用，又有化學(xué)

的親和作用,各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對(duì)各

種染料的親和力也不一樣，因此使細(xì)胞呈現(xiàn)出

不同的色彩。14診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷1.取1/3滴血于潔凈的玻片上推制成長(zhǎng)約3~4cm的薄血片，要求頭、體、尾清晰可見。2.室溫中自然干燥.3.瑞氏染色：加染液15滴于血膜上，待覆蓋全部血膜后加15滴緩沖液，15-20分鐘后用水沖洗干凈待干。4.選擇體尾交界的區(qū)域，用油鏡計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，根據(jù)形態(tài)特征分類并計(jì)算出百分比。瑞氏染色方法15診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷外周血正常細(xì)胞形態(tài)

（顯微鏡觀察）16診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷大小約6-9um,雙面微凹，染粉紅色，中央有小淡染區(qū)，無(wú)細(xì)胞核，溶貧、白血病、MDS、骨纖或缺鐵貧、巨幼貧治療期會(huì)出現(xiàn)幼紅細(xì)胞。正常紅細(xì)胞形態(tài)17診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷1為嗜中性分葉核，細(xì)胞胞體圓形，約10-13um，胞質(zhì)豐富，染粉紅色，含較多細(xì)小均勻的淡粉紅色中性顆粒，核2-3葉居多，核間核絲相連。2為桿狀核核呈彎曲桿狀18診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷19診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷20診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷1為嗜中性桿狀核2為嗜酸性分葉核，細(xì)胞胞體圓形，一般分兩葉，約13-15um，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大的橘黃色顆粒。21診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷嗜堿性粒細(xì)胞，細(xì)胞胞體圓形，約10-12um，胞質(zhì)紫紅色，內(nèi)有少量粗大但大小不均的黑色嗜堿性顆粒，常覆蓋于核上。22診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷淋巴細(xì)胞，可分為大淋巴和小淋巴，前者直徑10-15um，圓形，胞漿豐富，內(nèi)含少量嗜天青顆粒。后者直徑6-10um，胞體呈圓形，胞漿量少，染色質(zhì)較固縮。23診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷1為單核細(xì)胞，胞體大，直徑14-20um，圓形或不規(guī)則形，胞質(zhì)較多，灰蘭色，胞核大，核形不規(guī)則。2為嗜中性分葉核粒細(xì)胞。24診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷中性桿狀核粒細(xì)胞:0~5.0%中性分葉核粒細(xì)胞:50.0~70.0%嗜酸性粒細(xì)胞：0.5~5.0%嗜堿性粒細(xì)胞：0~1.0%單核細(xì)胞:3.0~8.0%淋巴細(xì)胞:20.0~40.0%外周血白細(xì)胞分類正常值25診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷正常血小板形如圓盤狀，直徑2-4um。功能正常的血小板在外周血片上?？删奂蓤F(tuán)或簇。26診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞是未成熟的紅細(xì)胞,紅細(xì)胞由骨髓進(jìn)入外周血，尚需24~48小時(shí)合成最后20%的血紅蛋白,其胞漿中殘存嗜堿性物質(zhì)RNA,經(jīng)堿性染料染色后，可分為4型：Ⅰ型：絲球型，無(wú)核紅細(xì)胞中央有濃密的蘭色網(wǎng)狀物。正常為0%Ⅱ型:網(wǎng)型，無(wú)核紅細(xì)胞中央有疏松大孔眼的網(wǎng)狀物。正常為0.08%Ⅲ型:破網(wǎng)型,網(wǎng)狀物減少,由點(diǎn)狀顆粒形成殘破不全的網(wǎng)狀.正常為0.15%Ⅳ型:點(diǎn)粒型,只有少數(shù)蘭色點(diǎn)狀顆?；驑O小的網(wǎng)狀殘余,散布與紅細(xì)胞內(nèi),正常人為0.56%正常值:0.5~1.5%27診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷各種網(wǎng)織紅細(xì)胞各種網(wǎng)織紅細(xì)胞包括絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點(diǎn)粒型網(wǎng)織紅細(xì)胞。A、B為煌焦油藍(lán)染色。C為煌焦油藍(lán)染色后瑞氏染液復(fù)染。28診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷原理：紅細(xì)胞沉降的速率受兩種相反方向力量的作用，即紅細(xì)胞的下沉力與血漿的阻力.離體抗凝血置于特制刻度測(cè)定管（魏氏法血沉管）內(nèi)，垂直立于室溫中，60分鐘時(shí)觀察上層血漿高度的mm數(shù)報(bào)告之。血沉試驗(yàn)

