食品安全熱點(diǎn)物質(zhì)的測(cè)定

食品飼料檢驗(yàn)食品安全熱點(diǎn)物質(zhì)的測(cè)定一、概述近年來(lái)，人們食品安全意識(shí)的警醒，前所未有關(guān)注食品中存在的有害物質(zhì)。蘇丹紅事件、奶粉事件、瘦肉精事件等；早起，買(mǎi)兩根地溝油油條,切個(gè)蘇丹紅咸蛋，沖杯三聚氰氨奶。中午，瘦肉精豬肉炒農(nóng)藥韭菜，再來(lái)一份人造雞蛋和注膠牛肉，加一碗石蠟翻新陳米飯，泡壺香精茶葉。下班，尿素豆芽，膨大西紅柿，石膏豆腐，開(kāi)瓶甲醇勾兌酒，吃個(gè)增白劑加吊白塊和硫磺饅頭……為遏制添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑的違法犯罪行為，衛(wèi)生部公布了第一批食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單和食品加工過(guò)程中易濫用的食品添加劑品種名單（P180）二、二噁英的測(cè)定二噁英的全名為多氯代二噁英，英文名稱(chēng)為Dioxins或PoIychlorodibenzodioxins，簡(jiǎn)稱(chēng)PCDDs，是一類(lèi)三環(huán)芳香族化合物。與多氯代二英共存的常有多氯代苯并呋喃，簡(jiǎn)稱(chēng)PCDFs，其母核的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖。按苯上氯原子的數(shù)目和位置不同，多氯代二噁英共有75種同系物和異構(gòu)體，多氯代苯并呋喃共有135種同系物和異構(gòu)體。二噁英(Dioxin),又音譯為戴爾辛,是多氯甲苯和多氯乙苯類(lèi)有機(jī)化學(xué)品的俗稱(chēng),因其毒性是氰化鈉的130倍、砒霜的900倍,故被稱(chēng)為“毒中之毒”。1998年3月,比利時(shí)一些養(yǎng)雞場(chǎng)出現(xiàn)雞不生蛋、肉雞生長(zhǎng)異常等現(xiàn)象,遂懷疑飼料有問(wèn)題。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn),這是由于比利時(shí)9家飼料公司生產(chǎn)的飼料中含有致癌物質(zhì)二噁英所致。其中一家飼料廠的飼料用脂肪的二噁英含量超過(guò)允許限量200倍以上。買(mǎi)走這批飼料的養(yǎng)殖場(chǎng)超過(guò)1500家,包括比利時(shí)的400多家養(yǎng)雞廠、70家養(yǎng)牛場(chǎng)和500余家養(yǎng)豬場(chǎng)。這批飼料也已售往德國(guó)、法國(guó)、荷蘭等國(guó)。1997年2月14日世界衛(wèi)生組織宣布二噁英家族中的2、3、7、8—四氯二苯并二噁英是已知致癌物中的頭號(hào)致癌物質(zhì)。自然界中不存在天然的二噁英。二惡英完全是由于人為污染造成的。二噁英中毒是逐步積累引起的,如果人大量食用此類(lèi)“污染雞”,就有可能導(dǎo)致癌癥。由于二噁英具有脂溶性,可在肉、奶制品和魚(yú)類(lèi)的脂肪中富集。因哺乳期嬰兒需要乳制品的量較大,故較易受到二噁英的危害。二噁英污染事件使比利時(shí)蒙受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)比利時(shí)政府公布的材料,比利時(shí)共有5000個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng),只有900個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)使用了被二噁英污染的飼料,就是說(shuō)大多數(shù)雞肉和蛋并沒(méi)有受到污染。由于檢測(cè)雞肉和蛋中的二噁英必須使用超微量方法,費(fèi)時(shí)費(fèi)錢(qián),不可能普遍檢測(cè),所以比利時(shí)全國(guó)的雞肉和蛋只好不分青紅皂白全部銷(xiāo)毀,經(jīng)濟(jì)損失之大不言而喻。而且破壞了公眾的消費(fèi)信心,造成技術(shù)性失業(yè),沖擊出口市場(chǎng),最終對(duì)比利時(shí)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)產(chǎn)生負(fù)面影響。據(jù)比利時(shí)農(nóng)業(yè)工會(huì)統(tǒng)計(jì),比利時(shí)有1000萬(wàn)只被認(rèn)為是受污染的肉雞和蛋雞被屠宰銷(xiāo)毀。這一事件造成的直接損失達(dá)3.55億歐元,如果加上與此關(guān)聯(lián)的食品工業(yè),損失已超過(guò)10億歐元。(二)二噁英的主要來(lái)源

