第19章 質(zhì)譜分析課件

第十九章質(zhì)譜分析儀第一節(jié)質(zhì)譜分析的基本原理質(zhì)譜法是利用帶電粒子在磁場或電場中的運(yùn)動規(guī)律，然后按照質(zhì)量或質(zhì)荷比（m/z）實(shí)現(xiàn)分離分析，測定離子質(zhì)量及其強(qiáng)度分布。這種按質(zhì)量或質(zhì)荷比大小順序排列而成的圖譜就是質(zhì)譜圖。質(zhì)譜分析法主要是通過對樣品離子質(zhì)荷比的分析而實(shí)現(xiàn)對樣品進(jìn)行定性和定量的一種方法電離裝置把樣品電離為離子質(zhì)量分析裝置把不同質(zhì)荷比的離子分開經(jīng)檢測器檢測之后可以得到樣品的質(zhì)譜圖1、基本定義質(zhì)譜法是唯一可以確定分子質(zhì)量的方法；靈敏度高；樣品用量少，通常只需微克級樣品，檢出限可達(dá)10-14g；質(zhì)譜儀種類很多，應(yīng)用范圍廣，可進(jìn)行同位素分析，也可進(jìn)行化學(xué)分析，可進(jìn)行無機(jī)成分、有機(jī)結(jié)構(gòu)分析，生物樣品分析；被分析對象：氣體、液體、固體。2、質(zhì)譜分析的特點(diǎn)3、質(zhì)譜分析的基本原理產(chǎn)生離子的方法：電子轟擊(EI)、化學(xué)電離(CI)、快原子轟擊(FAB)、電噴霧電離(ESI)等。電子轟擊離子化法是有機(jī)化合物電離的常規(guī)方法。化學(xué)電離法可得到豐度較高的分子離子或準(zhǔn)分子離子峰。4、質(zhì)譜圖橫坐標(biāo)：m/e(質(zhì)荷比);縱坐標(biāo)：相對強(qiáng)度

最強(qiáng)的峰為基峰，規(guī)定其強(qiáng)度為100%.峰的強(qiáng)度與該離子出現(xiàn)的幾率有關(guān)。豐度最高的陽離子是最穩(wěn)定的陽離子。大多數(shù)陽離子帶電荷+1，故其峰的m/e值為陽離子的質(zhì)量;m/e值最大的是母體分子的分子量.(除母體離子發(fā)生裂解等)。

1、分子離子峰試樣分子在高能電子撞擊下失去一個外層電子而形成的帶正電荷的離子，即；

M+為分子離子或母體離子。分子離子的質(zhì)量與化合物的分子量相等。5、質(zhì)譜圖中離子主要類型一般有機(jī)分子的電離電位在7-15eV，幾乎所有的有機(jī)分子都有可以辨認(rèn)的分子離子峰。芳香環(huán)分子可產(chǎn)生較強(qiáng)的分子離子峰；高分子量的脂肪醇、醚及胺等產(chǎn)生較小的分子離子峰；若不考慮同位素的影響，分子離子峰一般具有最高質(zhì)量。分子離子峰的穩(wěn)定性越大，那么質(zhì)譜圖上對應(yīng)的分子離子峰越高。有機(jī)化合物分子離子峰的穩(wěn)定性順序：芳香化合物＞共軛鏈烯＞烯烴＞脂環(huán)化合物＞直鏈烷烴＞酮＞胺＞酯＞醚＞酸＞支鏈烷烴＞醇分子離子峰：質(zhì)譜圖上質(zhì)荷比最大的峰[氮規(guī)則]當(dāng)分子中含有偶數(shù)個氮原子或不含氮原子時,分子量應(yīng)為偶數(shù)；當(dāng)分子中含有奇數(shù)個氮原子時,分子量應(yīng)為奇數(shù)。2、碎片離子峰分子離子產(chǎn)生后可能具有較高的能量，將會通過進(jìn)一步碎裂或重排而釋放能量，碎裂后產(chǎn)生的離子形成的峰稱為碎片離子峰。碎片離子峰的峰高與化學(xué)鍵斷裂及分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，碎片離子峰越穩(wěn)定它的峰高也越高。烯烴多在雙鍵旁的第一個鍵上開裂：

