NY/T 569-2002馬傳染性貧血病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法

5S.11.220NY141中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T569-2002馬傳染性貧血病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法Agargeiimmunodiffusiontestforequineinfectiousanemia2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T569-2002馬傳染性貧血?。╡quineinfcetiousanemia,簡稱EIA)是馬屬動物以反復發(fā)作、貧血和持線病毒血癥為特征的傳染性疾病，被世界動物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）,OfficeIn-ternationaldesEpizooties(法),IEJ列為B類疫病，我國農(nóng)業(yè)部列為二類動物疫病。本病是由反轉(zhuǎn)錄病毒科、慢病毒屬的馬傳貧病毒(ELAV)引起的，經(jīng)吸血昆蟲傳播本標準規(guī)定的瓊脂凝膠免疫擴散試驗(AGID)診斷方法，是根據(jù)（IE《診斷試驗和變苗標準手冊》（2000年版)和我國實際情況制定的·技術(shù)上一致。該法簡便特異，在國際貿(mào)易中為指定的診斷方法。本標準的附錄八為規(guī)范性附錄。本標準由農(nóng)業(yè)部童牧獸醫(yī)局提出本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口，本標準起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所。本標準主要起草人：相文華、沈榮顯。

NY/T569-2002馬傳染性貧血病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法1范圍本標準規(guī)定了馬傳染性貧血病的瓊脂凝膠免疫擴散技術(shù)要求。本標準適用于馬傳染性貧血病的診斷和檢疫2瓊脂凝膠免疫擴散試驗2.1材料準備2.1.1抗原：檢測用抗原按說明書使用2.1.2血清：“）檢驗用標準陽性血清：能與合格抗原在12h內(nèi)產(chǎn)生明顯致密沉淀線的傳貧馬血清,做8倍以上的稀釋仍保持陽性反應者為宜。小量分裝，凍結(jié)保存。b）被檢血清：不含防腐劑和抗凝劑的被檢馬血清。2.1.3pH7.20.01mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS），配制方法見附錄A規(guī)范性附錄)。2.2操作方法2.2.1制備瓊脂板2.2.1.1取優(yōu)質(zhì)瓊脂1.0g,直接放入含有萬分之一硫柳汞的100ml.的PBS中，用熱水浴溶化混勾2.2.1.2將直徑90mm的平血放在水平臺上，每平血倒入熱溶化瓊脂液15mL～18mL,厚度約2.5mm左右，注意不要產(chǎn)生氣泡,冷凝后加蓋,把平血倒置，防止水分蒸發(fā)，放在普通冰箱中可保存兩周左右。根據(jù)受檢血清樣品多少亦可采用大、中、小三種不同規(guī)格的玻璃板。10cmX16cm的玻璃板加注熱瓊脂液40mL:6cm×7cm的加注11mL:3.2cm×7.6cm的加注6mL.配成的瓊脂液，可裝瓶中用膠塞蓋好,以防水分蒸發(fā)，待使用時，現(xiàn)溶化現(xiàn)制板.2.2.2打孔反應孔現(xiàn)用現(xiàn)打。在坐標紙上畫好七孔型圖案。把坐標紙放在帶有瓊脂板的平血或玻璃板下面,照圖案在固定位置上用金屬管打孔，將切下的瓊脂片取出，勿使瓊脂膜與玻璃面離動?？乖准巴庵芸卓讖骄鶠?mm,孔間距3mm(見圖1