標準解讀

《GB/T 25878-2010 對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒(IHHNV)檢測 PCR法》是一項國家標準，規(guī)定了使用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)對對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒進行檢測的方法。該標準適用于中國海域內(nèi)養(yǎng)殖或捕撈的對蝦樣本中IHHNV的檢測。

根據(jù)標準內(nèi)容，首先明確了術(shù)語和定義，包括對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒、核酸提取等關(guān)鍵概念。接著，詳細描述了實驗所需的材料與試劑，如引物序列的選擇、dNTPs混合液、Taq DNA聚合酶以及陽性對照品等。對于儀器設(shè)備也有具體要求，比如熱循環(huán)儀需滿足特定條件才能保證實驗準確性。

在樣品處理方面，標準給出了從活體或冷凍保存的對蝦中采集組織樣本的方法，并且介紹了如何通過酚氯仿抽提法或其他商業(yè)化的DNA提取試劑盒來獲取高質(zhì)量的基因組DNA。此外，還強調(diào)了操作過程中防止污染的重要性，建議設(shè)立專用實驗室區(qū)域并采取嚴格的防污染措施。

關(guān)于PCR擴增步驟，文件提供了推薦的反應(yīng)體系組成、循環(huán)參數(shù)設(shè)置等信息，以確保能夠有效擴增目標片段。同時指出，在每次實驗時都應(yīng)包含陰性和陽性對照，以便于結(jié)果判讀。

最后，標準列出了判斷結(jié)果的標準：只有當出現(xiàn)預(yù)期大小的目的條帶且無非特異性擴增產(chǎn)物時，才可判定為陽性；反之則為陰性。如果結(jié)果不確定或者存在疑問，則需要重復(fù)實驗加以確認。

該文件旨在為相關(guān)領(lǐng)域的研究人員提供一套科學(xué)合理的IHHNV檢測流程，從而幫助更好地控制和預(yù)防這種疾病在對蝦中的傳播。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2011-01-10 頒布
  • 2011-06-01 實施
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GB/T 25878-2010對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒(IHHNV)檢測PCR法_第1頁
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文檔簡介

ICS6502030

B41..

中華人民共和國國家標準

GB/T25878—2010

對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒

IHHNV檢測PCR法

()

PolmerasechainreactionPCRmethodforinfectioushodermaland

y()yp

haematooieticnecrosisvirusIHHNV

p()

2011-01-10發(fā)布2011-06-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T25878—2010

前言

本標準的附錄和附錄為資料性附錄

AB。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國水產(chǎn)標準化技術(shù)委員會歸口

。

本標準起草單位中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站

:、。

本標準主要起草人黃倢楊冰朱澤聞宋曉玲孫喜模趙紅萍劉莉

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25878—2010

對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒

IHHNV檢測PCR法

()

警告使用本標準的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗本標準并未指出所有可能的安全問題

:,。

使用者有責任采取適當?shù)陌踩徒】荡胧┎⒈ＷC符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件

,。

1范圍

本標準規(guī)定了對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒聚合酶鏈式反應(yīng)檢測方法的

(IHHNV)(PCR)

原理所需試劑和材料儀器和設(shè)備操作步驟和結(jié)果判定

、、、。

本標準適用于對蝦環(huán)境生物餌料生物和其他各種非生物樣品中傳染性皮下及造血組織壞死病毒

、、

的定性檢測不適于對病毒量或感染活性的估測以及宿主感染程度的評估

(IHHNV)。。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標準然而鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標準

。,。

斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第部分壓片顯微鏡檢查法

SC/T7202.1—20071:

斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第部分檢測法

SC/T7202.2—20072:PCR

3原理

31對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒及其流行特征

.

傳染性皮下及造血組織壞死病毒

(infectioushypodermalandhaematopoieticnecrosisvirus,

粒子大小為是無囊膜二十面體在氯化銫中的浮力密度為含線

IHHNV)20nm~22nm,,1.40g/mL,

狀單鏈長度為衣殼由個分子質(zhì)量分別為的多肽組成

DNA,4.1kb,474kD、47kD、39kD、37.5kD。

可感染世界各地的養(yǎng)殖對蝦其感染細角濱對蝦Litopenaeusstylirostris會引起急性傳

IHHNV,()

染病和高死亡率稚蝦受到的危害最嚴重感染凡納濱對蝦Litopenaeusvannamei

(90%),。IHHNV()

會引起慢性矮小殘缺綜合癥主要影響是患病對蝦生長緩慢畸形受感染存活對蝦終生帶毒

“”(RDS),,,,

通過垂直和水平傳播

。

32技術(shù)原理

.

的聚合酶鏈式反應(yīng)是以的一段個堿基

IHHNV(polymerasechainreaction,PCR)IHHNV389(b)

長度的特異性序列作為模板以與模板兩端序列互補的一對特異性寡核苷酸序列作為引物在四

DNA,,

種脫氧核糖核苷三磷酸存在下利用依賴的聚合酶的合成作用經(jīng)過數(shù)十次變性退火和延

,DNADNA,、

伸的反應(yīng)循環(huán)使模板上介于兩個引物之間的片段得到特異性地級數(shù)擴增再通過電泳等手段檢

,DNA,

測到被特異性擴增的片段從而揭示微量的存在

,IHHNVDNA。

4試劑和材料

41所需試劑除引物陽性對照和陰性對照以外按照中第章的規(guī)定

.、,SC/T7202.2—20075。

42引物保存

.100ng/μLF:5′-CGG-AAC-ACA-ACC-CGA-CTT-TA-3′,-20℃。

43引物保存

.100ng/μL

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