版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)一雞卵類粘蛋白的分離與純化轉(zhuǎn)第一頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日【目的要求】
了解并熟悉雞卵類黏蛋白的提取、分離、純化的方法,掌握凝膠過(guò)濾柱層析、離子交換柱層析、透析純化等方法分離純化雞卵類黏蛋白的原理及操作方法。第二頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日【學(xué)科知識(shí)點(diǎn)】
選擇性沉淀法從雞蛋清中提取雞卵類黏蛋白;凝膠層析法純化雞卵類黏蛋白粗提液;離子交換柱層析法進(jìn)一步純化雞卵類黏蛋白提取液;透析純化的方法去除樣品中鹽類;紫外分光光度法鑒定樣品含量及純度;有機(jī)溶劑等電沉淀法獲得雞卵類黏蛋白純品。第三頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
雞卵類黏蛋白的提取
凝膠層析對(duì)雞卵類黏蛋白提取液的純化
雞卵類黏蛋白純品的制備第四頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
雞卵黏蛋白是一種糖蛋白,存在于雞蛋清中,在10%三氯乙酸或50%丙酮溶液中有較好的溶解度。選擇合適的pH值,三氯乙酸濃度和丙酮濃度,可以從蛋清中獲得雞卵黏蛋白的粗提液。【基本原理】
雞卵類黏蛋白的提取第五頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日【操作步驟】1)
取1個(gè)雞蛋蛋清,量出體積,加入等體積的10%三氯乙酸溶液,形成類似于酸奶狀的白色沉淀,攪拌均勻,在酸度計(jì)上檢查pH值,若偏離3.5,
則要用10%
NaOH溶液調(diào)至pH3.5室溫靜置4h。雞卵類黏蛋白的提取第六頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日2)4h后,
3000r/min離心10min。收集上清液,再用濾紙過(guò)濾,除去上清液中脂類物質(zhì)及其它不溶物。濾液量體積,轉(zhuǎn)入500mL燒杯內(nèi),緩慢加入3倍體積冷丙酮,攪勻,用塑料薄膜封嚴(yán),置冰箱放置2h。雞卵類黏蛋白的提取第七頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日3)小心虹吸出部分上清液,剩余部分全部轉(zhuǎn)移到離心管里,經(jīng)平衡后以3500r/min離心10min,棄清液,沉淀物放在真空干燥器內(nèi),抽氣除去殘留丙酮。4)離心管中加入20mL蒸餾水溶解,將溶解液用SephadexG-25層析柱脫鹽。雞卵類黏蛋白的提取第八頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
蛋白質(zhì)混合溶液在經(jīng)過(guò)凝膠層析柱時(shí),大分子蛋白質(zhì)沿顆粒間的空隙以較快的速度流過(guò)凝膠柱,最先流出柱外。而鹽或其他小分子物質(zhì)因進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中向下移動(dòng)的速度較慢,所以最后流出柱外。因此通過(guò)凝膠層析可以達(dá)到除去小分子物質(zhì)的目的。凝膠層析對(duì)雞卵類黏蛋白提取液的純化【基本原理】第九頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日凝膠層析對(duì)雞卵類黏蛋白提取液的純化凝膠層析分離原理示意圖第十頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日1)凝膠的處理
量取100mLSephadexG-25凝膠,加入200mL磷酸鹽緩沖液,沸水浴中1h。上柱前用真空干燥器抽氣?!静僮鞑襟E】凝膠層析對(duì)雞卵類黏蛋白提取液的純化2)裝柱將柱子垂直地安裝好,關(guān)閉層析柱出水口,將脫氣后的凝膠緩緩地倒進(jìn)柱內(nèi),使之自然沉降。第十一頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日3)平衡打開(kāi)核酸蛋白檢測(cè)儀、記錄儀電源,將柱出水口與核酸蛋白檢測(cè)儀比色池進(jìn)液口相連,開(kāi)啟柱口下夾子,用約2倍體積的pH6.5磷酸鹽緩沖液平衡。直至流出液在蛋白檢測(cè)儀上繪出穩(wěn)定的基線。凝膠層析對(duì)雞卵類黏蛋白提取液的純化第十二頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日第十三頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日第十四頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
