實驗室生物安全課件暗夜精靈

實驗室生物安全課件暗夜精靈第一頁，共五十五頁，2022年，8月28日1、定義

2、新感染形勢對微生物實驗室的要求從事病原微生物實驗活動中的實驗室,避免危險生物因子造成實驗室人員暴露、向實驗室外擴散并導致危害的綜合措施生物安全保證

嚴防生物恐怖因子微生物檢驗質量的保證探索、嚴謹、正確、快速第二頁，共五十五頁，2022年，8月28日應對措施強化工作人員生物安全意識建立規(guī)范化、法制化的管理體系加強人才的建設、培訓掌握規(guī)范的微生物操作技術和方法配備安全的生物防護設施、設備第三頁，共五十五頁，2022年，8月28日實驗室生物安全涉及的范圍涉及微生物學、傳染病學、流行病學、實驗生物學、生物工程、醫(yī)療儀器等。涉及氣溶膠學、空氣動力學涉及HEPA過濾、消毒和滅菌、屏障隔離、圍場操作等涉及到各級領導層、法規(guī)制定部門、技術監(jiān)督部門涉及環(huán)境保護和環(huán)境評價以及建筑和裝飾工程學等多層次、多部門、多學科的有機配合的重要工作。第四頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全實驗室的重要意義

是建立病原微生物研究安全平臺的需要是生物安全防護的需要是傳染病原預防與控制的需要是動物防疫的需要是出入境檢驗檢疫的需要是醫(yī)院感染控制的需要GoARN(TheGlobaloutbreakAlertandResponseNetwork)監(jiān)測網(wǎng)絡離不開生物安全實驗室第五頁，共五十五頁，2022年，8月28日建立生物安全實驗室的基本原則

科學合理的原則：屏障、過濾、消毒、滅菌、個人防護安全首位的原則軟件在先的原則管理嚴格的原則遠離病原的原則預防為主的原則：

①合格的生物安全柜、排風過濾器和高壓蒸汽滅菌器。

②安全監(jiān)測、預防措施、改進措施

③隔離治療措施使用方便和節(jié)約的原則第六頁，共五十五頁，2022年，8月28日病原微生物實驗室生物安全相關法律法規(guī)和標準(1)國外的相關法律法規(guī)和標準1983年WHO《實驗室生物安全手冊》第一版1993年WHO《實驗室生物安全手冊》第二版2004年WHO《實驗室生物安全手冊》第三版1999美國CDC/NIH發(fā)布了《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全手冊》第四版→公認為“金標準”(2)我國相關的法律法規(guī)和標準《病原微生物實驗室生物安全管理條例》2004,11《中華人民共和國傳染病防治法》2004.8《中華人民共和國國家標準化實驗室-生物安全通用要求》GB19489-2004中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》WS233-2002中華人民共和國國家標準《生物安全實驗室建設技術規(guī)范》GB50346-2004中華人民共和國衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物各錄》2006,1,11中華人民共和國衛(wèi)生部《可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運輸管理規(guī)定》2006.2.1(實施)第七頁，共五十五頁，2022年，8月28日病原微生物危害程度分類(1)分類的主要依據(jù)微生物的致病性微生物的傳播方式和宿主范圍當?shù)厮邆涞挠行Х乐未胧?2)國內外病原微生物危害程度分類比較我國在《病原微生物實驗室生物安全管理條例》中，根據(jù)病原微生物的傳染性及感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物從高到低分為四類：第一類病原微生物危害程度最高，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物；第二類病原微生物是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物；第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物；第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第八頁，共五十五頁，2022年，8月28日病原微生物危害等級劃分與標準

