動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)方法？促進(jìn)融合的方法？融合完成的標(biāo)志植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過(guò)程2021/4/272成果和未解決的問(wèn)題

成果：克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交的障礙，出現(xiàn)自然界沒(méi)有的新品種。未解決的問(wèn)題：未能讓雜種植物按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良。2021/4/273如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶啦！動(dòng)物細(xì)胞也能融合嗎？2021/4/274一、動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞A細(xì)胞B雜交細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒2021/4/275不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂1、動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程2021/4/276思考題1、植物體細(xì)胞雜交前做何處理？怎么處理？去壁

酶解法，如纖維素酶或果膠酶2、動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、振動(dòng)、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法2021/4/2774、動(dòng)物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5、植物體細(xì)胞雜交過(guò)程應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？不能6、你能歸納出什么叫做動(dòng)物細(xì)胞融合嗎？思考題2021/4/2782、動(dòng)物細(xì)胞融合的概念

動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。2021/4/2797、你推測(cè)一下動(dòng)物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題

利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞8、在生產(chǎn)實(shí)際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？

生產(chǎn)單克隆抗體2021/4/2710細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？

因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會(huì)感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。

細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？

細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。2021/4/27111.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2.如何得到抗體？提問(wèn)？二、單克隆抗體2021/4/2712

抗體1、抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞

抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞

抗體抗原不純抗體不純篩選單一漿細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體2、特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏二、單克隆抗體2021/4/2713設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？雜種細(xì)胞二、單克隆抗體2021/4/2714

？

？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？

抗原漿細(xì)胞2.制備過(guò)程：

二、單克隆抗體2021/4/2715BBBB瘤瘤瘤瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選（特定的選擇性培養(yǎng)基）雜種細(xì)胞2021/4/2716整個(gè)制備過(guò)程要經(jīng)過(guò)幾次篩選?（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開(kāi)始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò)克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。）2021/4/27173.單克隆抗體的應(yīng)用：①作為診斷試劑②用于治療疾病和運(yùn)載藥物生物導(dǎo)彈

特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。2021/4/2718主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較2021/4/2719

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案3、圖中B為_(kāi)_______過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________2、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______4、C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無(wú)限增殖原代傳代B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC2021/4/2720下列屬于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是A.培養(yǎng)基成分不同B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是A．培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清B．原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)停滯C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到40～50代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測(cè)有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞AC2021/4/2721生物技術(shù)的發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復(fù)生”將不再是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功“復(fù)生”野驢的方法是 A．將野驢的體細(xì)胞取出，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個(gè)體B．將野驢的體細(xì)胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個(gè)體C．取出野驢的體細(xì)胞核移植到母家驢的去核卵細(xì)胞中，經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個(gè)體D．將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中，培育成新個(gè)體C2021/4/2722一只羊的卵細(xì)胞核被另一只羊的體細(xì)胞核置換后，這個(gè)卵細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次分裂，再植入第三只羊的子宮內(nèi)發(fā)育，結(jié)果產(chǎn)下一只羊羔。這種克隆技術(shù)具有多種用途，但是不能A．有選擇地繁殖某一性別的家畜B．繁殖家畜中的優(yōu)秀個(gè)體C．用于保存物種D．改變動(dòng)物的基因型D2021/4/2723下列哪—項(xiàng)屬于克隆 A．將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲(chóng)的細(xì)胞內(nèi)C．將鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過(guò)免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞D．將某腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個(gè)細(xì)胞系試管嬰兒、試管苗和克隆羊三者均屬于生物工程技術(shù)的杰出成果，下面敘述正確的是A.都屬于無(wú)性生殖能保持母本性狀B.都是細(xì)胞工程的技術(shù)范圍C.都充分體現(xiàn)了體細(xì)胞的全能性D.都不會(huì)發(fā)生基因重組和變異DB2021/4/2724下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答：（1）A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自

。（2）容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是

，然后用

酶處理，使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)，這樣做的目的是

。（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有___________________________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第

代，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為

。（4）為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用

處理，然后配置成

，再分裝。（5）在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡，原因是

。2021/4/2725CCTV一2于2005年4月7日?qǐng)?bào)道，衛(wèi)生部4月6日發(fā)布了《蘇丹紅危險(xiǎn)性報(bào)告評(píng)估》，報(bào)道中提到蘇丹紅一號(hào)是一種人工色素(工業(yè)染料)，它在人體內(nèi)代謝生成相應(yīng)的胺類?？蒲腥藛T欲采用一定的技術(shù)手段探究蘇丹紅是否對(duì)人體有危害。請(qǐng)回答：（1）根據(jù)所學(xué)的動(dòng)物細(xì)胞工程知識(shí)，你認(rèn)為采取下列哪種技術(shù)手段最合適：