①含氯化合物的生產(chǎn)和使用。這些含氯化合物主要包括：作為農(nóng)藥或防腐劑的氯酚類(lèi)、作為除草劑的氯代苯氧酸型除草劑、被廣泛用于電器設(shè)備的多氯聯(lián)苯(PCBs)類(lèi)、造紙行業(yè)的紙漿加氯漂白等。②垃圾的焚燒。垃圾的不充分燃燒可產(chǎn)生大量的有害化合物。如含有聚氯乙烯塑料的垃圾在焚燒過(guò)程中可能產(chǎn)生酚類(lèi)化合物和強(qiáng)反應(yīng)性的氯和氯化氫等，這些物質(zhì)是合成二嗯英的前體物。醫(yī)院廢棄物中含有鹵代化合物，焚燒時(shí)釋放的二噁英含量高于生活垃圾，廢水處理后的污泥經(jīng)脫水后進(jìn)行焚燒處理也可釋放二噁英，其含量較生活垃圾稍低。

③煤、石油、汽油、瀝青等的燃燒。汽油的不完全燃燒致使汽車(chē)排出的尾氣中也含有二噁英。④含除草劑的枯草殘葉的燃燒及森林大火也會(huì)產(chǎn)生二噁英。(三)二噁英的檢測(cè)二噁英含量最常用的分析方法是高分辨率氣相色譜-質(zhì)譜法，對(duì)氯取代基小于7個(gè)的PCDDs和PCDFs的測(cè)定，選用極性毛細(xì)管色譜柱，質(zhì)譜儀分辨率至少要在10000以上。

現(xiàn)在的分析方法還不能完全將其所有的異構(gòu)體進(jìn)行分離檢測(cè)。二噁英檢測(cè)的一般性方法。1．二噁英的提取方法①堿分解法針對(duì)于蛋白質(zhì)或脂肪含量高的樣品。

②丙酮一正己烷提取法

針對(duì)蔬菜類(lèi)樣品③草酸鈉一乙醇一乙醚一正己烷提取法針對(duì)于牛奶樣品

2．常用的凈化方法①濃硫酸與多層硅膠柱處理法②硅膠柱層析處理法③其他凈化方法：氧化鋁柱層析法、聚酰胺色譜分離方法或透析法等3．分析方法

GC—MS分析法。原理：應(yīng)用高分辨氣相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，在質(zhì)譜分辨率大于10000的條件下，通過(guò)精確質(zhì)量測(cè)量檢測(cè)目標(biāo)化合物的兩個(gè)離子，獲得目標(biāo)化合物的特異性響應(yīng)。以目標(biāo)化合物的同位素標(biāo)記化合物為定量?jī)?nèi)標(biāo)，采用穩(wěn)定性同位素稀釋法準(zhǔn)確測(cè)定食品中2，3，7，8位氯取代PCDD/Fs和DL-PCBs的含量；并以各目標(biāo)化合物的毒性當(dāng)量因子（TEF）與所測(cè)得的含量相乘后累加，得到樣品中二惡英及其類(lèi)似物的毒性當(dāng)量（TEQ）目前，HRGC/HRMS法是被認(rèn)可的二惡英標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，如美國(guó)的EPA1613方法和日本工業(yè)用的JISK0311方法。它們具有檢測(cè)靈敏度高和能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)離子等優(yōu)點(diǎn)，但所要求的樣品前處理過(guò)程非常復(fù)雜，導(dǎo)致檢測(cè)成本上升，一般檢測(cè)1個(gè)樣品需要900～1800美元。檢測(cè)工作只能在少數(shù)專(zhuān)業(yè)化程度較高的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，而建造二惡英專(zhuān)業(yè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室一般需要投資數(shù)百萬(wàn)美元以上。所有這些不利因素都制約著對(duì)二惡英開(kāi)展大規(guī)模、大范圍的低成本檢測(cè)與研究。