《病原微生物實驗室生物安全管理條件》《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2004)WHO《實驗室生物安全手冊》(第三版2004)四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物(BSL1)條件致病微生物Ⅰ級(低個體危害，低群體危害)不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子Ⅰ級(無或極低的個體和群體危險)不太可能引起人或動物致病的微生物三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病并且具備有效治療和預防措施的微生物(BSL2)一部分乙類和丙類(全部)Ⅱ級(中等個體危害，有限群體危害)能引起人類動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原微生物。實驗室感染不會導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。Ⅱ級(個體危險中等，群體階段低)病原微生物能夠對人或動物致病，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效預防治療措施，并且疾病傳播的危險有限。二類能夠引起人類或動物嚴重疾病，比較容易直接或間接在人與人、動物與動物間傳播的微生物。(BSL3)乙類Ⅲ級(高個體危害，低群體危害)能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶爾接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的微生物。Ⅲ級(個體危險高，群體危險低)病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預防治療措施一類能夠引起人類或動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。(BSL4)甲類Ⅳ級(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般治愈，容易直接或間接或因偶爾接觸在人與人或動物與人或人與動物或動物與動物間傳播的病原微生物Ⅳ級(個體和群體的危險均高)病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預防和治療措施第九頁，共五十五頁，2022年，8月28日一類病原微生物實驗室感染機會多，感染后發(fā)病的可能性大，癥狀重且可危及生命，缺乏有效的預防方法，傳染性強，對人群危害性大的烈性傳染病，包括國內未發(fā)現(xiàn)的和已發(fā)現(xiàn)但還無有效防治方法的烈性傳染病。如鼠疫耶爾森菌，粗球孢子菌。包括細菌、病毒和真菌。有鼠疫耶爾森菌，霍亂弧菌（包括EL-tor弧菌）；天花病毒、黃熱病毒（野毒株）、新疆出血熱（克里米亞剛果出血熱）病毒、東、西方馬腦炎病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、拉沙熱（Lassa）病毒、埃波拉（Ebola）病毒、馬堡（Marburg）病毒、猴皰疹病毒（猴B病毒）；粗球孢子菌、夾膜組織胞漿菌、杜波氏組織胞漿菌。第十頁，共五十五頁，2022年，8月28日二類病原微生物實驗室感染機會較多，感染后的癥狀較重能危及生命，發(fā)病后不易治療，對人群危害較大是傳染病菌種。已有預防的方法或制劑,如布氏菌、炭疽芽孢桿菌等。土拉弗郎西絲菌、布氏菌、炭疽芽孢桿菌、肉毒梭菌、鼻疽假單孢菌、類鼻疽假單孢菌、麻風分支桿菌、結核分支桿菌；狂犬病病毒、森林腦炎病毒、流行性出血熱病毒、國內尚未發(fā)生但在國外引起腦脊髓膜炎的其他蟲媚病毒、登革熱病毒、甲、乙型肝炎病毒；各種立克次體（包括斑疹傷寒、Q熱）；鸚鵡熱、鳥疫衣原體、淋巴肉芽腫衣原體；馬納青霉、北美芽生菌、副球孢子菌、新型隱球菌、巴西芽生菌、煙曲菌、著色霉菌。第十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日三類病原微生物僅具有一般的危險性，能引起實驗室感染的機會較少，采用一般實驗室技術可控制感染，已有有效的免疫預防的方法。如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌、鏈球菌、淋病奈瑟菌等。腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌、鏈球菌、淋病奈瑟菌及其他致病的奈瑟菌、百日咳伯德特氏菌、白喉棒狀桿菌及其他致病棒狀桿菌、流感嗜血桿菌、沙門菌、志賀菌、致病性大腸埃希菌、小腸結腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌、酵米面黃桿菌、副溶血弧菌、變形桿菌、李斯特氏菌、銅綠假單孢菌、氣腫疽梭菌、產(chǎn)氣夾膜梭菌、破傷風梭菌及其他致病梭菌。第十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日三類病原微生物三類危害真菌種類包括：黃曲霉菌、雜色曲霉菌、梨孢鐮刀霉、蛙類霉菌、放線菌屬、奴卡氏菌屬、石膏樣毛癬、孢子絲菌。三類危害其它微生物：包括鉤端螺旋體、梅毒螺旋體、雅絲螺旋體；乙型腦炎病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、脊髓灰質炎病毒、柯沙奇病毒（A、B）、艾柯病毒（ECHO）及其他腸道病毒、皰疹類病毒（單純皰疹、巨細胞、EB、水痘）狂犬病病毒、風疹病毒。第十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日四類病原微生物是指生物制品，菌苗、疫苗生產(chǎn)用的減毒或弱毒菌種，不屬于上述一二三類的各種低致病性的微生物菌種第十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日甲乙類傳染病甲類傳染病：鼠疫、霍亂；乙類傳染病：傳染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰質炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血熱、狂犬病、流行性乙型腦炎、登革熱、炭疽、細菌性和阿米巴性痢疾、肺結核、傷寒和副傷寒、流行性腦脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生兒破傷風、猩紅熱、布魯氏菌病、淋病、梅毒、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、瘧疾、O-157大腸埃希菌。其中對乙類傳染病中傳染性非典型肺炎、炭疽中的肺炭疽和人感染高致病性禽流感的預防按甲類傳染病來對待。第十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日危害評估的主要參考項目

傳染過程因素影響評估的特性病原微生物毒性：致病力，生物學穩(wěn)定性病原的宿主動物種類、易感性；常見的人畜共患疾?。何墨I記載的職業(yè)性疾病來源；人體患病的嚴重程度，對疾病的抵抗力暴露的后果實驗動物隱性感染、顯性感染癥狀，預后與結局實驗室工作人員工作人員素質及經(jīng)驗，有無免疫預防措施，文獻記載的職業(yè)性疾病逸散方式隨實驗動物的尿液、唾液和糞便排出，傷口分泌物中存在的病原，實驗程序和操作方法，操作的性質和作用，工作人員的實驗室操作不當傳播方式氣溶膠，直接接觸可能性，傳播媒介，二次傳播感染途徑工作人員手，攝入、吸入、直接接種，割破或擦傷，針刺、咬傷5個P：Pathogen病原體、Procedures規(guī)程、Personnel人員、

