動物細(xì)胞融合與單克隆抗體

動物細(xì)胞融合與單克隆抗體雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)方法？促進融合的方法？融合完成的標(biāo)志植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過程2021/4/272成果和未解決的問題

成果：克服不同生物遠緣雜交的障礙，出現(xiàn)自然界沒有的新品種。未解決的問題：未能讓雜種植物按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良。2021/4/273如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶啦！動物細(xì)胞也能融合嗎？2021/4/274一、動物細(xì)胞融合細(xì)胞A細(xì)胞B雜交細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒2021/4/275不同DNA的兩個細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進行有絲分裂1、動物細(xì)胞融合過程2021/4/276思考題1、植物體細(xì)胞雜交前做何處理？怎么處理？去壁

酶解法，如纖維素酶或果膠酶2、動物細(xì)胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細(xì)胞無細(xì)胞壁3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、振動、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法2021/4/2774、動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法？能還可以利用滅活的病毒進行誘導(dǎo)5、植物體細(xì)胞雜交過程應(yīng)先進行原生質(zhì)體融合再進行組織培養(yǎng)形成完整的個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？不能6、你能歸納出什么叫做動物細(xì)胞融合嗎？思考題2021/4/2782、動物細(xì)胞融合的概念

動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞形成一個細(xì)胞的過程。2021/4/2797、你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題

利用動物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞8、在生產(chǎn)實際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？

生產(chǎn)單克隆抗體2021/4/2710細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？

因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。

細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)用于哪些方面？

細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)及制備單克隆抗體。2021/4/27111.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2.如何得到抗體？提問？二、單克隆抗體2021/4/2712

抗體1、抗原動物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞

抗原動物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞

抗體抗原不純抗體不純篩選單一漿細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體2、特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏二、單克隆抗體2021/4/2713設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體？雜種細(xì)胞二、單克隆抗體2021/4/2714

？

？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？

抗原漿細(xì)胞2.制備過程：

二、單克隆抗體2021/4/2715BBBB瘤瘤瘤瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選（特定的選擇性培養(yǎng)基）雜種細(xì)胞2021/4/2716整個制備過程要經(jīng)過幾次篩選?（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。）2021/4/27173.單克隆抗體的應(yīng)用：①作為診斷試劑②用于治療疾病和運載藥物生物導(dǎo)彈

特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。2021/4/2718主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目植物、動物細(xì)胞融合的比較2021/4/2719

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實驗方案3、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________2、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______4、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC2021/4/2720下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是A.培養(yǎng)基成分不同B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行C.動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能D.動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株下列與動物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是A．培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清B．原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會出現(xiàn)生長停滯C．動物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到40～50代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變D．動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞AC2021/4/2721生物技術(shù)的發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復(fù)生”將不再是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功“復(fù)生”野驢的方法是 A．將野驢的體細(xì)胞取出，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個體B．將野驢的體細(xì)胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個體C．取出野驢的體細(xì)胞核移植到母家驢的去核卵細(xì)胞中，經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個體D．將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中，培育成新個體C2021/4/2722一只羊的卵細(xì)胞核被另一只羊的體細(xì)胞核置換后，這個卵細(xì)胞經(jīng)過多次分裂，再植入第三只羊的子宮內(nèi)發(fā)育，結(jié)果產(chǎn)下一只羊羔。這種克隆技術(shù)具有多種用途，但是不能A．有選擇地繁殖某一性別的家畜B．繁殖家畜中的優(yōu)秀個體C．用于保存物種D．改變動物的基因型D2021/4/2723下列哪—項屬于克隆 A．將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲的細(xì)胞內(nèi)C．將鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞D．將某腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個細(xì)胞系試管嬰兒、試管苗和克隆羊三者均屬于生物工程技術(shù)的杰出成果，下面敘述正確的是A.都屬于無性生殖能保持母本性狀B.都是細(xì)胞工程的技術(shù)范圍C.都充分體現(xiàn)了體細(xì)胞的全能性D.都不會發(fā)生基因重組和變異DB2021/4/2724下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此回答：（1）A中放置的是動物器官或組織。它一般取自

。（2）容器A中的動物器官或組織首先要進行的處理是

，然后用

酶處理，使細(xì)胞分散開來，這樣做的目的是

。（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進行，瓶中的培養(yǎng)基成分有___________________________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第