三、蘇丹紅的檢測(cè)“蘇丹紅”并非食品添加劑，而是一種化學(xué)染色劑。該物質(zhì)具有偶氮結(jié)構(gòu)，由于這種化學(xué)結(jié)構(gòu)的性質(zhì)決定了它具有致癌性，對(duì)人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用。蘇丹紅屬于化工染色劑，主要是用于石油、機(jī)油和其他的一些工業(yè)溶劑中，目的是使其增色，也用于鞋、地板等的增光。又名“蘇丹”。

我們?nèi)粘Ｊ秤玫目赡芎小疤K丹紅一號(hào)”的產(chǎn)品包括蝦色拉、泡面、熟肉、餡餅、辣椒粉、調(diào)味醬等。

為何“蘇丹紅”嗜辣？一位業(yè)內(nèi)人士分析，之所以將作為化工原料的蘇丹紅添加到食品中，尤其是運(yùn)用于辣椒產(chǎn)品加工當(dāng)中：一是，由于蘇丹紅用后不容易褪色，這樣可以彌補(bǔ)辣椒放置久后變色的現(xiàn)象，保持辣椒鮮亮的色澤；二是，一些企業(yè)將玉米等植物粉末用蘇丹紅染色后，混在辣椒粉中，以降低成本牟取利益。

蘇丹紅具有致突變性和致癌性，蘇丹紅(1號(hào))在人類(lèi)肝細(xì)胞研究中顯現(xiàn)可能致癌的特性。但目前只是在老鼠實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有致癌性，對(duì)人體的致癌性還沒(méi)有明確。蘇丹紅是一種化工染色劑，在食品中添加的數(shù)量微乎其微，就劑量而言，未必足以致癌，因此不必過(guò)于恐慌。少量食用不可能致癌，即使食用半年，每次少量食用，引起癌癥也沒(méi)有明確的科學(xué)依據(jù)。市民不用因?yàn)槌粤艘稽c(diǎn)就擔(dān)心致癌。專(zhuān)家認(rèn)為，“蘇丹一號(hào)”雖然會(huì)增加食用者患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，但目前無(wú)法確定一個(gè)安全度。3方法要點(diǎn)樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜-紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。7操作方法7.1樣品處理7.1.1紅辣椒等粉狀樣品稱(chēng)取1～5g樣品于三角瓶中，加入10～30mL正己烷，超聲5min，過(guò)濾，用10mL正己烷洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，至洗出液無(wú)色，合并正己烷液，用旋蒸儀濃縮至5mL以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，為保證層析效果，在柱中保持正己烷液面為2mm左右時(shí)上樣，在全程的層析過(guò)程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入層析柱?？刂蒲趸X表層吸附的色素帶寬宜小于0.5cm，待樣液完全流出后，視樣品中含油類(lèi)雜質(zhì)的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至洗出液無(wú)色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脫，收集、濃縮后，用丙酮轉(zhuǎn)移并定容至5mL，經(jīng)0.45um有機(jī)濾膜過(guò)濾后待測(cè)。四、吊白塊的檢測(cè)近年來(lái)，一些食品生產(chǎn)加工廠家把"吊白塊"添加到米、面、腐竹、食糖等食物中進(jìn)行增白，從而引發(fā)了許多違禁使用"吊白塊"的案例，廣西玉林5所學(xué)校一次中毒學(xué)生人數(shù)竟達(dá)400人。那么"吊白塊"究竟為何物呢？

“吊白塊”是一種化學(xué)物質(zhì)的俗名，其化學(xué)名稱(chēng)是甲醛次硫酸氫鈉（Sodium

formaldehyde

sulfoxylate），分子式為NaHSO2

·

CH2O

·ZH2O，呈白色塊狀或結(jié)晶性粉狀，溶于水，常溫時(shí)較為穩(wěn)定，因在高溫下有極強(qiáng)的還原性，使其具有漂白作用，遇酸即分解，其水溶液在60℃以上就開(kāi)始分解為有害物質(zhì)，120℃以下分解為甲醛、二氧化碳和硫化氫等有毒氣體。"吊白塊"主要在印染工業(yè)中作為撥染劑而使用。上述有毒氣體可使人頭痛、乏力、食欲差，嚴(yán)重時(shí)甚至可致鼻咽癌等。甲醛急性中毒表現(xiàn)為噴嚏、咳嗽、視物模糊、頭暈、上腹痛、嘔吐等癥狀，隨病情加重，出現(xiàn)聲音嘶啞、胸痛、呼吸困難、咽喉與肺腦等部位水腫、腸胃穿孔出血、昏迷及休克等癥狀。