Protectiveequipment防護設備、Place地點傳染源=====傳播途徑====易感人群第十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日微生物危害評估的用途(1)確定生物安全防護水平。根據(jù)評估的結果，確保實驗室的空間、設施與設備能滿足所從事工作的需要。(2)依據(jù)病原微生物危害評估結果制定微生物操作、儀器設備使用的操作程序與管理規(guī)程；微生物保藏、運輸、滅活、銷毀程序；潛在危害分析與意外事故處理程序；人員培訓、個人防護及健康保障與監(jiān)督程序。(3)生物危害評估中包含大量相關微生物的背景信息，是所有工作員必須學習的參考資料。(4)評價病原微生物實驗室生物安全狀況的依據(jù)。病原微生物實驗室生物安全評價是保證實驗室生物安全的最重要環(huán)節(jié)之一，該評價是在對擬進行的病原微生物危害評估審核的基礎上，評估根據(jù)危害評估結果所制定的操作程序與管理制度以及實驗室設備設施是否能滿足生物安全要求。同時根據(jù)實驗室生物安全評估結果建立生物安全實驗室日常監(jiān)督檢查管理機制。第十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日實驗室相關感染的原因實驗室相關感染的原因主要有誤食，黏膜的接觸、皮膚切割，針刺，動物抓、咬，氣溶膠吸入等；尤其以吸入氣溶膠感染最為常見，也難預防。這是因為實驗室操作中產(chǎn)生的氣溶膠和由此引起的感染比較難以察覺；其特點主要有：生物氣溶膠無色無味、無孔不入，不易發(fā)現(xiàn)，實驗人員在自然呼吸中不知不覺吸入而造成感染。若治療控制不及時會造成嚴重后果。與其它疾病自然感染相比，有些微生物氣溶膠感染的癥狀不典型，病程復雜，難以及時診治，影響預后。有些氣溶膠感染只有呼吸道粘膜免疫才有預防作用，非呼吸道免疫途徑預防作用效果欠佳?，F(xiàn)有常規(guī)疫苗的預防效果不理想，如肺炭疽。呼吸道傳播的傳染病的微生物特別是高致病性病毒常常發(fā)生變異，尤其是其抗原性、致病性可能發(fā)生改變，在空氣中存活力也可能增強。氣溶膠傳播容易發(fā)生病原體在人與人、人與動物、動物與動物之間的傳播。氣溶膠可以遠距離或較遠距離傳播，這是其與其他傳播途徑的顯著區(qū)別，也是氣溶膠傳播難以預防的另一重要原因。第十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日氣溶膠(Aerosols)Aerosol:懸浮于氣體介質中的(微粒大小0.001～100μm，典型大小是0.01-10um)固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的相對穩(wěn)定的分散體系如煙、塵、霧，來源有自然或人類兩種來源；實驗室微生物氣溶膠的種類一類是飛沫氣溶膠，另一類是粉塵氣溶膠。這兩類微生物氣溶膠對實驗室工作人員都具有嚴重的危害性，其程度取決于微生物本身的毒力、氣溶膠的濃度、氣溶膠粒子大小以及當時實驗室內的微小氣候條件。第十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日可產(chǎn)生各種嚴重程度微生物氣溶膠的實驗室操作輕度(<10個顆粒)中度(11～100個顆粒)重度(>100個顆粒)玻片凝集試驗腹腔接種動物，局部不涂消毒劑離心時離心管破裂傾倒毒液實驗動物尸體解剖打碎干燥菌種安瓿火焰上灼熱接種環(huán)用乳缽研磨動物組織打開干燥菌種安瓿顱內接種離心沉淀前后注入、傾倒、混懸毒液攪拌后立即打開攪拌器蓋接種雞胚或抽取培養(yǎng)液毒液滴落在不同表面上用注射器從安瓿中抽取毒液接種環(huán)接種平皿、試管或三角燒瓶等打開培養(yǎng)容器的螺旋瓶蓋摔碎帶有培養(yǎng)物的平皿小白鼠鼻內接種注射器針尖脫落噴出毒液刷衣服、拍打衣服第二十頁，共五十五頁，2022年，8月28日病原微生物氣溶膠防護避免或減少操作中氣溶膠的產(chǎn)生（控制空氣傳播感染的第一環(huán)節(jié)）：

如同傳染病控制原理一樣，控制或消滅傳染源-避免或減少操作感染性材料時氣溶膠的發(fā)生是避免呼吸道實驗室感染首要的對策，也是避免實驗室相關感染的主要措施。防止氣溶膠的擴散（控制空氣傳播感染的第二環(huán)節(jié)）無論是哪一種微生物實驗室，只要操作感染性物質，氣溶膠的產(chǎn)生是不可避免的；除了第一個環(huán)節(jié)做好之外，還要做好第二個環(huán)節(jié)；第二十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日病原微生物氣溶膠防護之第一環(huán)節(jié)

(1)規(guī)范工作人員操作過程，避免操作錯誤：實驗室感染事故，大部分是由于疏忽或違反操作規(guī)程造成的。例如，在操作過程中不小心將菌毒種管、含有感染性物質離心管或其他容器打碎，就可產(chǎn)生氣溶膠污染，有可能造成嚴重后果。(2)正確選擇和使用儀器、器材和設備：在生物安全實驗室活動中，正確選擇和使用儀器、器材和設備對于保證實驗室生物安全至關重要。生物安全實驗室設備、器材和儀器的選用應遵循下列原則。

2.1應適合工作需要，設備儀器既滿足試驗的要求又要避免“殺雞用宰牛刀”；

2.2產(chǎn)品要符合標準、有產(chǎn)品合格證，并有足夠的檢測數(shù)據(jù)。例如，在選擇二級生物安全柜時必須是合格產(chǎn)品，出廠前必須經(jīng)過正壓試驗，個人、環(huán)境、樣品、交叉保護試驗，并提供合格報告。

2.3儀器設備，特別是有關安全設備，必須在安裝后、使用(感染性材料操作)之前由有資質的第三方進行性能驗證，按規(guī)定進行年檢。(3)加強人員培訓：實驗室工作人員應經(jīng)過專業(yè)培訓并獲得相應的資質，培訓內容應包括儀器的操作原理和方法，強化避免或減少操作中產(chǎn)生氣溶膠的意識，操作可能產(chǎn)生氣溶膠危害的儀器時應采取的防護措施等。(4)改進操作技術：通過改進操作技術，可以避免氣溶膠的產(chǎn)生和實驗室傷害的發(fā)生，確何生物安全。第二十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日實驗室生物安全水平分級