4)上樣取樣品溶解液上SephadexG-25層析柱。控制流速15d/min,收集蛋白峰。即可得到雞卵類黏蛋白粗提液。并準(zhǔn)備進(jìn)一步用DEAE-纖維素柱層析純化。凝膠層析對(duì)雞卵類黏蛋白提取液的純化第十五頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日第十六頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日【基本原理】
初步提取得到的雞卵類粘蛋白,經(jīng)DEAE-纖維素離子交換柱進(jìn)一步純化,可除去少量的雜蛋白。得到雞卵類粘蛋白的純?nèi)芤?。然后?jīng)透析、丙酮沉淀、抽真空干燥即可獲得雞卵類粘蛋白純品。雞卵類黏蛋白純品的制備第十七頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日1)量取已處理的DEAE-纖維素50mL,用60mLpH6.5磷酸鹽緩沖液浸泡約15mim,脫氣。2)裝柱將脫氣后的DEAE-纖維素裝入柱內(nèi)。用pH6.5磷酸鹽緩沖液平衡,流出液在核酸蛋白質(zhì)檢測(cè)儀上繪出穩(wěn)定的基線即可加樣。【操作步驟】雞卵類黏蛋白純品的制備第十八頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
4)洗脫
改用含0.3mol/LNaCl的pH6.5的磷酸鹽緩沖液洗脫,收集蛋白峰。3)上樣吸附
取經(jīng)上述純化后的雞卵類粘蛋白粗品上樣,待樣品全部流入柱床后,用pH6.5的磷酸鹽緩沖液平衡,洗去未被吸附的雜蛋白。雞卵類黏蛋白純品的制備第十九頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
5)透析除鹽
將層析收集的蛋白溶液放入透析袋內(nèi),對(duì)蒸餾水進(jìn)行透析,間隔1h更換一次蒸餾水,直至經(jīng)1%AgNO3檢查無(wú)氯離子為止(過(guò)夜)。6)
量透析后蛋白樣品體積。取出1mL,稀釋10倍,在紫外分光光度計(jì)280nm處測(cè)定雞卵類粘蛋白的含量。剩余樣品用1mol/LHCl調(diào)至pH4.0。雞卵類黏蛋白純品的制備第二十頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日紫外分光光度計(jì)第二十一頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
7)蛋白溶液中加入3倍體積冷丙酮,用塑料薄膜封口,放入冰箱靜置4h。8)傾去上清,渾濁液轉(zhuǎn)到離心管內(nèi),于3500r/min離心10min,沉淀抽真空干燥,即可得到透明膠狀物-雞卵類粘蛋白。雞卵類黏蛋白純品的制備第二十二頁(yè),共二十五頁(yè),2022年,8月28日
BA
1)雞卵類粘蛋白(mg/mL)=
———————2)雞卵類粘蛋白的產(chǎn)率(mg/mL)=100mL雞蛋清得到雞卵粘蛋白的mg數(shù)。
3)繪制SephadexG-25柱層析分離雞卵粘蛋白的層析圖。
4)繪制離子交換柱層析分離雞卵粘蛋白的層析圖。A280×稀釋倍數(shù)0.413實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)處理
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 進(jìn)貨來(lái)源合同模板
- 老板單間出租合同模板
- 鑄造打磨合同模板
- 開(kāi)票水泥合同模板
- 個(gè)人投資款合同模板
- 餐飲經(jīng)營(yíng)入股合同模板
- 采購(gòu)石頭合同模板
- 便宜倉(cāng)儲(chǔ)租賃合同模板
- 鋁板委托加工合同模板
- 國(guó)內(nèi)藝人經(jīng)紀(jì)合同模板
- QC-R 596-2017高速鐵路板式無(wú)砟軌道自密實(shí)混凝土高清-無(wú)水印
- 2023高中學(xué)業(yè)水平合格性考試歷史重點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)歸納總結(jié)(復(fù)習(xí)必背)
- 面包店成本核算教材課件
- 青春期發(fā)育期的心理發(fā)展概述課件
- 國(guó)際數(shù)棋活動(dòng)教案
- 【知識(shí)點(diǎn)解析】雙曲線‘第三定義’
- 頭孢克肟膠囊課件
- 某品牌豬肉商業(yè)計(jì)劃書
- 工程建設(shè)項(xiàng)目人盯人、人盯項(xiàng)目工作責(zé)任書
- 技能矩陣培訓(xùn)課件
- 檢查井施工方案(實(shí)用資料)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論