國(guó)際癌癥研究組織也指出，長(zhǎng)期接觸甲醛者鼻腔或鼻咽部發(fā)生腫瘤、癌變的機(jī)會(huì)會(huì)明顯增加。

"吊白塊"被一些不法廠商用作增白劑在食品加工中添加，使一些食品如米粉、面粉、粉絲、銀耳、面食品及豆制品等色澤變白，有的還能增強(qiáng)韌性，不易腐爛變質(zhì)。盡管"吊白塊"有增白作用，但由于其危害人體健康，所以我國(guó)禁止在食品中添加"吊白塊"。分光光度法1、原理

在酸性條件下，對(duì)樣品進(jìn)行蒸餾，餾出物用水吸收，吸收液中的甲醛與乙酰丙酮及銨離子反應(yīng)，生成黃色物質(zhì)，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。在另一酸性條件下，對(duì)樣品重新進(jìn)行蒸餾，餾出物用2％乙酸鉛水溶液吸收，吸收液酸化后，用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定測(cè)定二氧化硫含量。

2、主要儀器與試劑

2.1、分光光度計(jì)

2.2、磷酸(AR級(jí))

2.3、乙酰丙酮溶液：在100ml蒸餾水中加入醋酸銨25g，冰醋酸3ml和乙酰丙酮0?4ml，振搖促溶，儲(chǔ)備于棕色瓶中，此液可保存1個(gè)月。

2.4、甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：吸取10ml甲醛(38～40％)，移入500ml容量瓶中，加入0.5ml硫酸(1＋35)，加水稀釋至刻度，混勻。吸取5ml，置于250ml碘量瓶中，加0.1mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液50ml，1mol/LKOH溶液20ml，在室溫放置15min后，加10％硫酸15ml酸化，再放置15min后，加入50ml蒸餾水，用0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至草黃色，加入新配制的0.5％淀粉指示劑1ml，繼續(xù)滴定至蘭色消失為終點(diǎn)，同時(shí)做空白試驗(yàn)。甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度計(jì)算：

X=（V1－V2）×C×15／52.5、甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液

將標(biāo)定后的甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水稀釋至5μg/ml。

3、操作步驟

3.1、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備

分別吸取0，0.50，1.00，3.00，5.00，7.00ml甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0，2.5，5.0，15.0，25.0，35.0μg甲醛)于25ml比色管中，補(bǔ)充蒸餾水至10ml，加入1ml乙酰丙酮溶液(2.3)，混勻，置沸水浴中3min，取出冷卻，于415nm波長(zhǎng)處，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，用1cm比色皿進(jìn)行比色，根據(jù)測(cè)得的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

3.2、樣品處理

稱(chēng)取經(jīng)粉碎的樣品5～10g，置于500ml蒸餾瓶中，加入蒸餾水200ml，磷酸(2.2)15ml，立即進(jìn)行加熱蒸餾，冷凝管下口應(yīng)事先插入盛有10ml蒸餾水且置于冰浴的容器中。收集蒸餾液約180ml，定容至200ml，另作空白蒸餾。

3.3、顯色操作

視所檢試樣中吊白塊含量高低，吸取2～10ml蒸餾液(3.2)，補(bǔ)充蒸餾水至10ml，加入1ml乙酰丙酮溶液(2.3)，混勻，置沸水浴中3min，取出冷卻，于415nm波長(zhǎng)處，以蒸餾水調(diào)節(jié)零點(diǎn)，用1cm比色皿進(jìn)行比色，根據(jù)測(cè)得的吸光值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算結(jié)果。4、計(jì)算

X1=

（V2×W1×5.133）/（W2×V2×V3

）

式中：X1—試樣中吊白塊的含量，mg/kg；

V1—樣品管相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管體積，ml；

W1—每ml甲醛標(biāo)準(zhǔn)液含甲醛量，μg;

W2—試樣重，g;

V2—顯色操作所取蒸餾液體積，ml；

V3—蒸餾液總體積，ml；

5.133—甲醛換算為吊白塊系數(shù)。

注：若將磷酸改為1＋1的鹽酸，蒸餾液用2％乙酸鉛溶液吸收，通過(guò)對(duì)該吸收液二氧化硫的測(cè)定，可作為在甲醛存在下確定是否有吊白塊的依據(jù)。五、三聚氰胺的檢測(cè)