29診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷注意事項(xiàng)：血液與抗凝劑比例為４：１，充分混勻；血沉管應(yīng)垂直，管架平穩(wěn)；觀察結(jié)果必須準(zhǔn)確掌握在1h末。有些患者血沉先慢后快，有的先快后慢，因此不允許只觀察30分鐘沉降率乘以２而作1h的沉降結(jié)果。正常參考值：

男<15mm/1h

女<20mm/1h

31診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷臨床意義生理性增快病理性增快1）各種炎癥性疾病2）組織損傷及壞死3）惡性腫瘤4）各種原因所致的高球蛋白血癥5）其他：貧血、高膽固醇血癥等ESR屬非特異性試驗(yàn)，不能單憑檢驗(yàn)結(jié)果作為確定任何疾病診斷的依據(jù)，但與其他資料一起分析，可有重要參考價(jià)值。臨床上一般用于：1）動(dòng)態(tài)觀察病情變化2）良惡性腫瘤鑒別的參考3）反映血漿中球蛋白增高，考慮一些與此有關(guān)疾病的診斷和鑒別診斷ESR32診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷血細(xì)胞分析儀分析33診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷34診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷白細(xì)胞中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)嗜酸細(xì)胞百分?jǐn)?shù)嗜堿細(xì)胞百分?jǐn)?shù)紅細(xì)胞血紅蛋白平均紅細(xì)胞體積平均血小板體積血小板網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)紅細(xì)胞壓積平均血紅蛋白量平均血紅蛋白濃度中性粒細(xì)胞絕對(duì)數(shù)淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)單核細(xì)胞絕對(duì)數(shù)嗜酸細(xì)胞絕對(duì)數(shù)嗜堿細(xì)胞絕對(duì)數(shù)紅細(xì)胞分布寬度血小板壓積檢測(cè)項(xiàng)目35診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷負(fù)壓血細(xì)胞懸液外電極內(nèi)電極小孔小孔管小孔電流樣品杯小孔近觀細(xì)胞懸液在負(fù)壓的驅(qū)使下恒定流經(jīng)小孔；不良導(dǎo)體血細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)引發(fā)瞬間電阻變化；將電阻變化轉(zhuǎn)化為脈沖記錄。脈沖的數(shù)量表示細(xì)胞數(shù)量，脈沖的大小表示細(xì)胞大小。庫(kù)爾特原理三要素：小孔、負(fù)壓、電極檢測(cè)：細(xì)胞大小和數(shù)量當(dāng)一個(gè)不良導(dǎo)體顆粒，例如血細(xì)胞，通過(guò)兩個(gè)電極之間時(shí)，導(dǎo)致電路的電阻抗發(fā)生變化。白細(xì)胞計(jì)數(shù)——庫(kù)爾特原理36診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷檢測(cè)區(qū)域白細(xì)胞白細(xì)胞通過(guò)小孔庫(kù)爾特原理示波鏡37診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷一般的血細(xì)胞分析儀,原理與儀器法計(jì)數(shù)白細(xì)胞雷同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(血細(xì)胞分析儀法)38診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷血標(biāo)本在溶血素的作用下破壞紅細(xì)胞并釋放血紅蛋白與試劑中的氰化物和季胺鹽結(jié)合成穩(wěn)定的衍生物，在540nm左右有固定的吸收波峰，溶血標(biāo)本在流經(jīng)比色池時(shí)儀器根據(jù)吸光度計(jì)算出HGB的含量

血紅蛋白測(cè)定(血細(xì)胞儀法)

39診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷運(yùn)用V、C、S三種探針,在流式通道的某一位點(diǎn),對(duì)通過(guò)的單列白細(xì)胞，進(jìn)行逐個(gè)的、同時(shí)的、三重的檢測(cè)，以及三維分析,以