人和肽素(CPP)酶聯(lián)免疫檢測(cè)說(shuō)明書(shū)

人和肽素(CPP)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于生物素雙抗體夾心技術(shù)原理，來(lái)檢測(cè)人和肽素(CPP)),只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。用途：用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中和肽素(CPP)的測(cè)定。工作原理本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中人和肽素(CPP)的水平。向預(yù)先包被了人和肽素(CPP)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入和肽素(CPP),溫育;溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗CPP抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人和肽素(CPP)的濃度呈正相關(guān)。試劑盒組成1標(biāo)準(zhǔn)品(1600ng/L)0.5ml7顯色劑A液3ml2標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3ml8顯色劑B液3ml3酶標(biāo)包被板12孔X4條9終止液3ml4鏈霉親和素-HRP3ml10說(shuō)明書(shū)1份520倍濃縮洗滌液20ml11封板膜2張6生物素標(biāo)記的抗-CPP抗體1ml12密封袋1個(gè)需要而未提供的試劑和器材37°C恒溫箱。2．標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。精密移液器及一次性吸頭蒸餾水，一次性試管吸水紙注意事項(xiàng)從2-8C取出的試劑盒，在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。標(biāo)本要求1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20°C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融操作程序1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請(qǐng)按照說(shuō)明自行在小試管中倍比稀釋）：800ng/L（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120卩1的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120卩1的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400ng/L（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120卩1的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120卩1的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200ng/L（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120卩1的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120卩1的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ng/L（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120卩1的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120卩1的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ng/L（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120卩1的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120卩1的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加樣：1）空白孔：空白對(duì)照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗CPF抗體,鏈霉親和素HKP,只加顯色劑A&〃和終止液，其余各步操作相同；）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50皿,鏈霉素-HRP50M（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加）3）待測(cè)樣品孔:加入樣本4血1,然后各加入抗■CPP抗體10訕、鏈酶親和素HRP50M，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37C溫育60分鐘。配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑A50卩1,再加入顯色劑B50卩1,輕輕震蕩混勻，37C避光顯色10分鐘。終止：每孔加終止液50卩1，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)