三聚氰胺是一種用途廣泛的基本有機(jī)化工中間產(chǎn)品，最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲醛樹(shù)脂（MF）的原料。三聚氰胺還可以作阻燃劑、減水劑、甲醛清潔劑等。裝飾面板

涂料

模塑粉

紙張

主要用途認(rèn)識(shí)三聚氰胺（Melamine）

C3N6H6，結(jié)構(gòu)式物理化學(xué)性質(zhì)純白色單斜棱晶體，無(wú)味，常壓熔點(diǎn)354℃，溶于熱水、甲醇等，不溶于醚、苯和四氯化碳。弱堿性，與鹽酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺鹽。結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)為什么添加三聚氰胺

凱氏定氮法假蛋白的原理無(wú)色無(wú)味高氮含量奶制品中摻入三聚氰胺的變化蛋白質(zhì)中含氮量平均為16%。以某合格牛奶蛋白質(zhì)含量為2.8%計(jì)算，含氮量為0.44%，某合格奶粉蛋白質(zhì)含量為18%計(jì)算，含氮量為2.88%。三聚氰胺含氮量66.6%，是牛奶的151倍，是奶粉的23倍三聚氰胺的花費(fèi)只有真實(shí)蛋白原料的1/5。酶聯(lián)免疫法（ELISA）高效液相色譜法（HPLC）氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS或GC-MS\MS）

液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS\MS）食品中三聚氰胺的常用檢測(cè)方法高效液相色譜法（HPLC）提取/制樣凈化（SPE）

檢測(cè)LC-UV實(shí)驗(yàn)流程稱(chēng)樣離心超聲提取過(guò)柱氮吹定容檢測(cè)詳細(xì)過(guò)程定容奶制品中三聚氰胺提取

稱(chēng)取奶粉2.5g或液態(tài)奶5g于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL1%的三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超聲提取10min，以不低于4000rpm轉(zhuǎn)速離心10min，上清液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中并用三氯乙酸定容，移取5mL濾液加入5mL水混勻后待凈化。SPE凈化SPE凈化原理圖PCX固相萃取柱

苯磺酸化聚苯乙烯/二乙烯苯樹(shù)脂磺酸化,可以交換陽(yáng)離子化的三聚氰胺?；罨?mL甲醇，3mL水上樣：上清液過(guò)柱淋洗：3mL水，3mL甲醇，抽干洗脫：5mL5%氨化甲醇洗脫并收集濃縮：50℃，氮?dú)獯蹈桑?0%甲醇/水定容至1mLSPE裝置SPE小柱SPE操作過(guò)程解要解要提取三氯乙酸：使三聚氰胺充分離子化乙腈：沉淀蛋白活化1柱管體積甲醇，1柱管體積水/酸性緩沖溶液上樣流速不要過(guò)快<1ml/min淋洗水/酸性緩沖溶液，甲醇；抽干把柱中的水完全抽干，保證洗脫效果，避免進(jìn)入水對(duì)濃縮造成的麻煩洗脫堿性環(huán)境（>pka=2），使目標(biāo)物去離子化,流速不要過(guò)快<1ml/min測(cè)定參考條件a)色譜柱：

C8柱，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相當(dāng)者；

C18柱，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相當(dāng)者。b)流動(dòng)相：

C8柱，離子對(duì)試劑緩沖液-乙腈（85+15，體積比），混勻。

C18柱，離子對(duì)試劑緩沖液-乙腈（90+10，體積比），混勻。c)流速：1.0mL/min。d)柱溫：40℃。e)波長(zhǎng)：240nm。f)進(jìn)樣量：20μL。辛烷磺酸鈉原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)（GBT22400-2008原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)-液相色譜法）提?。悍Q(chēng)取混合均勻的15g原料乳樣品（精確至0.01g），置于50ml具塞刻度試管中，加入3ml乙腈，劇烈震蕩6min，加水定容至滿(mǎn)刻度，充分混勻后靜止3min，過(guò)濾后，進(jìn)液相分析色譜條件色譜柱：強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱，VenusilSCX-M，250mm×4.6mm（i.d.），5μmVenusilSCX-M保護(hù)柱，10mm×4.6mm（i.d.），5μm流動(dòng)相：0.05ml/L磷酸二氫鉀緩沖溶液∶乙腈＝70∶30流速：1.5mL/min；柱溫：室溫。檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；進(jìn)樣量：20μL。原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)圖1空白原奶色譜圖

