維生素片含量測定的方法驗證

關(guān)于維生素片含量測定的方法驗證第1頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五實驗原理維生素B1又稱鹽酸硫胺（thiaminehydrochloride），化學(xué)名稱為氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羥基乙基噻唑鎓鹽酸鹽

第2頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五性質(zhì)溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反應(yīng)：紫外吸收特性：Amax=246nm與生物堿沉淀試劑反應(yīng)氯化物特性：特征性鑒別含量測定氯化物檢查第3頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五原理特征性鑒別——硫色素反應(yīng)

維生素B1在堿液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，色素轉(zhuǎn)溶于正丁醇(或異丁醇、異戊醇)中，顯現(xiàn)于酸中消失的藍色熒光。（見劉文英主編《藥物分析》第六版，P258）含量測定

維生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，第4頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五實驗方法鑒別反應(yīng)

取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml使其溶解，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使成兩液層，上層醇液即顯強烈的藍色熒光，加酸使成酸性熒光即消失，再加堿使成堿性，則熒光復(fù)現(xiàn)。第5頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五含量測定1.精密稱取片粉40.98mg(相當于維生素B125mg，標示量為每1g藥物中含有0.164g維生素B1)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）約70ml，搖勻15分鐘使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→干燥濾紙過濾→精密量取續(xù)濾液5.0ml，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（9→1000）定容至刻度，搖勻→得到供示品溶液。第6頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五含量測定2.精密稱取維生素B1對照品25mg，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（9→1000）定容至刻度，搖勻→得到對照品溶液。3.將2份溶液用紫外分光光度計在246nm處分別測定吸光度，計算即得。第7頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五實驗內(nèi)容與要求鑒別試驗吸收波長選擇精密度試驗：用同一份樣品溶液測定6次，計算RSD%重復(fù)性試驗：引用其他組同學(xué)數(shù)據(jù)（稱樣量，吸光度）計算標示量%，計算RSD%穩(wěn)定性試驗：考察樣品溶液30min內(nèi)的穩(wěn)定性，計算RSD%加樣回收率試驗：根據(jù)重復(fù)性試驗的結(jié)果，設(shè)計加樣回收率試驗含量測定：根據(jù)測定結(jié)果計算含量，標示量%。如何引用？第8頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五

線性關(guān)系和范圍分析方法的驗證1精密度試驗2重現(xiàn)性試驗3加樣回收試驗4穩(wěn)定性試驗5第9頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五線性與范圍精密稱取片粉40.98mg(相當于維生素B125mg)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→分別取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）至刻度，搖勻→將其置于紫外分光光度計中在246nm處測量→并用C做A的回歸曲線。第10頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五線性關(guān)系序號12345濃度（mg/ml）測定值第11頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五穩(wěn)定性試驗精密稱取片粉40.98mg(相當于維生素B125mg)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）少量，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→將其置于紫外分光光度計中在246nm處測量→在0、15、30、45、60min時間點分別測定樣品的A246→在0、1、2、4、8、12h分別測定樣品的峰面積.RSD<2.0%，則說明樣品溶液在多少時間內(nèi)穩(wěn)定；RSD>2.0%，則需要重新選取時間點進行計算，直到RSD<2.0%，否則要盡快測定第12頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五精密度試驗?zāi)康臋z測儀器、試劑、操作人員、實驗條件等的可信程度要求用對照品按樣品溶液的制備方法制備對照品溶液，同濃度至少平行操作6份，濃度與信號值要在線性范圍內(nèi)RSD<2.0%……儀器分析第13頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五同批、同法序號時間(min)信號值平均信號值RSD（%）RSD（%）1234567穩(wěn)定性試驗第14頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五重現(xiàn)性試驗?zāi)康目疾鞓悠啡芤褐苽浞椒ǖ目煽砍潭纫笸鷺悠钒聪嗤椒ㄖ苽錁悠啡芤?，至?份,濃度與信號值均要在線性范圍內(nèi)RSD<2.0%

……儀器分析第15頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五重現(xiàn)性試驗(示例)試驗序號稱樣量（g）測定值（mg）含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.166622.04132.29134.530.3%<2.0%20.166724.82148.8930.166921.90131.2240.174223.54135.1350.166720.86125.136………第16頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五精密度試驗（示例）實驗序號信號值平均值RSD10.5120.5100.2%(<2.0%)20.50830.51140.50950.51060.509第17頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五加樣回收率試驗?zāi)康目疾鞙蚀_度，即用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度要求設(shè)計高、中、低三個濃度，每個濃度各分別制備三份供試品溶液進行測試，計算回收率RSD<2.0%第18頁，共20頁，2023年，2月20日，星期五加樣回收試驗序號稱樣量（g）待測組分含量（mg）對照品加入量（mg）測得量（mg）回收率（%）平均加樣回收率（%）RSD（%）10.1665.2820.250015.027.2100.130.251240.250953.0450.250015.029.