楊愛平FACSCanto流式細(xì)胞儀原理

FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀原理及應(yīng)用楊愛平主要內(nèi)容什么是流式細(xì)胞儀？流式細(xì)胞儀可告訴我們—細(xì)胞相關(guān)知識流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)臨床檢測：TBNK、HLA-B27流式熒光補(bǔ)償知識（略）什么是流式細(xì)胞儀？在流動的狀態(tài)中檢測細(xì)胞各種物理及生物特征的一種儀器；InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid聚焦的激光光束流式細(xì)胞儀特點(diǎn)及檢測標(biāo)本特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，并能實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析；可檢測的樣本種類多樣(1)外周血，骨髓，細(xì)針穿刺，洗脫液，實(shí)體組織，培養(yǎng)細(xì)胞(2)血清、血漿、培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液FACSCanto

II流式細(xì)胞儀系統(tǒng)組成流式細(xì)胞儀液流車（鞘液、shutdown液、cleaning液、工作液）工作站（結(jié)果分析、處理系統(tǒng)）FACSCantoⅡ簡介配置空冷激光兩根激光:488nm、633nm、光路固定，無需調(diào)校液流系統(tǒng)信號檢測系統(tǒng)八角形和三角形光學(xué)收集系統(tǒng)，將光信號轉(zhuǎn)換成電信號電子系統(tǒng)將電信號轉(zhuǎn)換成數(shù)字化信號磁珠分選常用熒光染料的特性熒光染料激發(fā)波長(nm)發(fā)射波長(nm)用途顏色*FITC488525免疫熒光綠色(CD3)*PE(RD1)488575免疫熒光橙色(CD4)*PerCP 488 670免疫熒光深紅(CD16+56)APC633 670免疫熒光紅色PI488620DNA染色橙紅ECD488620免疫熒光橙紅PeCy5488675免疫熒光紅*最常用三種熒光染料熒光信號的特征常見熒光染料的發(fā)射波長

常用熒光染料(488nm,633nm激發(fā))Fluorescein

Isothiocyanate(FITC)異硫氰酸熒光素Phycoerythrin(PE)藻紅素Allophycocyanin(APC)異藻藍(lán)蛋白Peridinin-ChlorophyllProtein(PerCP)多甲藻黃素-葉綠素蛋白TandemDyesPE-TexasRed(ECD)PE-Cy5(PC5)PE-Cy5.5(PC5.5)(futures)PE-Cy7(PC7)(futures)FACSCantoⅡ信號檢測組件光學(xué)濾片用于調(diào)整光譜的分布。當(dāng)光子遇到濾片時，光子或通過濾片，或被濾片吸收，或被濾片反射。長通濾片（LP）：長于設(shè)定波長的光通過，并反射短于設(shè)定波長的光帶通濾片：允許一定帶寬波長的光通過。短通濾片（SP):短于設(shè)定波長的光通過，并反射長于設(shè)定波長的光流式細(xì)胞儀如何檢測細(xì)胞指標(biāo)?細(xì)胞的相對大小及表面積（前向角散射光信號，F(xiàn)SC）細(xì)胞的相對顆粒性及內(nèi)部結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性（側(cè)向散射光信號，SSC）相關(guān)的熒光強(qiáng)度前向角散射光信號FSC側(cè)向角散射光信號SSC散射光信號的特征紅細(xì)胞裂解的全血液流系統(tǒng)-樣本流速樣本流速的選擇高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度快,但分辨率低.低流速：一般用于對分辨率要求較高的分析，如DNA分析。流式細(xì)胞儀可以告訴我們什么？細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外發(fā)生了什么事件？流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒細(xì)胞表面積核漿比例DNA含量和周期RNA含量蛋白質(zhì)含量……細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)/外因子激素結(jié)合位點(diǎn)、細(xì)胞受體蛋白磷酸、PH、鈣離子濃度……細(xì)胞生理學(xué)研究細(xì)胞相對大小和顆粒性分析細(xì)胞周期分析DNA含量分析-PI染色細(xì)胞周期分析DNA含量分析細(xì)胞凋亡細(xì)胞膜分析-PS外翻

PS（磷脂酰絲氨酸）正常暴露在胞膜的內(nèi)表面，凋亡時，PS外翻向細(xì)胞外表面。重組蛋白Annexin-V可與PS結(jié)合淋巴細(xì)胞亞群分析T淋巴細(xì)胞（CD3+），與細(xì)胞免疫有關(guān)總T