GB/T 17494-2009馬傳染性貧血病間接ELISA診斷技術(shù)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１７４９４—２００９

代替ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８

馬傳染性貧血病間接犈犔犐犛犃診斷技術(shù)

犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狋犲犮犺狀犻狇狌犲狊狅犳犻狀犱犻狉犲犮狋犈犔犐犛犃狋犲犮犺狀犻狇狌犲

犳狅狉犲狇狌犻狀犲犻狀犳犲犮狋犻狅狌狊犪狀犲犿犻犪犱犻狊犲犪狊犲

２００９０４２３發(fā)布２００９０９０１實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜１７４９４—２００９

前言

本標(biāo)準(zhǔn)參照世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）最新公布的《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》２００４年版，并結(jié)

合我國現(xiàn)有動(dòng)物衛(wèi)生法規(guī)及農(nóng)業(yè)部對(duì)馬傳貧的相關(guān)政策和措施修訂，其技術(shù)內(nèi)容與ＯＩＥ所推薦的基本

一致。

本標(biāo)準(zhǔn)代替ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８《馬傳染性貧血病間接ＥＬＩＳＡ技術(shù)規(guī)程》。

本標(biāo)準(zhǔn)與ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８相比主要變化如下：

———“前言”部分作適當(dāng)變動(dòng)；

———?jiǎng)h除第２章的內(nèi)容；

———第４章“儀器設(shè)備”和第５章“試劑”部分改為“材料準(zhǔn)備”，并對(duì)內(nèi)容作較大的改動(dòng)；

———第６章“配制溶液”部分放置在附錄內(nèi)；

———修訂原標(biāo)準(zhǔn)中的所有語句和計(jì)量單位等錯(cuò)誤用法。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ、附錄Ｂ、附錄Ｃ和附錄Ｄ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所負(fù)責(zé)起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：相文華、郭巍、趙立平、戴玉坤。

本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７４９４—１９９８。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７４９４—２００９

馬傳染性貧血病間接犈犔犐犛犃診斷技術(shù)

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬傳染性貧血病間接ＥＬＩＳＡ診斷技術(shù)的測(cè)定原理、材料準(zhǔn)備、操作方法和結(jié)果判

定等。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測(cè)馬血清中的馬傳貧病毒抗體。可用于生產(chǎn)和經(jīng)營馬匹者對(duì)未注射馬傳貧疫苗馬

匹的檢疫、馬傳貧病馬的定性，也可用于對(duì)注射馬傳貧疫苗馬匹的免疫狀態(tài)進(jìn)行測(cè)定。

２測(cè)定原理

用制備的馬傳貧病毒抗原，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反應(yīng)在固相載體上進(jìn)行。當(dāng)被檢血清中

有馬傳貧病毒抗體存在時(shí)，則與孔壁上的抗原形成抗原抗體復(fù)合物，再與酶標(biāo)記的抗體（抗馬免疫球蛋

白）反應(yīng)，最后通過測(cè)定酶作用底物催化后的產(chǎn)物，進(jìn)行馬傳貧病毒抗體的定性、定量測(cè)定。

３材料準(zhǔn)備

３．１器材

３．１．１９６孔平底微量反應(yīng)板。

３．１．２微量移液器。

３．１．３酶標(biāo)測(cè)定儀。

３．１．４恒溫箱。

３．１．５保濕盒等。

３．２試劑

３．２．１兔抗馬ＩｇＧ辣根過氧化物酶結(jié)合物（簡(jiǎn)稱酶標(biāo)抗體）為凍干品，見附錄Ａ。

３．２．２馬傳貧病毒抗原包被板見附錄Ｂ。

３．２．３馬傳貧病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清均為凍干品。

３．２．４磷酸鹽緩沖液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ）配制方法見第Ｃ．１章。

３．２．５洗滌緩沖液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ０．０５％吐溫２０）的配制方法見第Ｃ．２章。

３．２．６血清及酶標(biāo)記抗體稀釋液（０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２，ＰＢＳ０．０５％吐溫２００．１％白明膠１０％健康牛

血清）的配制方法見第Ｃ．３章。

３．２．７底物緩沖液（ｐＨ５．０磷酸鹽檸檬酸緩沖液，內(nèi)含０．０４％鄰苯二胺及０．０４５％過氧化氫）的配制

方法見第Ｃ．４章。

３．２．８終止液（２ｍｏｌ／Ｌ，硫酸）的配制方法見第Ｃ．５章。

４操作方法

４．１沖洗包被板：向各孔注入洗滌緩沖液，浸泡３ｍｉｎ，甩干，再注入洗滌緩沖液，重復(fù)３次。甩干孔內(nèi)

殘液，在濾紙上吸干。

４．２加被檢血清及對(duì)照血清：將每份被檢血清樣品各?。担唉蹋碳尤氲窖逑♂尠宓母骺變?nèi)，再將稀釋

液０．９５ｍＬ依次加入各孔內(nèi)，作１∶２０倍稀釋?；靹蚝蠓謩e取１００μＬ依次加入抗原包被反應(yīng)孔中，每

份血清加兩個(gè)孔。每塊反應(yīng)板設(shè)陰性血清和陽性血清對(duì)照各兩孔，每孔１００μＬ。蓋好包被板置３７