圖2空白原奶添加10ppm三聚氰胺色譜圖食品中三聚氰胺的檢測(cè)固體樣品稱(chēng)取2.5g試樣于50mL具塞塑料離心管中，用5mL水潤(rùn)濕樣品，加入2.5mL三氯乙酸溶液和5mL無(wú)水乙醇，混勻后以不低于4000r/min離心10min，上清液倒出并定容至25mL，混勻后取部分溶液于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL三氯甲烷搖勻以除去樣品中的脂肪后以不低于4000r/min離心10min，上清液過(guò)微孔濾膜后供HPLC測(cè)定。液體樣品稱(chēng)取混合均勻的樣品5g置于25ml具塞比色管中，加入2.5mL三氯乙酸溶液和5mL無(wú)水乙醇，劇烈震蕩搖勻，加水定容至刻度，充分混勻后靜止3min，取部分溶液于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL三氯甲烷搖勻以除去樣品中的脂肪后以不低于4000r/min離心10min，上清液過(guò)微孔濾膜后供HPLC測(cè)定。HPLC參考條件色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm(i.d.),5um；流動(dòng)相：緩沖液+乙腈=90+10；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；波長(zhǎng)：235nm；進(jìn)樣量:20uL。離子對(duì)試劑緩沖液:準(zhǔn)確稱(chēng)取2.16g辛烷磺酸鈉和2.30g檸檬酸，加水溶解，用氨水（1ml）調(diào)節(jié)pH至3.7后，用水定容至1000ml，混合均勻。三聚氰胺標(biāo)樣色譜圖及光譜圖含三聚氰胺樣品色譜圖及光譜圖六、瘦肉精的檢測(cè)瘦肉精是一類(lèi)藥物，而不是一種特定的物質(zhì)，是指能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)的飼料添加劑。任何能夠促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制肥肉生長(zhǎng)的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。它是一種腎上腺類(lèi)神經(jīng)興奮劑。

目前，能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能的物質(zhì)是一類(lèi)叫做β-興奮劑（β-agonist）的藥物，比如在中國(guó)造成中毒的克倫特羅（clenbuterol）和美國(guó)允許使用的萊克多巴胺/又譯雷托巴胺（Ractopamine）。

在中國(guó)，通常所說(shuō)的“瘦肉精”則是指鹽酸克倫特羅。它曾經(jīng)作為藥物用于治療支氣管哮喘，后由于其副作用太大而遭禁用。其它這樣類(lèi)似藥物還有沙丁胺醇（Salbutamol）和特布他林(Terbutaline)等，同樣能起到“瘦肉”作用、卻對(duì)人體健康危害過(guò)大，因而造成安全隱患。它們也因而在全球遭到禁用。瘦肉精的作用

“瘦肉精”能使豬提高生長(zhǎng)速度，增加瘦肉率，豬毛色紅潤(rùn)光亮，收腹，賣(mài)相好；屠宰后，肉色鮮紅，脂肪層極薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿(mǎn)。肥豬飼喂瘦肉精后，逐漸發(fā)生四肢震顫無(wú)力，心肌肥大心力衰竭等毒副作用。

豬食用后在代謝過(guò)程中促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，加速脂肪的轉(zhuǎn)化和分解，提高了豬肉的瘦肉率，因此稱(chēng)為瘦肉精。它用量大、使用的時(shí)間長(zhǎng)、代謝慢，所以在屠宰前到上市，在豬體內(nèi)的殘留量都很大。這個(gè)殘留量通過(guò)食物進(jìn)入人體，就使人體漸漸地中毒，積蓄中毒。如果一次攝入量過(guò)大，就會(huì)產(chǎn)生異常生理反應(yīng)的中毒現(xiàn)象，因此而被禁用。食用瘦肉精后的危害1.急性中毒有心悸，面頸、四肢肌肉顫動(dòng)，有手抖甚至不能站立，頭暈，乏力。