根據(jù)的操作的生物因子的危害程度和采取的防護措施，將生物安全防護水平(biosafetylevel,BSL)分為4級，Ⅰ級防護水平最低，Ⅳ級防護水平最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示實驗室的相應生物安全防護水平；以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示動物實驗室的相應生物安全防護水平。第二十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日設施和設備要求------------BSL-1無需特殊選址，普通建筑物即可，但應有防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入的設計。每個實驗室應設洗手池，宜設置在靠近出口處。在實驗室門口處應設掛衣裝置，個人便裝與實驗室工作服分開放置。實驗室的墻壁、天花板和地面應平整、易清潔、不滲水、耐化學品和消毒劑的腐蝕。地面應防滑，不得鋪設地毯。實驗臺面應防水，耐腐蝕、耐熱。實驗室中的廚柜和實驗臺應牢固。廚柜、實驗臺彼此之間應保持一定距離，以便于清潔。實驗室如有可開啟的窗戶，應設置紗窗。實驗室內應保證工作照明，避免不必要的反光和強光。有適當?shù)南驹O備。第二十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日設施和設備要求------------BSL-2在滿足BSL-1實驗室的要求前提下，在滿足以下條件；實驗室門應帶鎖并可自動關閉。實驗室的門應有可視窗。應有足夠的存儲間擺放物品以方便使用。在實驗室工作區(qū)域外還應當有供長期使用的存儲空間。在實驗室內應使用專門的工作服；應戴乳膠手套口罩帽子。在實驗室的工作區(qū)域外應有存放個人衣物的條件。在實驗室所在的建筑內應配備高壓蒸氣滅菌器，并按期檢查和驗證，以保證符合要求。應在實驗室內配備生物安全柜。應配置洗眼設施，必要時應有應急噴淋裝置。應通風，如使用窗戶自然通風，應有防蟲紗窗。有可靠的電力供應和應急照明；必要時，重要設備如培養(yǎng)箱、生物安全柜、冰箱等應設備用電源（UPS）。實驗室出口應有在黑暗中可明確辯認的標識。第二十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日微生物危險度等級相對應的生物安全水平、操作和設備危險度等級生物安全水平實驗室類型實驗室操作安全設施1級基礎實驗室-一級生物安全水平基礎的教學、研究標準微生物操作（GMT）不需要：開放實驗臺、防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入、實驗室靠近出口處有洗手池、實驗室的窗戶有紗窗、適當?shù)南驹O備等2級基礎實驗室-二級生物安全水平初級衛(wèi)生服務：診斷、研究GMT+限制進入+防護服+生物危害警示標記+銳器謹慎使用+制定安全手冊+確定所有廢物消毒和醫(yī)療監(jiān)督計劃開放實驗臺，此外需BSC用于防護可能生成的氣溶膠、實驗室門應帶鎖并可自動關閉。應設洗眼設施、高壓蒸汽滅菌鍋等3級防護實驗室-三級生物安全水平特殊的診斷、研究在二級生物安全防護水平上+生物防護服+準入制度（控制進入）+定向氣流+所有廢棄物消毒+實驗室衣服洗之前對其進行消毒等BSC和/或其他所有實驗室工作所需要的基本設備+自成隔離區(qū)，進入實驗室的過道用物理方式隔開、入口處采用自動關閉雙層門；獨立的送排風系統(tǒng)，空氣排至室外，不在室內循環(huán)；實驗室負壓；實驗室污染區(qū)內設不排蒸汽的高壓蒸汽滅菌器等4級最高防護實驗室-四級生物安全水平危險病原體研究在三級生物安全防護水平上+氣鎖入口、出口淋浴、污染物品的特殊處理+進入實驗室前更衣+所有材料在出口處消毒Ⅲ級BSC或Ⅲ級BSC并穿著正壓服、雙開門高壓滅菌器(穿過墻體)、經(jīng)過濾的空氣+遠離建筑物或單獨的區(qū)域安裝供應、排放真空系統(tǒng)+BMBL上的其它需求(BiosafetyinmicrobiologicalandBiomedicallaboratories）BSC：生物安全柜；GMT：微生物學操作技術規(guī)范(見WHO指南4部分)第二十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日人員防護在實驗室操作感染性材料時，任何時候都必須戴口罩或帽子；必要的時候帶上防護鏡（微生物室還要穿著反背隔離防護服，穿防護鞋襪，不得裸露腿部和腳趾，必要時穿連體衣）在進行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到灑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡，必要時戴面罩(面具)或其他防護裝備或在BSC內操作；嚴禁穿著實驗室防護裝備離開實驗室(如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛(wèi)生間)，更不能把防護器村帶回家。禁止在實驗室的準備間和操作間里進食、飲水、吸煙、化狀、處理隱形眼鏡和儲存食品和飲料。在實驗室內用過的防護服要先消毒后清洗，不得和日常服裝放在同一柜子內。第二十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日廢棄物可以分成以下幾類一、生活廢棄物：非感染性廢棄物，裝黑色垃圾袋；二、醫(yī)療廢棄物：

