GB/T 17494-2009馬傳染性貧血病間接ELISA診斷技術(shù)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１７４９４—２００９

代替ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８

馬傳染性貧血病間接犈犔犐犛犃診斷技術(shù)

犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狋犲犮犺狀犻狇狌犲狊狅犳犻狀犱犻狉犲犮狋犈犔犐犛犃狋犲犮犺狀犻狇狌犲

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２００９０４２３發(fā)布２００９０９０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１７４９４—２００９

前言

本標準參照世界動物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）最新公布的《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》２００４年版，并結(jié)

合我國現(xiàn)有動物衛(wèi)生法規(guī)及農(nóng)業(yè)部對馬傳貧的相關(guān)政策和措施修訂，其技術(shù)內(nèi)容與ＯＩＥ所推薦的基本

一致。

本標準代替ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８《馬傳染性貧血病間接ＥＬＩＳＡ技術(shù)規(guī)程》。

本標準與ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８相比主要變化如下：

———“前言”部分作適當(dāng)變動；

———刪除第２章的內(nèi)容；

———第４章“儀器設(shè)備”和第５章“試劑”部分改為“材料準備”，并對內(nèi)容作較大的改動；

———第６章“配制溶液”部分放置在附錄內(nèi)；

———修訂原標準中的所有語句和計量單位等錯誤用法。

本標準的附錄Ａ、附錄Ｂ、附錄Ｃ和附錄Ｄ為規(guī)范性附錄。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本標準由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所負責(zé)起草。

本標準主要起草人：相文華、郭巍、趙立平、戴玉坤。

本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７４９４—２００９

馬傳染性貧血病間接犈犔犐犛犃診斷技術(shù)

１范圍

本標準規(guī)定了馬傳染性貧血病間接ＥＬＩＳＡ診斷技術(shù)的測定原理、材料準備、操作方法和結(jié)果判

定等。

本標準適用于檢測馬血清中的馬傳貧病毒抗體?？捎糜谏a(chǎn)和經(jīng)營馬匹者對未注射馬傳貧疫苗馬

匹的檢疫、馬傳貧病馬的定性，也可用于對注射馬傳貧疫苗馬匹的免疫狀態(tài)進行測定。

２測定原理

用制備的馬傳貧病毒抗原，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反應(yīng)在固相載體上進行。當(dāng)被檢血清中

有馬傳貧病毒抗體存在時，則與孔壁上的抗原形成抗原抗體復(fù)合物，再與酶標記的抗體（抗馬免疫球蛋

白）反應(yīng)，最后通過測定酶作用底物催化后的產(chǎn)物，進行馬傳貧病毒抗體的定性、定量測定。

３材料準備

３．１器材

３．１．１９６孔平底微量反應(yīng)板。

３．１．２微量移液器。

３．１．３酶標測定儀。

３．１．４恒溫箱。

３．１．５保濕盒等。

３．２試劑

３．２．１兔抗馬ＩｇＧ辣根過氧化物酶結(jié)合物（簡稱酶標抗體）為凍干品，見附錄Ａ。

３．２．２馬傳貧病毒抗原包被板見附錄Ｂ。

３．２．３馬傳貧病毒標準陽性血清和標準陰性血清均為凍干品。

３．２．４磷酸鹽緩沖液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ）配制方法見第Ｃ．１章。

３．２．５洗滌緩沖液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ０．０５％吐溫２０）的配制方法見第Ｃ．２章。

３．２．６血清及酶標記抗體稀釋液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ０．０５％吐溫２００．１％白明膠１０％健康牛

血清）的配制方法見第Ｃ．３章。

３．２．７底物緩沖液（ｐＨ５．０磷酸鹽檸檬酸緩沖液，內(nèi)含０．０４％鄰苯二胺及０．０４５％過氧化氫）的配制

方法見第Ｃ．４章。

３．２．８終止液（２ｍｏｌ／Ｌ，硫酸）的配制方法見第Ｃ．５章。

４操作方法

４．１沖洗包被板：向各孔注入洗滌緩沖液，浸泡３ｍｉｎ，甩干，再注入洗滌緩沖液，重復(fù)３次。甩干孔內(nèi)

殘液，在濾紙上吸干。

４．２加被檢血清及對照血清：將每份被檢血清樣品各?。担唉蹋碳尤氲窖逑♂尠宓母骺變?nèi)，再將稀釋

液０．９５ｍＬ依次加入各孔內(nèi)，作１∶２０倍稀釋。混勻后分別?。保埃唉蹋桃来渭尤肟乖环磻?yīng)孔中，每

份血清加兩個孔。每塊反應(yīng)板設(shè)陰性血清和陽性血清對照各兩孔，每孔１００μＬ。蓋好包被板置３７