轉(zhuǎn)基因丁酰膽堿酯酶的酶學(xué)性質(zhì)研究

我們畢業(yè)啦其實是答辯的標題地方轉(zhuǎn)基因丁酰膽堿酯酶的酶學(xué)性質(zhì)研究論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望CONTANTS論文緒論論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望本論文以轉(zhuǎn)基因丁酰膽堿酯酶為研究對象，通過Ellman檢測法獲得轉(zhuǎn)基因酶的基本酶學(xué)性質(zhì)，進而為轉(zhuǎn)基因丁酰膽堿酯酶實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)、以及農(nóng)殘快速檢測檢測和臨床診療奠定基礎(chǔ)?！啊毖芯勘尘罢撐木w論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望123天然的丁酰膽堿酯酶主要從哺乳動物和家禽的血清和肝臟，以及魚類的腦組織中進行分離純化。原材料和分離純化成本的限制，使丁酰膽堿酯酶的應(yīng)用有一定局限性。丁酰膽堿酯酶是生物體內(nèi)一種重要水解酶，能與有機磷毒劑或殺蟲劑結(jié)合，并能水解許多酯類、肽類及酰胺類化合物，參與某些藥物的代謝過程，它還有促進細胞生長的作用。轉(zhuǎn)基因丁酰膽堿酯酶的研究目前主要集中在應(yīng)用昆蟲和哺乳動物細胞表達系統(tǒng)來重組表達人源丁酰膽堿酯酶，但其表達量和生物活性還不能讓人滿意。研究方法與結(jié)果論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望ABC誘導(dǎo)表達鎳柱親和層析、透析過夜、超濾濃縮分離純化酶學(xué)性質(zhì)獲得YPD平板上劃線YPD液體培養(yǎng)基BMGY培養(yǎng)基離心收集菌體細胞BMMY培養(yǎng)基重懸誘導(dǎo)表達參照Ellman

方法，稍加改進。以碘化硫代丁酰膽堿作為底物，DTNB溶液作為顯色劑，丁酰膽堿酯酶將底物分解后，產(chǎn)物硫代膽堿與DTNB反應(yīng)，生成一種黃色絡(luò)合物，在412nm處比色，以顯色程度來確定酶活性。論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望酶學(xué)性質(zhì)最適溫度最適pH熱穩(wěn)定性pH穩(wěn)定性金屬離子影響論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望不同金屬離子(1mM)相對酶活力(%)None100.0±2.45Li+121.97±5.92Mg2+77.53±5.92Ca2+99.24±7.73Cu2+20.22±7.17Na+93.26±3.95Mn2+90.15±8.49Fe2+89.89±4.24Co2+123.11±0.93EDTA128.09±3.57Zn2+125.38±3.55Ag+83.15±2.13K+40.19±3.62Li+、Co+、Zn2+

和EDTA對該酶的酶活性具有激活作用，Mg2+、Mn2+、Fe2+、Ag+對酶的活性具有抑制作用。表5-5不同金屬離子的影響總結(jié)與展望論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望

轉(zhuǎn)基因人源丁酰膽堿酯酶的最適pH為7.4，最適溫度為50℃，且有較好的pH穩(wěn)定性與熱穩(wěn)定性。與天然人源丁酰膽堿酯酶基本相似，除最適溫度相差較遠。推測原因是表達載體畢赤酵母雖具有蛋白翻譯后加工修飾的功能，但與天然蛋白的折疊加工尚存在一定差異，故重組酶的構(gòu)象與天然酶存在差異，造成酶學(xué)性質(zhì)的改變。Li+、Co+、Zn2+

和EDTA對轉(zhuǎn)基因酶的酶活性具有激活作用，Mg2+、Mn2+、Fe2+、Ag+對酶的活性具有抑制作用?？偨Y(jié)論文緒論研究背景研究方法與結(jié)果總結(jié)與展望

本研究僅僅完成了轉(zhuǎn)基因丁酰膽堿酯酶酶學(xué)性質(zhì)的初步探索，距離農(nóng)藥殘留的快速檢測還相差較