感染性廢物（黃色垃圾袋）、病理性廢物、損傷性廢物（銳器桶）、藥物性廢物、化學性廢物污染(感染性)銳器-皮下注射用針頭、手術刀、刀子及破碎玻璃；這些廢棄物應收集在帶蓋的不易刺破的容器內，并按感染性物質處理。通過高壓滅菌和清洗來清除污染后重復或再使用的污染材料。高壓滅菌后丟棄的污染材料。直接焚燒污染材料。注:污染性材料和廢棄物的處理要遵守國家和國際規(guī)定。第二十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日污物廢物處理凡是有可能被感染性材料污染的特品和材料都視為污物，其中有使用價值的必須經(jīng)可靠消毒后方可再用，其中沒有利用價值的應進行可靠地滅菌后作為醫(yī)療廢物按政府有關規(guī)定處理。凡是不再使用廢棄的物品都視為廢物，其中有潛在污染可能的在丟棄前必須進行高壓蒸汽滅菌器滅菌，其中沒有污染的廢物作為一般醫(yī)療廢物處理。室內空氣一般不做特殊處理，用標準的紫外燈消毒即可（或使用多功能空氣消毒機定時消毒）。第二十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日污水的處理被感染性物質污染或可能污染的水都視為污水，在流(帶)出實驗室前必須經(jīng)過有效的消毒或滅菌。有或可能被感染性材料污染水，尤其對感染性廢棄液，不可倒入水池直接流出實驗室，以便保證不污染環(huán)境和危及公眾健康。在嚴格做到上述規(guī)定的條件下，準備間和操作間水池的水可直接放入單位的污水池，污水池應按國家規(guī)定適當投以消毒劑、定期排放。第三十頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------領導責任實驗室主任(對實驗室直接負責的人員)負責制訂和采用生物安全管理計劃以及安全操作手冊，并組織工作人員學習、貫徹。實驗室主任要將生物安全實驗室的特殊危害，告知實驗室人員，同時要求他們閱讀生物安全或操作手冊，并遵循標準的操作和規(guī)程，應當確保所有實驗室人員都了解這些要求，實驗室內應備有可供取閱的安全或操作手冊。實驗室設立生物安全員(主管，在實驗室主任領導下工作)并應認真負責實驗日常的生物安全管理工作，保證提供常規(guī)的實驗室安全培訓。實驗室認真按照國家規(guī)定管理好感染性材料的樣本和菌(毒)種的采集、保藏、傳遞、運輸、使用、銷毀。對工作人員必須有錄用前或上崗前的體檢，并進行一次有目的的職業(yè)健康評估，應為所有實驗室人員提供適宜的醫(yī)學評估、監(jiān)測和治療，并應妥善保存相慶的醫(yī)學記錄。實驗室管理人員要保存工作人員的疾病和缺勤記錄。根據(jù)需要和可能提供主動或衩動免疫。準備實驗室感染的早期檢測方法。應禁止高度易感人群(如孕婦或免疫損傷人員)在危險實驗室中工作。提供有效的個體防護裝備和方法。第三十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------出入制度在處理Ⅱ類病原微生物級或更高危險度級別的微生物時，在實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志。有經(jīng)批準的人員方可進入實驗室工作區(qū)域。實驗室的門應保持關閉。兒童不應進入實驗室工作區(qū)域。進入動物房應當經(jīng)過特別批準。與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。育齡期婦女應知道某些微生物(如風疹病毒)的職業(yè)暴露對未出生孩子的危害。第三十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------日常管理實驗室應保持清潔整齊，嚴禁擺放和實驗無關的物品。發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出以及在每天工作結束之后，都必須清除工作臺面的污染，所有受到污染的材料、標本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須清除污染。在進行包裝和運輸時必須遵循國家和/或國際的相關規(guī)定。認真做好實驗記錄，特別做好各種儀器設備運行的記錄。各種儀器、設備要經(jīng)過有資格的計量部門的鑒定，并有標志。妥善保管易燃、易爆的有害化學物和氣體，對其操作時要在通風柜內進行。按要求做好水電的管理和安全。第三十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------人員培訓吸入危險(氣溶膠產(chǎn)物)，如使用接種環(huán)、劃線接種瓊脂平板、移液、制作涂片、打開培養(yǎng)物、采集血液/血清標本、離心等。病原培養(yǎng)、離心、菌種凍干等涉及病原大量增殖或可能產(chǎn)生氣溶膠的實驗。食入危險，如處理標本、涂片以及培養(yǎng)物有可能污染手。注入危險如在使用注射器和針頭的刺傷皮膚。動物感染，即以活菌感染的動物實驗，有可能被動物咬傷、抓傷。處理血液以及其他有潛在病理學危害的材料的危險。感染性材料的清除污染和處理……..第三十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------菌（毒）株管理建立感染性材料菌(毒)種、樣本的采集、接收、保管、領取、發(fā)放、使用、銷毀的批準、登記制度一般情況縣級衛(wèi)生部門不可設立長期菌(毒)種庫。在試驗期間，可建立臨時樣品或菌(毒)種保藏室，但務必嚴防丟失、被盜、必須設立雙人雙鎖，專人保管(3)運輸包裝分類按國際民航組織文件Doc9284《危險品航空安全運輸技術細則》的分類包裝要求，將相關病原和標本分為A、B兩類，對應的聯(lián)合國編號分別為UN2814和UN3373；A類中傳染性物質特指菌株或活菌培養(yǎng)物，應按UN2814的要求包裝和空運，其他相關樣本和B類的病原和相關樣本均按UN3373的要求包裝和空運；通過其他交通工具運輸?shù)目蓞⒄找陨蠘藴拾b。第三十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------菌（毒）株管理非保藏高致病性微生物菌毒種機構實驗活動法規(guī)使用按〈名錄〉規(guī)定需在四級生物安全實驗室操作的高致病性微生物菌毒種(一類病原)及其樣本需經(jīng)衛(wèi)生部批準；使用其他高致病性病原微生物菌毒種及其樣本(二類病原)需經(jīng)省級衛(wèi)生主管部門批準；使用第三、四類病原微生物菌毒種及其樣本，需經(jīng)實驗室所在法人機構批準；對我國尚未發(fā)現(xiàn)的高致病性病原微生物或已經(jīng)消滅的病原微生物要進行實驗活動前，應經(jīng)衛(wèi)生部批準。非保藏機構為了研究和檢測的需要，應在保證生物安全和生物保安的條件下，在批準的時限和范圍內保管和使用相關的菌毒種或樣本。在實驗活動結束后，應及時將菌毒種或樣本就地銷毀或者送交保藏機構保藏。第三十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------實驗操作規(guī)范

