DNA重組技術的基本工具動畫很副本1

會計學1DNA重組技術的基本工具動畫很副本1

這些定向改造基因的設想能實現(xiàn)嗎？

經過多年的努力，科學家終于在20世紀70年代創(chuàng)立了可以定向改造生物的新技術

——基因工程第1頁/共40頁第2頁/共40頁生長快、肉質好的轉基因魚(中國)乳汁中含有人生長激素的轉基因牛(阿根廷)轉基因實例第3頁/共40頁基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因普通棉花(無抗蟲特性)棉花細胞(含抗蟲基因)與運載體DNA拼接，導入棉花植株(有抗蟲特性)表達第4頁/共40頁專題1基因工程

基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，并通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品。由于基因工程是在DNA分子水平上進行設計和施工的，因此又叫做DNA重組技術或基因拼接技術。通俗地說，就是按照人們的意愿，把一種生物的某種基因提取出來，加以修飾改造，然后放到另一種生物的細胞中，定向地改造生物的遺傳性狀。第5頁/共40頁基因工程的別名操作環(huán)境操作對象操作水平基本過程原理結果基因拼接技術或DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平定向改造生物性狀或獲得基因產物剪切→拼接→導入→表達基因重組一、基因工程的概念第6頁/共40頁優(yōu)點：⑴定向改造生物性狀⑵克服遠緣雜交不親和的障礙⑶育種周期短第7頁/共40頁二、基因工程的誕生（一）基礎理論：1、DNA是遺傳物質的證明2、DNA雙螺旋結構和中心法則的確立3、遺傳密碼的破譯（二）技術發(fā)明：第8頁/共40頁1、基因轉移載體的發(fā)現(xiàn)2、工具酶的發(fā)明3、DNA合成和測序技術的發(fā)明4、DNA體外重組的實現(xiàn)5、重組DNA表達實驗的成功6、第一例轉基因生物的問世7、PCR技術的發(fā)明（二）技術發(fā)明：第9頁/共40頁§1DNA重組技術的基本工具培育抗蟲棉需要哪些工具？

第10頁/共40頁細菌供體細胞取出質粒取出DNA用限制酶切斷DNA用連接酶連接目的基因將重組DNA導入受體細胞擴增基因工程圖解第11頁/共40頁限制性內切酶作用過程點擊播放第12頁/共40頁識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。主要是原核生物約4000多種。4、來源：5、種類：1、作用：2、結果：形成兩種末端一、“分子手術刀”——限制性核酸內切酶黏性末端平末端3、特點：具有專一性（特異性）第13頁/共40頁G1’2’3’4’5’1’2’3’4’5’A3’,5’-磷酸二酯鍵3’端5’端3’端5’端磷酸二酯鍵第14頁/共40頁16仔細觀察各限制酶識別的特定序列有何特點？限制酶的識別序列限制酶所識別的序列的特點是：呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向對稱重復排列的，稱為回文序列第15頁/共40頁中軸線在G與A之間切割大腸桿菌的一種限制酶(EcoRⅠ)只能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開。EcoRI限制酶的作用第16頁/共40頁

黏性末端黏性末端EcoRI限制酶的切割

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。第17頁/共40頁SmaI只能識別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。中軸線SmaI限制酶的作用在G與C之間切割第18頁/共40頁平末端平末端SmaI限制酶的切割當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。第19頁/共40頁思考在自然界中有一些生物的DNA可能進入另一種生物的細胞中。我們有沒有學過相關的實例？

那么這類生物為什么沒有在長期的進化過程中被外源DNA的入侵而滅絕，它們有何保護機制？限制酶切割外源DNA,使之失效，從而達到保護自身的目的！第20頁/共40頁你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細菌的一種防御性工具，當外源DNA侵入時，會利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的。尋根問底為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶的細胞，其DNA分子中不具備這種限制酶的識別切割序列，或者通過甲基化酶將甲基轉移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。第21頁/共40頁基因的針線：DNA連接酶