代，到這時的培養(yǎng)稱為

。（4）為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用

處理，然后配置成

，再分裝。（5）在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡，原因是

。2021/4/2725CCTV一2于2005年4月7日報道，衛(wèi)生部4月6日發(fā)布了《蘇丹紅危險性報告評估》，報道中提到蘇丹紅一號是一種人工色素(工業(yè)染料)，它在人體內(nèi)代謝生成相應(yīng)的胺類?？蒲腥藛T欲采用一定的技術(shù)手段探究蘇丹紅是否對人體有危害。請回答：（1）根據(jù)所學(xué)的動物細(xì)胞工程知識，你認(rèn)為采取下列哪種技術(shù)手段最合適：

A．動物細(xì)胞融合B．動物細(xì)胞培養(yǎng)C．胚胎移植D．核移植2021/4/2726（2）根據(jù)上述選擇，請你設(shè)計一個實驗來探究“蘇丹紅一號”是否對人體有危害。[1]該實驗的原理是：

。[2]實驗方法步驟：①材料準(zhǔn)備：從醫(yī)院婦產(chǎn)科獲取所需要的原材料組織，濃度為0.09％“蘇丹紅一號”試劑，高倍顯微鏡，培養(yǎng)瓶若干，配制好的培養(yǎng)液，剪刀，培養(yǎng)箱，所需要的酶。

②制備檢測細(xì)胞：a．配制細(xì)胞懸浮液：

。b．將懸浮液分裝到兩個以上的培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間。③檢測過程：

。④實驗結(jié)果觀察、分析得出結(jié)論。(略)

2021/4/2727動物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動物細(xì)胞融合中有特殊性的是A．融合的原理B．融合的過程C．融合的誘導(dǎo)手段D．融合的結(jié)果C2021/4/2728下表為動、植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容比較，你認(rèn)為錯誤的有植物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程特殊處理酶解法去除細(xì)胞壁胰蛋白酶處理配制細(xì)胞懸液融合方法物理方法，化學(xué)方法物理方法，化學(xué)方法，生物方法典型應(yīng)用人工種子，種間雜種植物單克隆抗體的制備培養(yǎng)基的區(qū)別麥芽糖是離體組織賴以生長的成分動物血清不可缺少A．0處B．1處C．2處D．3處2021/4/2729（1）若A、B是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用

處理，除去了

；由A、B到細(xì)胞C的過程中，常用的物理方法是

。融合完成的標(biāo)志是

。（2）若A、B是植物細(xì)胞，則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用

技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。（3）若A、B是動物細(xì)胞，一般取自

，然后用

使其分散開來；由A、B到C的過程中，常用的不同于植物細(xì)胞融合的手段是

，所形成的D稱為

，A、B融合為C的過程說明了細(xì)胞膜具有

。（1）纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁電刺激、振動、離心產(chǎn)生新的細(xì)胞壁（2）植物組織培養(yǎng)(3)動物胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織胰蛋白酶滅活的病毒誘導(dǎo)雜種細(xì)胞一定的流動性2021/4/2730（4）若該過程是制備單克隆抗體，A為小鼠效應(yīng)B細(xì)胞，那么，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠已經(jīng)被注射了

。注射后小鼠身體發(fā)生了相應(yīng)的免疫反應(yīng)，生成了_________，圖中B為

。（5）若該過程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過程中，所形成的C有

種，用來培養(yǎng)的D細(xì)胞應(yīng)該是

。從中選擇出它的方法是

培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是培養(yǎng)液中培養(yǎng)和

。(4)抗原效應(yīng)B細(xì)胞抗體和記憶細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞

(5)3雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基小鼠腹腔內(nèi)增殖2021/4/2731若人基因的作用不受鼠基因影響，則支配a、b、c、d和e酶合成的基因依次位于人的

號染色體上。將分離出的雜種細(xì)胞在不同條件下繼續(xù)培養(yǎng)，獲得A、B、C三細(xì)胞株。各細(xì)胞株內(nèi)含有的人染色體如有表（“+”有，“—”無）測定各細(xì)胞株中人體所具有的五種酶的活性。結(jié)果是：①B株有a酶活性；②A、B、C株均有b酶活性：③A、B株有c酶活性；④C株有d酶活性；⑤A、B、C株均無e酶活性。細(xì)胞株人染色體編號12345678A株＋＋＋＋－－－－B株＋＋－－＋＋－－C株＋－＋－＋－＋－2021/4/2732比特爾等在1941年提出了“一個基因一種酶假說”。在生物體內(nèi)，各類物質(zhì)或分子是經(jīng)過一系列代謝步驟合成的，每一步都受特定的酶所催化?，F(xiàn)假設(shè)已分離到某微生物