植物制片技術研究生課件

植物解剖與制片技術PlantAnatomyandSectioningTechnology學時分配：理論課4學時；實驗課24學時。教學目的：通過對植物制片技術的掌握，為研究植物胚胎學、植物解剖學、作物栽培、遺傳育種等教學、科研提供必備的技術。主要參考書目：1植物顯微技術，王灶安主編，農業(yè)出版社；2植物制片技術，李正理編著，科學出版社；3《西北植物學報》，《植物研究》，《武漢植物學研究》，《植物分類學報》等學術雜志?？己朔绞剑鹤珜憣嶒瀳蟾妫簩λ^察的器官結構進行詳細的描述并作進一步的討論，附上植物器官顯微結構圖。植物顯微制片技術

植物制片的類型和方法切片法：徒手切片法

石蠟切片法滑走切片機切片法半薄切片法超薄切片法非切片法：離析法壓片法整體封存法石蠟法制片原理與方法

一、材料的選擇與分割

1.新鮮、健康、有代表性的材料；

2.生長發(fā)育的不同階段;3.大小適當，0.5cm左右.

二、殺生、固定與保存

殺生：固定：

1根據固定目的物本身的結構性質；

2分割大的材料；

3抽氣；

4標記.(整染）

固定液的配置及使用：

FAA固定液：適用范圍：根、莖、葉、花藥、子房固定時間：24h低溫配方：福爾馬林5ml

冰醋酸5ml70%酒精90ml

卡諾固定液：適用范圍：根尖、花藥、子房固定時間：小于24h，15-30分鐘配方：ab

純酒精15ml30ml

氯仿5ml

冰醋酸5ml1ml

保存：

70%酒精三、脫水

作用：1

除去組織內的水分；

2使石蠟順利進入細胞內脫水劑：

1酒精：50%--70%--85%--95%--100%（梯度脫水）

2二氧雜環(huán)己烷

3正丁醇

4叔丁醇

5丙酮

四、透明作用：1

使材料透明、干凈；

2便于包埋劑及封固劑的進入透明劑：

1二甲苯：1/2純酒精+1/2二甲苯——二甲苯

2甲苯或苯；

3氯仿

4丁香油、香柏油等五、浸蠟

1低溫浸蠟：40℃左右（1夜）

2高溫浸蠟：58℃左右（6小時以內）六、包埋

1選取合適熔點的石蠟；

2包埋用具的準備要點：動作迅速

七、切片

1修塊;2切片:厚度在8-14μma切片有裂紋

b蠟帶彎曲

c材料破碎

d切片卷成圓筒

e蠟帶皺縮八、粘片與展片

粘片劑:

明膠1g

石炭酸2g

甘油15ml

蒸餾水100ml

方法:a38℃左右

b涂抹粘片劑

c將蠟片置于玻片中央

d材料呈透明質感

e38℃烘烤至干燥

f標記

九、脫蠟

方法:二甲苯Ⅰ30分鐘(40℃溫箱中)

二甲苯Ⅱ10分鐘

十、染色

（一）染料的分類

a來源：天然人工

b化學性質：堿性：番紅酸性：固綠中性：

c性能：核染料：蘇木精、番紅細胞質染料：固綠、苯胺藍細胞壁染料：番紅組織化學染料；蘇丹Ⅲ

熒光染料：

（二）幾種常用染料的性質及配制

a蘇木精：溶于酒精、甘油和熱水中。

b番紅：溶于酒精、水中。

c固綠：易溶于酒精。

d堿性品紅：作為組化試劑，用于檢驗DNA、多糖物質等

（三）一般的染色方法

1材料是否完整:整體染色切片染色

2染料的種類:單染二重染色三重(多重)染色

（四）染色時注意的事項

1根據觀察目的、樣品的結構性質；

2溶液和染液的濃度相同；

3堿性染液先染，酸性染液后染；

4染色可深不可淺；

5染色的時間；

十一、封藏與封藏劑目的：1長期保存

2使材料可以清楚的顯現出來封藏劑種類：

1樹脂性封藏劑：香柏油、合成樹脂、加拿大樹膠：溶于二甲苯、氯仿等溶劑，熔點為61℃，不能加熱，折光率近似玻璃，1.547。

2水溶性封藏劑：阿拉伯樹膠、甘油、明膠、糖漿等。十二顯微觀察與照相石蠟法制片流程

步驟一：（整染）

取材——固定——脫水(70%酒精—85%酒精—95%酒精—100%酒精—100%酒精,每步2-4h)——透明（1/2二甲苯+1/2酒精，2h；純二甲苯，2h）——低溫浸蠟（加碎蠟至飽和，40℃，過夜）（一天）步驟二：繼續(xù)低溫浸蠟（40℃，過夜）——高溫浸蠟（58℃，換純蠟，每2h換蠟一次，不超過6h）——包埋（一個蠟船放3-4個材料）（一天）步驟三：修塊——切片——粘片——展片——烘片（一天）

步驟四：脫蠟與染色：二甲苯Ⅰ（30分鐘，40度溫箱）——二甲苯Ⅱ（10分鐘）——復水（1/2二甲苯+