GB/T 18639-2002狂犬病診斷技術(shù)

ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18639—2002狂犬病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforrabiesinanimals2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18639-2002狂犬病（rabies)是由彈狀病毒科狂犬病病毒引起的一種人獸共患的急性接觸性傳染病。主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng),引起狂瓣不安和意識素亂等癥狀，最后麻痹、衰竭而死。發(fā)病率不高·病死率幾乎為百分之百。本病呈世界性分布，以亞洲最多發(fā)生。我國也不例外.近年來有增多的趨勢。世界各國十分重視狂犬病的研究和檢疫。世界動物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英）,OfficeInten-tionaldesEpizootic(法）OIE7和我國已將其列為重點防制的二類動物疾病。狂犬病癥狀非常明顯，卻非十分特異,且無肉眼可見的特殊病變?？袢〉拇_診有賴于實驗室的檢查結(jié)果。但是,由于本病發(fā)病急，病程短，病死率高，使得實驗室診斷通常以檢查病毒抗原為主。例如，世界衛(wèi)生組織(WHO)已把基于病原驗定的內(nèi)基氏個體(negribodies）檢查、免疫熒光試驗和小鼠及細胞培養(yǎng)物感染試驗，作為診斷狂大病的定性方法并將其標準化。IE予以采納并向各成員國推薦使用。本標淮是參照WHO和OIE推薦的這些方法，結(jié)合我國的研究成果和實際情況而制定的。本標準的實施,對提高狂犬病的診斷和檢疫水平.及時采取防制措施，保證人畜健康，將起到重要作用需要指出的是·內(nèi)基氏小體檢查和免疫熒光試驗分別可能產(chǎn)生5%～10%和2%～5%的假陰性結(jié)果.因此,在進行上述兩項檢查的同時，應進行小鼠感染試驗·即把這三項檢查視為狂犬病診斷的三個必要程序。本標準的附錄A為標準的附錄·附錄B為提示的附錄本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸口本標準起草單位：中國人民解放軍農(nóng)牧大學。本標準主要起草人：宣華、向華

中華人民共和國國家標準汪犬病診斷技術(shù)GB/T18639-2002Diagnostictechniquesforrabiesinanimals1范圍本標準規(guī)定了狂犬病內(nèi)基氏小體(negribodies)檢查、免疫熒光試驗、小鼠和細胞培養(yǎng)物感染試驗的技術(shù)要求。本標準適用于各種易感動物的狂犬病的診斷和檢疫。內(nèi)基氏小體檢查2.1準備2.1.1器材：膠皮手套、口罩、防護眼鏡等個人防護器具：骨鋸、骨苗、骨剪、腦刀等動物解部器具；切片機、染色缸等組織制片與染色器具：光學顯微鏡等。2.1.2標本保存液：10%(體積分數(shù))福爾馬林溶液,50%（體積分數(shù))甘油生理鹽水2.1.3染色液：賽勒(Seller)氏染色液，曼(Mann)氏染色液，其配制方法見附錄A(標準的附錄)2.1.4人身防護：見附錄B(提示的附錄)。2.2樣品的采集和運送2.2.1對可疑為狂犬病而撲殺或死亡的動物（含實驗感染小鼠）應在死亡后3h內(nèi)（越早越好)由大腦海馬回（Ammon氏角)小腦皮質(zhì)和延髓各切取1cm2組織數(shù)塊，放人滅菌玻璃瓶,再置于冰瓶內(nèi)于24h內(nèi)送達實驗室。2.2.2不能立即送檢者，應加10%福爾馬林溶液固定，或加50%甘油生理鹽水,4C保存送檢。2.2.3不能就地取腦時,小動物可送檢完整的新鮮尸體,大動物可送檢未部開的頭顏。2.3標本片的制備2.3.1對新鮮腦組織，可用外科刀切開，以通過火焰去脂的載玻片在其切面上觸壓一下制成壓印片。每張載玻片可接觸2～3個部位，每份材料做3～4張。2.3.2在甘油鹽水中保存的新鮮病料·應先用生理鹽水徹底洗去甘油，方可制片，制片方法同2.3.1.2.3.3所有壓印片于室溫下干燥后，浸入甲醇溶液固定2min。2.3.4經(jīng)10%福爾馬林溶液充分固定過的腦組織可按常規(guī)方法制備組織學切片。2.4染色2.4.1賽勒氏染色法在經(jīng)過甲醇固定并風干的壓印片上.滴加賽勒氏染色液(以蓋滿壓印面而不溢為度)著染5。～10s.然后用蒸水沖洗，干燥后鏡檢2.4.2曼氏染色法2.4.2.1將經(jīng)過甲醇固定并風干的壓印片，或者經(jīng)過脫蠟、浸水、風干的切片浸入曼氏染色液中浸染壓印片浸染5min,切片浸染時間因溫度而異(室溫下24h.或38C溫箱中12h.或60C溫箱中2h)。2.4.2.2以以蒸富