從事病原微生物的操作，都應遵循下列基本原則：所有操作人員必須經(jīng)過專業(yè)技術培訓，經(jīng)領導考核批準才能工作。在開始相關工作之前，應對所從事的病原微生物衣相關操作進行危險評估，根據(jù)國家對于各種微生物操作的危險等級劃分作出危險評估的結果并提出防護要求以及制定全面、細致的標準操作規(guī)程和程序文件，對于關鍵的危險步驟設計出可行的防護措施。熟悉各種儀器的操作步驟和要點，進行正確的操作和使用，對于各種可能的危害應非常熟悉。應掌握各種感染性物質操作的一般準則和技術要點。第三十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------實驗操作規(guī)范嚴禁用口吸移液管。嚴禁將實驗材料置于口內。嚴禁(用舌)舔標簽。所有的技術操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。應限制使用皮下注射針頭和注射器，除了進行腸道外注射或抽取實驗動物體液外、不能用注射針頭和注射器替代移液管或用作其他用途。出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質時，必須按規(guī)定程序處理的同時向實驗室主管報告。實驗室應保存這些事件或事故的局面報告。必須制訂關于如何處理溢出物的書面操作程序，并予以遵守執(zhí)行。污染的液體在排放到生物污水管道以前必須清除污染(采用化學或物理學方法)。根據(jù)所處理的微生物因子的危險度評估結果，可能需要準備污水處理系統(tǒng)。需要帶出實驗室的手寫文件必須保證在實驗室內沒有受到污染。第三十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日BSL-2管理要求--------實驗操作規(guī)范移液輔助器-避免用口吸的方式移液。生物安全柜，在以下情況使用：

1)處理感染性物質，如果使用密封的安全離心杯，應在生物安全柜內裝樣、取樣，則離心可在開放實驗室內進行。

2)空氣傳播感染的危險增大時。例如，進行極有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作時(包括離心、研磨、混勻、劇烈搖動、超聲破碎、打開內部壓力和周圍環(huán)境壓力不同的盛放有感染性物質的容器、動物鼻腔接種以及從動物或卵胚采集感染性組織等)。

3)細菌接種可在生物安全柜內使用電加熱接種環(huán)，以減少生成氣溶膠。

4)開啟試管、瓶子螺口蓋。正確使用高壓蒸汽滅菌器

1)有出廠合格證書，經(jīng)過壓力容器鑒定部門檢測。

2)使用前，對其滅菌溫度和效果經(jīng)第三方驗證。

3)每次滅菌時，時事監(jiān)測滅菌效果。第三十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日

二級生物安全水平實驗室操作規(guī)程指南第四十頁，共五十五頁，2022年，8月28日高壓滅菌器使用規(guī)程應指派受過培訓的人員負責高壓滅菌器的操作和日常保養(yǎng)。物品應疏松的擺放在滅菌器里，使冷空氣易于排出、熱蒸汽均勻到達。每次裝填物中間都應放置指示條，以確定是否正確完成了一個高壓滅菌循環(huán)，并將指示條貼在儀器使用記錄上。高壓滅菌完成后最好待溫度降至室溫時，至少要降至80℃以下才能打開鍋門。處理廢棄物的高壓滅菌器應放在生物安全實驗室內或門品，并在高壓滅菌器提籃內襯套防滲漏塑料袋，污染物應置于袋內滅菌。高壓滅菌器每年要檢測一次，根據(jù)檢測結果進行維修，并做好錄。第四十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日離心機使用規(guī)程嚴格按照廠家說明書中的要求選擇轉子和轉速。用以離心的離心管和標本容器應為帶螺旋帽的塑料管，離心過程中應始終蓋嚴。離心管內容物不要裝得太滿以免溢漏。離心管放入離心桶的對稱位置后，離心桶要配平，配平時可以使用蒸餾水或75%酒精，不能使用鹽水和次氯酸鹽溶液，以免腐蝕金屬。離心完畢，將離心桶倒放，排凈離心配平的液體。每次應檢查離心轉子和離心桶有無腐蝕點及細微裂紋。離心桶、轉子和離心杯應定期消毒，如發(fā)現(xiàn)泄漏或滲出應立即消毒。必要時將小型臺式離心機放在生物安全柜內使用。第四十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全柜、超凈工作臺使用規(guī)程盡量將所需物品一次性放入工作臺后，風機工作5～10min。生物安全柜內相對分區(qū)；工作臺面上潔凈物集中放在一側，污染物放在集中放在另一側，工作期間盡量減少物品的進出；安全柜內盡量少放儀器和物品。不要阻塞氣口處的空氣流通；操作時動物幅度要輕，不要頻繁移動及揮動手臂以破壞氣流；標本如有外濺應立即消毒、清潔；工作結束后，取出廢棄物高壓滅菌。風機繼續(xù)運行5min，同時用70～75%酒精擦拭物體表面及生物安全柜內壁，使內部清潔；風機停止后，關閉操作口；紫外燈照射30min后取出物品；。生物安全柜應每年檢測一次，根據(jù)檢測情況進行維修、更換濾板，并做好記錄。第四十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全實驗室廢棄物處理程序1．實驗室和生物安全柜內必須配置有標記的專用廢棄物容器，廢棄物容器應由耐高溫塑料或不銹鋼材料制成，并經(jīng)常高壓消毒。使用前在容器內套襯耐高溫防滲漏塑料袋，必要時盛裝有效消毒劑，每次實驗完成和每天工作結束時密封塑料袋口，然后取出袋子放入高壓滅菌器中。2．所有不再需要的樣本、培養(yǎng)物和其他生物性材料應棄置于廢棄物容器內，生物廢棄物的充滿量不能超過其設計容量的80%。3．污染的利器(針頭、小刀、金屬、玻璃等)應直接放入有蓋子的銳器盒中，工作完成后將容器整體放入高壓滅菌鍋中。4．污染的個人防護裝備等其他物品可直接放入高壓滅菌鍋中。5．所有感染性物品必須先經(jīng)過高壓滅菌后再分類處理?？稍倮玫钠骶咚颓逑词遥渌麖U棄物經(jīng)焚燒后按普通生活垃圾處理。6．高壓滅菌器最好配有防止冷排氣的濾過裝置。第四十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全實驗室個人防護程序