G

AA

TT

CC

TT

AA

GG

AA

TT

CC

TT

AA

GGC

TT

AA

AA

TT

C

GG

C

TT

AA

AA

TT

C

GGC

TT

AA

AA

TT

C

G用同種限制酶切割第22頁/共40頁兩DNA片段要具有互補的黏性末端才能拼起來DNA連接酶的縫合作用可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的DNA單鏈缺口，但不能連接單鏈DNA！第23頁/共40頁把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來催化形成磷酸二酯鍵DNA連接酶的作用第24頁/共40頁

限制酶切割后有兩種不同的結果，一種產生黏性末端，一種產生平末端。那么恢復它們的連接時，所用DNA連接酶是否可以不加選擇？連接黏性末端連接黏性末端和平末端分類作用E.coliDNA連接酶連接酶T4DNA連接酶第25頁/共40頁DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶的縫合作用第26頁/共40頁二、“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：2、作用部位：兩類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶

是磷酸二酯鍵（扶手）不是氫鍵（梯子）

DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來，這樣一個重組的DNA分子就形成了。第27頁/共40頁AATTGCAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用返回第28頁/共40頁DNA連接酶DNA聚合酶相同點作用實質化學本質不同點模板作用對象

作用結果 用途都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質

不需要需要形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復制DNA連接酶與DNA聚合酶的比較只能將單個核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵第29頁/共40頁基因進入受體細胞的載體要讓一個從甲生物細胞內取出來的基因在乙生物體內進行表達，首先得將這個基因送到乙生物的細胞內去！能將外源基因送入細胞的工具就是載體。基因工程的載體被喻為：分子運輸車作為基因工程的載體需要怎樣的條件呢？第30頁/共40頁議一議2、能否用SARS病毒作為基因載體？3、作為載體，若沒有切割位點將怎樣？4、攜帶目的基因的載體是否進入了受體細胞，如何鑒定？5、假如目的基因導入受體細胞后不能復制，將怎樣？1、從化學組成來看，載體應含有什么成分？雙鏈DNA不能不能進行DNA的重組載體上應有標記基因可能造成基因丟失第31頁/共40頁載體的作用載體的必要條件載體的種類閱讀課本第6頁“分子運輸車”——運載體的相關內容，填寫下表自主學習1）能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存。2）具一個或多個限制酶切點，以便與外源基因連接。3）具有某些標記基因，便于進行鑒定和選擇。4）對受體細胞無害。1）作為運載工具，將目的基因導入受體細胞中2）在受體細胞內對目的基因進行大量復制①質粒②病毒：λ噬菌體衍生物、動植物病毒等。

第32頁/共40頁有標記基因的存在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。有切割位點能復制并帶著插入的目的基因一起復制質?！懵兜?、結構簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子。最常用運載體——質粒

實際上在基因工程操作中，真正被用作載體的質粒，都是在天然質粒的基礎上進行過人工改造的。第33頁/共40頁課本知識回顧

基因工程又叫做

或

。通俗地說，就是按照人們的意愿，把一種生物的某種

提取出來，加以

__________，然后放到另一種生物的細胞里，

改造生物的遺傳性狀?；蚱唇蛹夹gDNA重組技術基因修飾改造定向地第34頁/共40頁DNA重組技術的基本工具“分子手術刀”──“分子縫合針”──“分子運輸車”──限制（性核酸內切）酶DNA連接酶基因進入受體細胞的載體第35頁/共40頁限制性核酸內切酶主要是從的一種酶。識別雙鏈DNA分子的某種，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的斷開。形成兩種末端原核生物中分離純化出來特定的核苷酸序列磷酸二酯鍵粘性末端平末端第36頁/共40頁二、“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：2、作用部位：兩類連接黏性末端E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶磷酸二酯鍵連接黏性末端和平末端第37頁/共40頁基因進入受體