標準解讀
GB/T 18634-2002 是一項中華人民共和國國家標準,全稱為《飼用植酸酶活性的測定 分光光度法》。該標準詳細規(guī)定了使用分光光度法測定飼料中植酸酶活性的方法,旨在為飼料工業(yè)提供一個統一、準確的檢測手段,以確保飼料質量控制和動物營養(yǎng)需求。
標準適用范圍
本標準適用于單胃動物飼料中添加的植酸酶活性測定,植酸酶作為一種重要的飼料添加劑,能夠有效分解植物性飼料中的植酸磷,提高磷的利用率,減少環(huán)境污染。
測定原理
利用植酸酶對植酸的水解作用,產生無機磷酸鹽。在特定條件下,無機磷酸鹽與鉬酸鹽反應生成磷鉬雜多酸,再與抗壞血酸反應形成藍色絡合物,通過分光光度計在特定波長(一般為700nm)下測定吸光度,根據標準曲線計算出植酸酶活性。
主要步驟
-
樣品準備:準確稱取一定量的飼料樣品,經過適當處理后,制備成適合測定的試樣溶液。
-
反應體系建立:在試管或比色皿中,加入適量的試樣溶液、緩沖液、植酸鈉溶液等,按照標準規(guī)定的條件進行預處理和酶促反應。
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顯色與測定:向反應體系中加入鉬酸鹽溶液和抗壞血酸溶液,混勻后,在規(guī)定時間內于分光光度計上測定吸光度值。
-
標準曲線繪制:使用已知濃度的磷酸鹽標準溶液,按同樣步驟處理,得到一系列吸光度值,繪制標準曲線。
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結果計算:根據試樣溶液測得的吸光度,利用標準曲線計算出樣品中植酸酶活性的單位,通常表示為每克樣品在特定條件下每分鐘能釋放的無機磷的微克數(μg/min/g)。
注意事項
- 整個實驗過程中需嚴格控制實驗條件,如溫度、pH值和反應時間,以保證測定結果的準確性與重復性。
- 所有試劑應為分析純或更高純度,并注意避光保存,以防變質影響測定結果。
- 實驗操作需遵循實驗室安全規(guī)范,注意個人防護。
結果表示
最終報告應包含樣品編號、測定的吸光度值、計算出的植酸酶活性以及必要的重復測定數據,以便于質量控制和數據分析。
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文檔簡介
ICS.65.120B46中華人民共和國國家標準GB/T18634-2002飼用植酸酶活性的測定分光光度法DeterminationoffeedphytaseactivitySpectrothotometricmethod2002-02-19發(fā)布2002-07-01實施中華人民共和發(fā)布國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局
GB/T18634-2002本標準參考美國公職分析化學家協會(AOAC)方法和國外有關文獻資料制定。本標準確定了飼用植酸酶的活性單位定義·采用釩鉬顯色分光光度法測定植酸酶活性。此項標準分為絕對法和相對法,對標準物質和試劑的選擇均有詳細說明。規(guī)定了方法的適用范圍,檢測原理,檢測程序及最佳樣品濃度。本標準的附錄A是提示的附錄本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會提出并歸口。本標準起草單位:國家飼料質量監(jiān)督檢驗中心(北京)、羅氏泰山(上海)維生素制品有限公司、巴斯夫維生素有限公司。本標準主要起草人:馬東霞、蘇曉鷗、張?zhí)K、王云全、張若寒
中華人民共和國國家標準飼用植酸酶活性的測定GB/T18634-分光光度法一2002DeterminationoffeedphytaseactivitySpectrothotometricmethod1范圍本標準規(guī)定了以分光光度法測定飼用植酸酶活性的方法本標準適用于作飼料添加劑用的植酸酶產品,也適用于添加有植酸酶的配合飼料、濃縮飼料和添加劑預混合飼料。樣品最低檢出量為90U/kg.引用標準下列標準所包含的條文,通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時,所示版本均為有效。所有標準都會被修訂,使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。GB/T6682—1992分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法(neqISO3696:1987)植酸酶活性單位定義樣品在植酸鈉濃度為5.0mmol/L、溫度37C、pH值5.50的條件下,每分鐘從植酸鈉中釋放1mol無機磷,即為一個植酸酶活性單位,以U表示。方法原理植酸酶在一定溫度和pH條件下,水解底物植酸鈉·生成正磷酸和肌醇衍生物,在酸性溶液中,用釩相酸銨處理會生成黃色的(NH,)PO.NH,VO,·16MoO,復合物,在波長415nm下進行比色測定。5試劑和溶液本標準中所用試劑,在沒有注明其他要求時.均指分析純試劑和符合GB/T6682中規(guī)定的三級水。清洗試驗用容器不要用含磷清洗劑。5.1乙酸緩沖液(I),c(CH.COONa·3H.O)為0.25mol/L:稱取34.02g三水乙酸鈉,0.1g吐溫20于1000mL容量瓶中,加入900mL水溶解,用鹽酸調節(jié)pH至5.50±0.01,并用蒸留水定容至1000mL,室溫下存放2個月有效。5.2乙酸緩沖液(I).c(CH.COONa·3H.O)為0.25mol/L:稱取34.02g三水乙酸鈉.5g吐溫20.30g乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)于1000mL容量瓶中,加入900mL水溶解,用鹽酸調節(jié)pH至5.50±0.01.并用蒸雷水定容至1000mL,室溫下存放2個月有效5.3植酸鈉溶液·c(C.H.O.P.Naua)為7.5mmol/L:稱取0.6929g肌醇六礁酸鈉(C.H.O.P.Naa)于100mL容量瓶中,用乙酸緩沖液(5.1)溶解并定容至刻度,
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