2.原有交感神經(jīng)功能亢進(jìn)的患者，如有高血壓、冠心病、甲狀腺功能亢進(jìn)者上述癥狀更易發(fā)生。

3.與糖皮質(zhì)激素合用可引起低血鉀，從而導(dǎo)致心律失常。嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡！

瘦肉精的檢測(cè)方法檢測(cè)方法

感官識(shí)別法化學(xué)分析法酶聯(lián)免疫法色譜檢測(cè)技術(shù)生物傳感技術(shù)1.感官識(shí)別法飼喂鹽酸克倫特羅比較嚴(yán)重的豬宰后肉色特別鮮紅、后臀肌肉飽滿(mǎn)突出，脂肪非常薄，而一般健康肉淡紅色，肉質(zhì)彈性好。優(yōu)點(diǎn)：

可以快速、簡(jiǎn)單、定性對(duì)動(dòng)物性食品中有無(wú)瘦肉精作出初步判定，但主觀性較強(qiáng)，可為消費(fèi)者購(gòu)買(mǎi)放心肉提供一定的參考。2.化學(xué)分析法§溶于水和乙醇，故可以用水進(jìn)行提取

§芳香第一胺類(lèi)的鑒別反應(yīng)§氯化物的鑒別反應(yīng)1.紫外可見(jiàn)分光度計(jì)在243nm與296nm的波長(zhǎng)出能得到最大的吸收2.酸堿法（pH試紙）正常新鮮肉用試紙測(cè)試其酸堿度多呈中性或弱堿性，宰后1h后，用pH試紙測(cè)得pH值為6.2—6.3，當(dāng)在自然條件下冷卻6h以上時(shí)pH值為5.6—6.0，而含有鹽酸克倫特羅的豬肉則偏酸性，pH值明顯小于正常范圍，所以酸堿度法也能測(cè)。優(yōu)點(diǎn)：

不需要昂貴的儀器與試劑，也無(wú)復(fù)雜的樣品前處理，操作簡(jiǎn)單，但由于具有雜質(zhì)干擾、靈敏度低、重現(xiàn)性差等缺點(diǎn)，只能作為初篩鹽酸克倫特羅的方法；4.色譜檢測(cè)技術(shù)

色譜技術(shù)包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、氣相色譜-傅里葉紅外聯(lián)用法（GC-FTIR）及薄層色譜法（TLC）等。目前，應(yīng)用最多的是高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。為了更準(zhǔn)確的檢測(cè)出瘦肉精，在這里我們主要介紹氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

——固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜對(duì)象：動(dòng)物尿液原理：對(duì)樣品在pH=5.2的緩沖溶液中進(jìn)行提取。萃取的樣液用C18和SCX小柱，固相萃取凈化，分離的藥物殘留經(jīng)過(guò)雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用帶有質(zhì)量選擇檢測(cè)器的氣相色譜儀測(cè)定。步驟：1.標(biāo)準(zhǔn)液的配制

2.尿樣的提取，凈化

3.衍生化、檢測(cè)

4.計(jì)算測(cè)定肉樣中鹽酸克倫特羅色譜圖色譜檢測(cè)法：檢測(cè)精確度高假陽(yáng)性率低費(fèi)用較低較高的靈敏度重現(xiàn)性好效率較高準(zhǔn)確度高優(yōu)點(diǎn)色譜檢測(cè)法：儀器尚未普及成本高操作繁瑣缺點(diǎn)5.生物傳感技術(shù)

生物傳感器是一門(mén)有多種學(xué)科互相滲透成長(zhǎng)起來(lái)的新興學(xué)科，已引起世界各國(guó)的重視。其原理為待測(cè)物與分子識(shí)別元件特異性的結(jié)合后，所產(chǎn)生的復(fù)合物（或光、熱等）通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢暂敵龅碾娦盘?hào)、光信號(hào)等，從而達(dá)到分析檢測(cè)的目的。用它檢測(cè)鹽酸克倫特羅的原理與酶聯(lián)免疫法幾乎相同，只是將酶與底物反應(yīng)的化學(xué)變化用換能器轉(zhuǎn)化為電信號(hào)輸出，從而可得待測(cè)物質(zhì)的含量。生物傳感器簡(jiǎn)圖生物傳感技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：

具有選擇性好、響應(yīng)速度快、樣品用量少、操作簡(jiǎn)易、價(jià)格低廉、定量準(zhǔn)確，