A．動(dòng)物細(xì)胞融合B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)C．胚胎移植D．核移植2021/4/2726（2）根據(jù)上述選擇，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)來(lái)探究“蘇丹紅一號(hào)”是否對(duì)人體有危害。[1]該實(shí)驗(yàn)的原理是：

。[2]實(shí)驗(yàn)方法步驟：①材料準(zhǔn)備：從醫(yī)院婦產(chǎn)科獲取所需要的原材料組織，濃度為0.09％“蘇丹紅一號(hào)”試劑，高倍顯微鏡，培養(yǎng)瓶若干，配制好的培養(yǎng)液，剪刀，培養(yǎng)箱，所需要的酶。

②制備檢測(cè)細(xì)胞：a．配制細(xì)胞懸浮液：

。b．將懸浮液分裝到兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間。③檢測(cè)過(guò)程：

。④實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察、分析得出結(jié)論。(略)

2021/4/2727動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動(dòng)物細(xì)胞融合中有特殊性的是A．融合的原理B．融合的過(guò)程C．融合的誘導(dǎo)手段D．融合的結(jié)果C2021/4/2728下表為動(dòng)、植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容比較，你認(rèn)為錯(cuò)誤的有植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程特殊處理酶解法去除細(xì)胞壁胰蛋白酶處理配制細(xì)胞懸液融合方法物理方法，化學(xué)方法物理方法，化學(xué)方法，生物方法典型應(yīng)用人工種子，種間雜種植物單克隆抗體的制備培養(yǎng)基的區(qū)別麥芽糖是離體組織賴以生長(zhǎng)的成分動(dòng)物血清不可缺少A．0處B．1處C．2處D．3處2021/4/2729（1）若A、B是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用

處理，除去了

；由A、B到細(xì)胞C的過(guò)程中，常用的物理方法是

。融合完成的標(biāo)志是

。（2）若A、B是植物細(xì)胞，則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用

技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。（3）若A、B是動(dòng)物細(xì)胞，一般取自

，然后用

使其分散開(kāi)來(lái)；由A、B到C的過(guò)程中，常用的不同于植物細(xì)胞融合的手段是

，所形成的D稱為

，A、B融合為C的過(guò)程說(shuō)明了細(xì)胞膜具有

。（1）纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁電刺激、振動(dòng)、離心產(chǎn)生新的細(xì)胞壁（2）植物組織培養(yǎng)(3)動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織胰蛋白酶滅活的病毒誘導(dǎo)雜種細(xì)胞一定的流動(dòng)性2021/4/2730（4）若該過(guò)程是制備單克隆抗體，A為小鼠效應(yīng)B細(xì)胞，那么，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠已經(jīng)被注射了

。注射后小鼠身體發(fā)生了相應(yīng)的免疫反應(yīng)，生成了_________，圖中B為

。（5）若該過(guò)程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過(guò)程中，所形成的C有

種，用來(lái)培養(yǎng)的D細(xì)胞應(yīng)該是

。從中選擇出它的方法是

培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是培養(yǎng)液中培養(yǎng)和

。(4)抗原效應(yīng)B細(xì)胞抗體和記憶細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞

(5)3雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基小鼠腹腔內(nèi)增殖2021/4/2731若人基因的作用不受鼠基因影響，則支配a、b、c、d和e酶合成的基因依次位于人的

號(hào)染色體上。將分離出的雜種細(xì)胞在不同條件下繼續(xù)培養(yǎng)，獲得A、B、C三細(xì)胞株。各細(xì)胞株內(nèi)含有的人染色體如有表（“+”有，“—”無(wú)）測(cè)定各細(xì)胞株中人體所具有的五種酶的活性。結(jié)果是：①B株有a酶活性；②A、B、C株均有b酶活性：③A、B株有c酶活性；④C株有d酶活性；⑤A、B、C株均無(wú)e酶活性。細(xì)胞株人染色體編號(hào)12345678A株＋＋＋＋－－－－B株＋＋－－＋＋－－C株＋－＋－＋－＋－2021/4/2732比特爾等在1941年提出了“一個(gè)基因一種酶假說(shuō)”。在生物體內(nèi)，各類物質(zhì)或分子是經(jīng)過(guò)一系列代謝步驟合成的，每一步都受特定的酶所催化?，F(xiàn)假設(shè)已分離到某微生物