總膽固醇,小鼠(TC),elisa,試劑盒說(shuō)明書(shū)

上海廣銳生物科技有限公司上海廣銳生物科技有限公司PAGEPAGE3總膽固醇,小鼠（TC）酶聯(lián)免疫說(shuō)明書(shū)，elisa，試劑盒說(shuō)明書(shū)本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中總膽固醇的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠總膽固醇（TC）水平。用純化的小鼠總膽固醇T）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入總膽固醇再與HRP標(biāo)記的總膽固醇抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMBTMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總膽固醇450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度OD值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中小鼠總膽固醇T）濃度。試劑盒組成：試劑盒組成說(shuō)明書(shū)48孔配置1份96孔配置1份保存封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：450μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：10-2020（2000-3000轉(zhuǎn)/分清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分離心。尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)分。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)分。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。用。標(biāo)本融化后仍然保持2-℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.，用手工或勻漿器20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)分。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。-20.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl50μl分別加到第五、第六孔50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)50μl50μl（50μl，濃度分別為30μmol/L，200μmol/，100μmol/，5μmol/，2μmol/。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同、待測(cè)樣，然后再加待測(cè)樣品樣品最終稀釋度為5倍勻。3730分鐘。20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T20倍）倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置305次，拍干。50μl，空白孔除外。。。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl15分鐘.50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度值。測(cè)定應(yīng)在加終止15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)n倍）算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。計(jì)算：在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的O