原代培養(yǎng)乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及表面抗原研究

原代培養(yǎng)乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及表面

抗原研究作者：管思彬，馬愛群，蔣文慧【摘要】 目的建立乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞(SNC)的體外分離純化培養(yǎng)方法，了解SNC的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，觀察表面抗原超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道基因4(HCN4)和縫隙連接蛋白45(Cx45)的細(xì)胞表達(dá)特點(diǎn)，為細(xì)胞生物起搏的深入研究提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法取新生SD乳鼠的竇房結(jié)組織，胰酶逐次消化，并予差速貼壁及5溴脫氧尿嘧啶核苷(5 BrdU)純化處理進(jìn)行原代竇房結(jié)細(xì)胞的培養(yǎng)。結(jié)果在培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞中可觀察到3種形態(tài)的細(xì)胞，即梭形細(xì)胞、三角形細(xì)胞和多邊形細(xì)胞，其中梭形細(xì)胞所占比例最大，搏動(dòng)頻率最快，細(xì)胞器不發(fā)達(dá)，肌原纖維稀少，表達(dá)HCN4和Cx45；三角形細(xì)胞微量表達(dá)Cx45。結(jié)論①胰酶消化法結(jié)合差速貼壁及5 BrdU處理,是可靠的竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)技術(shù)；②搏動(dòng)頻率最快、HCN4和Cx45表達(dá)陽性的梭形細(xì)胞可能系竇房結(jié)起搏細(xì)胞。【關(guān)鍵詞】竇房結(jié)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)HCN4ABSTRACT:ObjectiveTounderstandmorphologicalcharacteristicsofsinoatrialnodecells(SNCs)bytakingpurifiedisolationandcultureofneonatalratsSNCsinvitroandtounderstandtheexpressioncharacteristicsofsurfaceantigenshyperpolarizationactivatedcyclicnucleotidegatedcationchannel4(HCN4)andconnexin45(Cx45)onSNCs.MethodsTheSNCswereisolatedfromsinusnodetissuesremovedfromneonatalratsbytrypsinandpurifiedculturedwithdifferentialattachmentand5 bromodeoxyuridine(BrdU)treatment.ResultsThreedifferenttypesofcellswereobservedamongthepurifiedculturedSNCs:spindle,triangularandirregularcells.Thespindlecellstookupthegreatestproportion,hadthefastestbeats,andhadlessdevelopedorganelleandscarcemuscularfibrils.ImmunofluorescencestainingwaspositiveagainstHCN4andCx45onthespindlecells.SmallamountsofHCN4wasobservedontriangularcells.Conclusion①IsolationbytrypsincombinedwithdifferentialattachmentandBrdUtreatmentisareliableapproachtoculturingsinoatrialnodecells.②ThespindlecellswiththefastestbeatsandpositiveexpressionsofHCN4andCx45maybethesinusnodepacemakercells.KEYWORDS:sinoatrialnodecell;cellculture;HCN4心臟生物起搏已成為治療竇房結(jié)病變所致緩慢型心律失常中的研究熱點(diǎn)，其中關(guān)鍵是改善、恢復(fù)竇房結(jié)功能甚至重建竇房結(jié)。因而，了解竇房結(jié)細(xì)胞特別是竇房結(jié)起搏細(xì)胞的形態(tài)、抗原表達(dá)及功能特點(diǎn)可以更好的對(duì)其進(jìn)行修復(fù)與替代。近年來關(guān)于竇房結(jié)細(xì)胞的培養(yǎng)已有若干報(bào)道［13］，但細(xì)胞表面抗原的研究較少，故本研究通過對(duì)原代培養(yǎng)的乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)及表面抗原觀察，旨在更好的了解竇房結(jié)細(xì)胞的特性，以期為生物起搏的研究提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出生24?36hSD乳鼠，雌雄不限，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。4周