在生物安全實驗室工作時必須使用合適的個人防護裝備，在離開實驗室前必須脫掉并洗手。更換下來的防護服、手套、口罩、帽子和鞋套要銜經(jīng)高壓滅菌后再行清洗或廢棄，眼鏡和面罩用適當?shù)南緞┙莺笄逑础?．實驗防護服:應選用長袖、后開口、在袖子和前襟部位襯有塑料防滲透材料的防護服，并定期更換以保持清潔。當防護服被危險材料污染時應立即將防護服內面向外反卷脫下，把污染處包在里面放入高壓消毒鍋。2．手套:應選用乳膠或乙烯基手套，保證所戴手套無漏損，大小合適，可完全遮住手及腕部，如必要可覆蓋實驗防護服的袖子。每次操作完成或中間離開實驗室時都要換掉手套，在手套破裂或懷疑內部受污染時要及時更換，用過的手套和污染物放在一起處理。在生物安全柜中操作時手套若被嚴重污染應在安全柜內摘掉手套放入污染物收集袋中。摘手套時應內面向外反卷脫下。3．鞋:最好選用防滲透的鞋套，用后高壓滅菌廢棄。或選用可消毒的包住腳面的鞋，用后消毒清洗。4．護目鏡、面罩:視所要進行的工作選擇用防碎塑料制成的護目鏡或面罩保護眼睛和臉部，以防濺出物沖擊。普通眼鏡和隱形眼睛不能防止生物學危險，護目鏡應戴在正常驗光的眼鏡外面。面罩應適合于臉形并用帶子或帽子固定。5．口罩、呼吸器:進行清理濺出的污染性材料或易產(chǎn)生氣溶膠的操作時，依據(jù)危害類型和等級選擇口罩或呼吸器進行呼吸防護。6、帽子：防止污染性材料或產(chǎn)生的氣溶膠濺灑到頭發(fā)上第四十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全實驗室的應急規(guī)程職業(yè)暴露：醫(yī)療銳器（如注射器針頭、縫針、各種穿刺針、手術刀、剪刀、鑷子、采血針等）造成的皮膚損傷。傷口緊急處理：立即從近心端向遠心端將傷口周圍血液擠出，盡可能擠出損傷口處的血液，再用肥皂液或流動水沖洗2～分鐘，禁止進行傷口的局部擠壓；受傷部位的傷口清洗后，應當用消毒液（70～75%的酒精或10%碘伏）消毒，并包扎傷口，給予必要的預防和相應的抗生素處理，同時對標本進行相關的病原菌檢測。對于毒性較強的病原體感染，必須立即向有關負責人報告，根據(jù)不同病原體感染采取相應的預防性治療應急措施，并予以較詳細的登記；當事人24小時內留取基礎血樣（3ml,黃色管）備查；報告：發(fā)生銳器傷后，立即報告實驗室負責人，并根據(jù)損傷程度決定是否應組織專家，共同評估銳器傷情況并指導處理。銳器傷危險度評估：視病人情況確定，進行分類處理；第四十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日病人情況當事人情況當事人處理情況HBsAg(+)HBsAg(+)或Anti-HBS(+)或Anti-HBc(+)不需要注射乙肝疫苗或乙肝免疫球蛋白HBsAg(+)HBsAg(-)或Anti-HBS(-)，從未注射乙肝疫苗24小時內注射乙肝免疫球蛋白并注射乙肝疫苗（銳器傷當時、1月后、6個月后），并于銳器傷當時、3個月、6個月檢測肝功能及乙肝病毒血清學指標。HBsAg(+)Anti-HBS(+)<50mIU/ml24小時內注射乙肝免疫球蛋白200～400單位，并于銳器傷當時、3個月及6個月檢測肝功能及乙肝病毒血清學指標HCV抗體（+）銳器傷當時、3個月及6個月抽血查HCV抗體和肝功能HIV抗體（+）經(jīng)過評估達到規(guī)定的危險度，可在醫(yī)師指導下及時服用預防用藥并醫(yī)學觀察1年；刺傷后1個月、2個月、3個月及6個月查HIV抗體梅毒血清學（+）銳器傷當時及第4周做梅毒血清學檢查，同醫(yī)師指導下進行預防性用藥無血源性傳染病不需要任何處理，僅僅密切醫(yī)學觀察第四十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全實驗室的應急規(guī)程傳染性物質造成的損傷：實驗室負責人應確保所有相關人員知道，所有病人的血液、體液和被血液、體液污染的物品均視為具有傳染性的病原性物質，工作人員（眼、嘴及其他黏膜）接觸這些物質時，必須采取防護措施，嚴格按照《實驗室（二級）生物安全防護管理程序》執(zhí)行。危險化學品的損傷：1.腐蝕物品大量濺潑于人身上、應立即用自來水沖洗；如濺潑在工作臺面或地面上，應及時沖洗臺面或地面，執(zhí)行者應佩帶個人防護用品；2.易燃品引起火災應使用CO2滅火機滅火，切斷電源，除救火外，其他人員按安全線路撤離，同時報警尋求消防部門援助；3.水銀溫度計斷裂，要先關掉室內所有加熱裝置，打開窗戶通風；然后帶上手套，用毛細管吸走水銀或用小鏟子把水銀收集起來深埋，或在上面撒些硫磺粉末，硫和汞反應能生成不易溶于水的硫化汞，危害會大大降低。由于水銀在常溫下即可蒸發(fā)成氣態(tài)，很容易被吸入呼吸道，引起中毒，所以，處理散落在地的水銀時請帶上外科口罩。4.化學品進入眼睛：必須立即緊急處理，用一次性吸管吸生理鹽水（或清水）或使用洗眼裝置清水沖洗眼球，沖水時要將兩眼張開，一面沖水一面轉動眼球至少15分鐘，越早將藥品清洗出來，眼睛受害程度越??；沖洗完畢后應送眼科醫(yī)生處理；5．吸入有毒蒸汽：在實驗室中如呼吸到有毒蒸氣時，可能會感覺到頭昏目眩，甚至昏倒。此時應迅速離開實驗室，到室外空氣流通處休息。對昏倒的患者其處理辦法為：將患者迅速抬到室外空氣流通處；解開患者的鈕扣、領帶等衣物束縛，平躺通風處；如果呼吸微弱或已消失則要趕快進行口對口人工呼吸，并通知相關科室醫(yī)生。6．化學品灼傷（不論水溶性與否）：當濺落在皮膚上時應立即用大量水沖洗，并用肥皂清洗。若藥品屬強酸或強堿時則立刻用大量冷水清洗，如大量藥品噴灑到全身，則應馬上除去衣物并沖水浴。第四十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日生物安全實驗室的應急規(guī)程實驗室意外事故：1、少量的樣本濺潑在工作臺面或地面時，用衛(wèi)生紙吸干，再用以0.5%次氯酸鈉或過氧乙酸或2000mg/L有效氯消毒液覆蓋1小時后洗去。2、標本離心時試管破裂，應戴手套，將離破的離心機管套取出，盡可能在生物安全柜進行操作：離心管內的液體倒入2000mg/L的含氯消毒液浸泡4個小時→玻璃碎片用鑷子夾出放在2000mg/L的含氯消毒液浸泡4個小時后倒入銳器盒中→離心機的管套用2000mg/L的含氯消毒液浸泡4個小時后取出用清水沖洗晾干備用→用70～75%的酒精擦拭離心機的內殼及離心機轉子，后在用清水清洗；3、手和足被樣本本污染時，以大量清水沖洗，并用清洗液或肥皂清洗數(shù)次；污染工作服應立即更換，高壓滅菌。4、誤服微生物懸液者，立即用含漱，洗胃，催吐等方式處理；若標本濺入或接觸到皮膚上，立即用大量清水沖洗，并用清洗液或肥皂清洗數(shù)次；濺入眼中者，以無菌生理鹽水沖洗后，每隔1小時用抗生素眼藥水滴眼。視具體情況作針對性的處理，必要時送眼科醫(yī)生處理；5、發(fā)生火災：關閉電源；若衣服著火不可到處奔跑，以免擴大火情，用防火毯或實驗衣包裹身體滅火，亦可在較大空地上翻滾以便滅火或使用用安全淋洗設備沖洗或用滅火器滅火；3分鐘不能滅到的火情，請盡快離開。6、觸電：6.1．癥狀較輕者：即神智清醒，呼吸心跳均自主者可就地平臥，嚴密觀察，暫時不要站立或走動，防止繼發(fā)休克或心衰。

