標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19495.5-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定量PCR檢測方法》是中國關(guān)于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測的一項國家推薦性標(biāo)準(zhǔn)，重點介紹了使用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中特定核酸序列進行定量檢測的方法。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

標(biāo)準(zhǔn)范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中目標(biāo)DNA或RNA片段的濃度或拷貝數(shù)的方法。適用于轉(zhuǎn)基因植物、微生物及其制品中轉(zhuǎn)基因成分的定性和定量分析。

術(shù)語和定義

  • 實時熒光定量PCR：通過在PCR擴增過程中實時監(jiān)測熒光信號強度變化，實現(xiàn)對模板DNA初始量的定量分析。
  • 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：利用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立熒光信號與模板濃度之間的關(guān)系曲線，用于未知樣品的定量分析。

原理

該方法基于TaqMan探針或SYBR Green染料技術(shù)，在PCR擴增時，隨著靶標(biāo)序列的增加，熒光信號強度隨之增強，通過監(jiān)測這一過程，可以計算出樣本中目標(biāo)核酸的初始含量。

試劑與材料

詳細(xì)列出了進行PCR實驗所需的各種試劑、引物、探針的選擇原則及質(zhì)量要求，以及標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法。

儀器設(shè)備

包括實時熒光定量PCR儀、離心機、超凈工作臺等實驗設(shè)備的基本要求和操作規(guī)范。

檢測步驟

  1. 樣品處理：詳細(xì)說明了從轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中提取DNA或RNA的步驟和注意事項。
  2. PCR反應(yīng)體系配制：介紹如何根據(jù)實驗需求準(zhǔn)備反應(yīng)混合液。
  3. PCR程序設(shè)置：包括預(yù)變性、循環(huán)變性、退火、延伸等各階段的溫度和時間設(shè)定。
  4. 數(shù)據(jù)分析：解釋如何根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對實驗結(jié)果進行定量分析。

精密度與準(zhǔn)確度

提供了重復(fù)性限和再現(xiàn)性限的計算方法，以及評價檢測方法精密度和準(zhǔn)確度的準(zhǔn)則。

檢出限與定量限

定義了檢出限（LOD）和定量限（LOQ），明確了能可靠檢測和定量的最低核酸濃度。

試驗報告

規(guī)定了檢測報告應(yīng)包含的信息，如樣品信息、檢測方法、結(jié)果數(shù)據(jù)、結(jié)論及必要的備注等。

該標(biāo)準(zhǔn)為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中特定核酸序列的定量檢測提供了統(tǒng)一的技術(shù)指導(dǎo)和操作流程，確保了檢測結(jié)果的可比性和準(zhǔn)確性，對于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性評估、市場監(jiān)管及貿(mào)易具有重要意義。


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  • 2004-04-13 頒布
  • 2004-04-13 實施
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文檔簡介

ICS67.050B04中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T：19495.5-一2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定量PCR檢測方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-QuantitativePCRmethodsbasedonnucleicacid2004-04-13發(fā)布2004-04-13實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T19495.5-2004三前言范圍2規(guī)范性引用文件3術(shù)語、定義和縮略語·防污染措施45原理6試劑7主要儀器設(shè)備8檢測…………結(jié)果分析與計算10結(jié)果表述…側(cè)試報告附錄A（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因大豆GTS-40-3-2實時熒光PCR檢測方法附錄B（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米MON810實時熒光PCR檢測方法10附錄C（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米Br176實時熒光PCR檢測方法附錄D（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米Bul1實時熒光PCR檢測方法工7附錄E（規(guī)范性附錄）轉(zhuǎn)基因玉米GA21實時熒光PCR檢測方法10附錄F（規(guī)范性附錄)轉(zhuǎn)基因玉米T25實時熒光PCR檢測方法附錄G（規(guī)范性附錄)轉(zhuǎn)基因油菜RT73實時熒光PCR檢測方法參考文獻25

GB/T19495.5-2004GB/T19495《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測》為系列標(biāo)準(zhǔn)：GB/T19495.1—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測通用要求和定義：GB/T19495.2—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求：GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法；-GB/T19495.4—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定性PCR檢測方法：-GB/T19495.5—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定量PCR檢測方法；-GB/T19495.6—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測基因芯片檢測方法;GB/T19495.7—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測抽樣和制樣方法；GGB/T19495.8—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測蛋白質(zhì)檢測方法。本部分的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E、附錄F和附錄G為規(guī)范性附錄本部分由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會提出并歸口。本部分由中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局和國家質(zhì)檢總局動植物檢疫實驗所負(fù)責(zé)起草，中華人民共和國江寧出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國上海出人境檢驗檢疫局、中華人民共和國深圳出人境檢驗檢疫局和中國進出口商品檢驗技術(shù)研究所參加起草本部分主要起草人：草文、朱水芳、曹際娟、潘良文、陳紅運、黃文勝、章桂明、徐寶梁、趙文軍、董潔本部分系首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T19495.5—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定量PCR檢測方法范圍GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分核酸定量檢測方法本部分的規(guī)范性附錄規(guī)定了不同轉(zhuǎn)基因品種和品系核酸定量檢測方法。本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因成分絕對含量和相對含量的計算方法本部分適用于食品、飼料、種子及其環(huán)境材料中轉(zhuǎn)基因成分的實時熒光PCR定量檢測本部分也適用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測陽性結(jié)果的確證檢測。范性引用文件下列文件中的條款通過GB/T19495的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分,然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本部分。GB/T19495.1—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測通用要求和定義GB/T19495.2—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求GB/T19495.3-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法GB/T19495.4—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定性PCR檢測方法術(shù)語、定義和縮略語本部分采用下列術(shù)語、定義和縮略語3.1術(shù)語和定義GB/T19495.1確立的以及下列術(shù)語和定義適用于GB/T19495的本部分3.1.1檢測低限Iimitofdetection.LOD在假陰性結(jié)果不超過5%的條件下，檢測方法所能檢測的最低濃度和含量3.1.2外源基因exogenousgene利用生物工程技術(shù)轉(zhuǎn)入的其他生物基因，使該生物品種表現(xiàn)新的生物學(xué)性狀3.1.3陽性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)positivereferencematerials由認(rèn)可機構(gòu)制備、有湖源性的并經(jīng)檢測證

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