GB/T 18639-2002狂犬病診斷技術(shù)

ICS.11.220B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18639—2002狂犬病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforrabiesinanimals2002-02-19發(fā)布2002-05-01實(shí)施中華人民共和國(guó)發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

GB/T18639-2002狂犬?。╮abies)是由彈狀病毒科狂犬病病毒引起的一種人獸共患的急性接觸性傳染病。主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng),引起狂瓣不安和意識(shí)素亂等癥狀，最后麻痹、衰竭而死。發(fā)病率不高·病死率幾乎為百分之百。本病呈世界性分布，以亞洲最多發(fā)生。我國(guó)也不例外.近年來(lái)有增多的趨勢(shì)。世界各國(guó)十分重視狂犬病的研究和檢疫。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）,OfficeInten-tionaldesEpizootic(法）OIE7和我國(guó)已將其列為重點(diǎn)防制的二類(lèi)動(dòng)物疾病?？袢“Y狀非常明顯，卻非十分特異,且無(wú)肉眼可見(jiàn)的特殊病變。狂犬病的確診有賴(lài)于實(shí)驗(yàn)室的檢查結(jié)果。但是,由于本病發(fā)病急，病程短，病死率高，使得實(shí)驗(yàn)室診斷通常以檢查病毒抗原為主。例如，世界衛(wèi)生組織(WHO)已把基于病原驗(yàn)定的內(nèi)基氏個(gè)體(negribodies）檢查、免疫熒光試驗(yàn)和小鼠及細(xì)胞培養(yǎng)物感染試驗(yàn)，作為診斷狂大病的定性方法并將其標(biāo)準(zhǔn)化。IE予以采納并向各成員國(guó)推薦使用。本標(biāo)淮是參照WHO和OIE推薦的這些方法，結(jié)合我國(guó)的研究成果和實(shí)際情況而制定的。本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施,對(duì)提高狂犬病的診斷和檢疫水平.及時(shí)采取防制措施，保證人畜健康，將起到重要作用需要指出的是·內(nèi)基氏小體檢查和免疫熒光試驗(yàn)分別可能產(chǎn)生5%～10%和2%～5%的假陰性結(jié)果.因此,在進(jìn)行上述兩項(xiàng)檢查的同時(shí)，應(yīng)進(jìn)行小鼠感染試驗(yàn)·即把這三項(xiàng)檢查視為狂犬病診斷的三個(gè)必要程序。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為標(biāo)準(zhǔn)的附錄·附錄B為提示的附錄本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)人民解放軍農(nóng)牧大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：宣華、向華

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)汪犬病診斷技術(shù)GB/T18639-2002Diagnostictechniquesforrabiesinanimals1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了狂犬病內(nèi)基氏小體(negribodies)檢查、免疫熒光試驗(yàn)、小鼠和細(xì)胞培養(yǎng)物感染試驗(yàn)的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種易感動(dòng)物的狂犬病的診斷和檢疫。內(nèi)基氏小體檢查2.1準(zhǔn)備2.1.1器材：膠皮手套、口罩、防護(hù)眼鏡等個(gè)人防護(hù)器具：骨鋸、骨苗、骨剪、腦刀等動(dòng)物解部器具；切片機(jī)、染色缸等組織制片與染色器具：光學(xué)顯微鏡等。2.1.2標(biāo)本保存液：10%(體積分?jǐn)?shù))福爾馬林溶液,50%（體積分?jǐn)?shù))甘油生理鹽水2.1.3染色液：賽勒(Seller)氏染色液，曼(Mann)氏染色液，其配制方法見(jiàn)附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)2.1.4人身防護(hù)：見(jiàn)附錄B(提示的附錄)。2.2樣品的采集和運(yùn)送2.2.1對(duì)可疑為狂犬病而撲殺或死亡的動(dòng)物（含實(shí)驗(yàn)感染小鼠）應(yīng)在死亡后3h內(nèi)（越早越好)由大腦海馬回（Ammon氏角)小腦皮質(zhì)和延髓各切取1cm2組織數(shù)塊，放人滅菌玻璃瓶,再置于冰瓶?jī)?nèi)于24h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。2.2.2不能立即送檢者，應(yīng)加10%福爾馬林溶液固定，或加50%甘油生理鹽水,4C保存送檢。2.2.3不能就地取腦時(shí),小動(dòng)物可送檢完整的新鮮尸體,大動(dòng)物可送檢未部開(kāi)的頭顏。2.3標(biāo)本片的制備2.3.1對(duì)新鮮腦組織，可用外科刀切開(kāi)，以通過(guò)火焰去脂的載玻片在其切面上觸壓一下制成壓印片。每張載玻片可接觸2～3個(gè)部位，每份材料做3～4張。2.3.2在甘油鹽水中保存的新鮮病料·應(yīng)先用生理鹽水徹底洗去甘油，方可制片，制片方法同2.3.1.2.3.3所有壓印片于室溫下干燥后，浸入甲醇溶液固定2min。2.3.4經(jīng)10%福爾馬林溶液充分固定過(guò)的腦組織可按常規(guī)方法制備組織學(xué)切片。2.4染色2.4.1賽勒氏染色法在經(jīng)過(guò)甲醇固定并風(fēng)干的壓印片上.滴加賽勒氏染色液(以蓋滿壓印面而不溢為度)著染5?！?0s.然后用蒸水沖洗，干燥后鏡檢2.4.2曼氏染色法2.4.2.1將經(jīng)過(guò)甲醇固定并風(fēng)干的壓印片，或者經(jīng)過(guò)脫蠟、浸水、風(fēng)干的切片浸入曼氏染色液中浸染壓印片浸染5min,切片浸染時(shí)間因溫度而異(室溫下24h.或38C溫箱中12h.或60C溫箱中2h)。2.4.2.2以以蒸富