6.2.呼吸停止、心搏存在者：將傷者就地平臥，解松衣扣，通暢氣道，立即進行口對口人工呼吸；6.3.心搏停止、呼吸存在者：應立即作胸外心臟按壓（徒手心肺復蘇）；6.4.呼吸心跳均停止者：現(xiàn)場搶救最好能兩人分別施行口對口人工呼吸及胸外心臟按壓，以2比30的比例進行，即人工呼吸2次，心臟按壓30次。如現(xiàn)場搶救僅有1人，也應按2比30的比例進行人工呼吸和胸外心臟按壓。

6.5.處理電擊傷時，應注意有無其他損傷。如觸電后彈離電源或自高空跌下，常并發(fā)顱腦外傷、血氣胸、內臟破裂、四肢和骨盆骨折等。6.6.以上情況，均需立即通知相關科室醫(yī)生及時處理。第四十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日一些重要電話朱文磊：；

楊

進：羅宇鵬：；潘露：；申旭霞：蔣祖輝：：

陳志國：；曹治耀：；敖正才：火警：119匪警：110醫(yī)生急救：120保衛(wèi)科電話：8307、82725307；感染管理科：8308、82726190；駕駛室：8316、82726611急診科：8325、82718999、82726077、82747237、82726120第五十頁，共五十五頁，2022年，8月28日微生物操作安全行為標準樣本、血清或培養(yǎng)物的操作全過程應穿戴實驗防護服、手套、口罩和鞋套等個人防護裝備(必要時戴護目鏡或面罩)，在生物安全柜內操作。禁止口吸移液，可選擇不同類型的移液器/加樣器和塑料移液管/吸頭。使用帶螺旋蓋的塑料試管和瓶子，避免使用橡膠塞防止濺出和減少氣溶膠的產(chǎn)生。盡可能使用塑料器皿。混勻時最好使用震蕩器，使用移液管/吸頭吹打時不要太激烈，減少氣