GB/T 22332-2008鴨病毒性腸炎診斷技術(shù)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２２３３２—２００８

鴨病毒性腸炎診斷技術(shù)

犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狋犲犮犺狀犻狇狌犲狊犳狅狉犱狌犮犽狏犻狉狌狊犲狀狋犲狉犻狋犻狊

２００８０８２２發(fā)布２００８１２０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書(shū)

犌犅／犜２２３３２—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)部分技術(shù)采用ＯＩＥ《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》（２００４）推薦的試驗(yàn)方法，并把具體操作

程序予以細(xì)化。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、中華人民共和國(guó)廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：郭霄峰、廖明、洪潔心。

Ⅰ

書(shū)

犌犅／犜２２３３２—２００８

鴨病毒性腸炎診斷技術(shù)

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鴨病毒性腸炎病毒（ＤＶＥＶ）分離和鑒定及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ＰＣＲ）試驗(yàn)的診斷技術(shù)

要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于鴨病毒性腸炎的診斷。

２臨床癥狀和病理變化

家養(yǎng)的鴨和雛鴨從７日齡至成年均可感染發(fā)病。在易感鴨群，初始癥狀通常為突發(fā)持續(xù)性高死亡

現(xiàn)象，產(chǎn)蛋量明顯下降。由于感染禽的品種、年齡、性別以及病毒毒力的不同，暴發(fā)鴨病毒性腸炎

（ＤＶＥ）后臨床癥狀、剖檢病變有很大的差異。種鴨臨床癥狀為流淚、怕光、煩渴、缺乏食欲、共濟(jì)失調(diào)、

水樣腹瀉和流鼻液。通常病鴨羽毛蓬亂，肛門(mén)粘有污物。病鴨借助翅膀支撐方能保持平衡，整個(gè)外觀虛

弱、精神沉郁。但２周～７周齡鴨中損失比成鴨低，其癥狀為脫水、體重下降，喙呈藍(lán)色，肛門(mén)染有血跡。

剖檢時(shí)發(fā)現(xiàn)，死亡的鴨并不消瘦。性成熟的公鴨的陰莖可能脫垂。性成熟母禽的卵巢濾泡出血。

特征性大體病變以血管受損，帶有組織出血和體腔游離血液，消化道粘膜表面有環(huán)狀出血和白喉樣損

壞，淋巴樣器官受損，實(shí)質(zhì)器官呈退行性病變?yōu)樘卣鳌０咨本喌奶卣餍圆∽兪茄芗皟?nèi)臟器官損

傷，消化道上皮細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體和胞漿內(nèi)包涵體。

３病毒分離

３．１材料準(zhǔn)備

３．１．１病料的采集：一般應(yīng)在感染初期或發(fā)病急性期從瀕死期禽或活禽采取。瀕死期禽采集肝、脾、腦

等組織樣品。活禽用滅菌的棉拭子涂抹泄殖腔。帶有分泌物的棉拭子放入每毫升含有１０００ＩＵ青霉

素，１０００μｇ鏈霉素，ｐＨ７．２～７．６的磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）中。送檢病料應(yīng)置于５０％的甘油生理鹽

水中。

３．１．２病料的保存：采集的樣品若在４８ｈ內(nèi)處理，可于４℃保存；否則應(yīng)放－２０℃以下保存（－７０℃

貯存最好）。

３．１．３病料的處理：將棉拭子充分捻動(dòng)、擰干后除去拭子。樣品液經(jīng)３０００ｒ／ｍｉｎ４℃離心３０ｍｉｎ，取

上清液作為接種材料。組織樣品先用ｐＨ７．２～７．６的ＰＢＳ制成５倍～１０倍乳劑，３０００ｒ／ｍｉｎ４℃離心

３０ｍｉｎ，取上清液作為接種材料。為防止細(xì)菌污染，可在樣品液中加入青霉素（１０００ＩＵ／ｍＬ），鏈霉素

（１０００μｇ／ｍＬ），卡那霉素（１０００μｇ／ｍＬ），３７℃溫箱中作用３０ｍｉｎ。進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)。

３．１．４鴨胚：１０日～１１日齡的非ＤＶＥ疫苗免疫鴨胚。

３．２實(shí)驗(yàn)操作

３．２．１胚胎接種：取經(jīng)處理并且無(wú)菌檢驗(yàn)合格的樣品，以０．２ｍＬ／胚的量經(jīng)絨毛尿囊膜接種１０日～

１１日齡的非ＤＶＥ疫苗免疫的鴨胚，每個(gè)樣品接種４個(gè)～５個(gè)胚，于３８℃～３８．５℃恒溫箱中孵育。

７２ｈ前每天照胚１次～２次，以后每天照胚５次。棄去７２ｈ前