實驗一病理組織切片制作技術(shù)

實驗一病理組織切片制作技術(shù)動物病理學(xué)第一頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗

實驗內(nèi)容

實驗一病理組織切片制作技術(shù)實驗二局部血液循環(huán)障礙：充血、淤血、缺血、梗死、出血實驗三局部血液循環(huán)障礙血栓、水腫實驗四組織細(xì)胞的變性第二頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗實驗五組織細(xì)胞壞死實驗六組織細(xì)胞病理性物質(zhì)沉著及組織修復(fù)實驗七炎癥實驗八腫瘤實驗內(nèi)容第三頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗

實驗九心臟血管系統(tǒng)病理實驗十呼吸系統(tǒng)病理實驗十一消化系統(tǒng)病理實驗十二泌尿系統(tǒng)病理實驗十三中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理實驗內(nèi)容第四頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗前言

《獸醫(yī)病理解剖學(xué)》實驗部分在本課程教學(xué)中占有特殊地位。學(xué)生通過觀察肉眼和切片標(biāo)本印證課堂所講的理論，加強(qiáng)理解，取得感性知識的教學(xué)環(huán)節(jié)。在學(xué)習(xí)過程中，要求同學(xué)初步掌握觀察和描述器官組織病變的方法和認(rèn)識病變。第五頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗第六頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗第七頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗實驗一

病理組織切片制作技術(shù)第八頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗?zāi)康囊螅?、重點掌握病理組織切片的基本制作過程步驟。2、了解病理組織切片制作過程中的注意事項。第九頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗實驗內(nèi)容

掌握組織材料的取材、固定、脫水、透明、包埋、切片、烤片、脫蠟、染色及封固的基本操作。第十頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗一、取材及固定（一）取材注意事項：

1、材料新鮮

2、組織塊力求小而薄3、勿使組織塊受擠壓

4、盡量保持組織的原有形態(tài)5、熟悉取材部位第十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗（一）取材注意事項：6、選好組織塊的切面7、保持材料的清潔8、切除不需要的部位第十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗（二）固定及目的：

應(yīng)用化學(xué)試劑使組織或細(xì)胞中的無機(jī)成分和有機(jī)成分凝固或沉淀，以保持其生活狀態(tài)的過程稱為固定。第十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗

固定液是10%福爾馬林溶液（4%甲醛溶液），固定24小時以上。第十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗固定的目的1、迅速阻止組織、細(xì)胞死后變化，防止自溶與腐敗，使之盡量保持生前的狀態(tài)與結(jié)構(gòu)。2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有狀態(tài)。3、使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，以便染色后易于鑒別和觀察。4、使組織塊硬化，便于制作薄片。第十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗固定的注意事項1、組織塊不宜大，厚度小于5mm，長寬也應(yīng)小于15×15mm。2、固定液與組織塊的比例應(yīng)大于10：1。3、軟組織或較大組織塊可先經(jīng)2-3小時固定后再修整成小塊，重新投入新配制的固定液中繼續(xù)固定。4、腸道可在漿膜面貼上一層厚紙，以防固定組織變形。第十六頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗

二、固定后處理及切片(一)、洗滌與修切(二)、脫水與透明脫水：將組織塊內(nèi)水分置換的過程。透明：乙醇和石蠟不互溶，最常用的透明劑是二甲苯。既能溶于脫水劑又能溶于包埋劑（石蠟），透明必須適度。第十七頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗50%乙醇:30-60min70%乙醇:1-2小時或過夜80%乙醇:1-2小時95%乙醇:1-1.5小時100%乙醇:30min100%乙醇:20min1：1無水乙醇：二甲苯:20min二甲苯:10-30min第十八頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗生物組織脫水機(jī)第十九頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗(三)、浸蠟與包埋

52-58℃石蠟，浸蠟的全過程在60℃的溫箱中進(jìn)行。1：1二甲苯：石蠟:30min石蠟Ⅰ:30min石蠟Ⅱ:30min 石蠟Ⅲ:30min第二十頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗組織包埋機(jī)第二十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗（四）切片、粘片1、切片前處理及切片2、載玻片處理3、粘片（展片）4、烤片

第二十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī)第二十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗三、脫蠟和染色（一）、脫蠟1、二甲苯Ⅰ:5-10min2、二甲苯Ⅱ:5-10min3、1：1二甲苯：乙醇（冬20min）:5min4、無水乙醇、95%、80%、70%、50%梯度乙醇每級1-2min5、蒸餾水1-2min第二十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗（二）、染色（HE染色法）1、蘇木素染液:5～15min2、蒸餾水（洗去多余的染液）:30s3、分色:1%鹽酸-70%乙醇分色:1-30s4、藍(lán)化:自來水沖洗（堿化，核藍(lán)色）:15-20min5、蒸餾水（洗去多余的堿）:1-2min第二十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日獸醫(yī)病理解剖學(xué)實驗6、逐級入50%、70%、85%乙醇，:每級1-2min

7、伊紅-95%乙醇染液:15s～2min8、95%、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ逐級脫水，每級1-2min9、1：1無水乙醇：二甲苯:5min10、二甲苯

Ⅰ

：5min11