烷烴化合物斷裂多在C-C之間發(fā)生，且易發(fā)生在支鏈上：如：正己烷3、亞穩(wěn)離子峰若質(zhì)量為m1的離子在離開離子源受電場加速后，在進(jìn)入質(zhì)量分析器之前，由于碰撞等原因很容易進(jìn)一步分裂失去中性碎片而形成的m1+m2+△m這種亞穩(wěn)離子峰的表觀質(zhì)量用m*表示，它與m1、m2的關(guān)系為：m*=（m2）2/m1

式中m1為母離子的質(zhì)量，m2為子離子的質(zhì)量。亞穩(wěn)離子峰具有離子峰寬（約2-5個質(zhì)量單位）、相對強(qiáng)度低、m/z不為整數(shù)等特點(diǎn)，因而很容易從質(zhì)譜圖中觀察。例如：CH4M=1612C+1H×4=16M13C+1H×4=17M+112C+2H+1H×3=17M+113C+2H+1H×3=18M+2分子離子峰同位素離子峰

因?yàn)椋诩淄橹?，I17/I16=0.011。所以，在丁烷中，出現(xiàn)一個13C的幾率是甲烷的4倍，則分子離子峰m/z=59、58的強(qiáng)度之比I59/I58=4×0.011=0.044；4、同位素離子峰有些元素具有天然存在的穩(wěn)定同位素，會在質(zhì)譜圖上出現(xiàn)一些M+1，M+2，M+3的峰，由這些同位素形成的離子峰稱為同位素離子峰。同位素離子峰相對峰高取決于分子中同位素的種類、數(shù)量和豐度。CHCHCHCZHR1R2R3R4CHCHR3R4HCCZHR1R2

5、重排離子峰在兩個或兩個以上鍵的斷裂過程中，某些原子或基團(tuán)從一個位置轉(zhuǎn)移到另一個位置發(fā)生重排，并丟失掉中性分子或碎片后而形成的離子，稱為重排離子。質(zhì)譜圖上相應(yīng)的峰為重排離子峰。其中最常見的一種是麥?zhǔn)现嘏拧＿@種重排形式可以歸納如下：

可以發(fā)生這類重排的化合物有:酮、醛、酸、酯、含P=O，＞S=O的化合物、烯烴類和苯類化合物等。1.質(zhì)量測量范圍它是指質(zhì)譜儀能夠進(jìn)行分析的樣品的相對原子質(zhì)量范圍，以原子質(zhì)量單位來進(jìn)行計量。一個原子質(zhì)量單位（1u）就是處于基態(tài)12C中性原子的質(zhì)量的1/12。

在非精確測量中，常直接以原子或分子量大小來表示。質(zhì)量單位：amu或u，Da或D，1D=0.99734u第二節(jié)質(zhì)譜儀性能指標(biāo)不同儀器： 四極桿：4000Da

離子阱質(zhì)譜：4000Da

磁質(zhì)譜：10000Da

傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀（FT-MS） 50000Da

飛行時間質(zhì)譜：無上限不同要求： 氣相色譜：800Da

液相質(zhì)譜：2000Da

生物分子：10000Da或更大2.分辨本領(lǐng)指質(zhì)譜儀分辨相鄰質(zhì)量數(shù)離子的能力。定義為：兩個相等強(qiáng)度的相鄰峰(質(zhì)量分別為m1和m2)，當(dāng)兩峰間的峰谷不大于峰高的10%時，則可認(rèn)為兩已分開，那么分辨率R=m1/(m2-m1)=m1/mR與離子通道半徑r、加速器和收集器狹縫寬度、離子源的性質(zhì)和質(zhì)量等因素有關(guān)。組成整數(shù)質(zhì)量精確質(zhì)量CO2827.994914N22828.006158C2H42828.031299質(zhì)量數(shù)為28的三種分子組成的精確質(zhì)量若儀器分辨力很低，如RP=200，則對以上三個分子不能分開，混為一峰若要分開以下混合物，則必需有如下分辨力CO-C2H4:(RP)2=27.994914/(28.031299-27.994914)=770N2-C2H4:(RP)3=28.006158/(28.031299-28.006158)=1100CO-N2:(RP)1=27.994914/(28.006158-27.994914)=2490當(dāng)儀器分辨力達(dá)到770時，只能夠只分開CO-C2H4

。當(dāng)儀器分辨力達(dá)到1100時，能夠分開CO-C2H4和N2-C2H4當(dāng)儀器分辨力超過2500時，三者全部分開。一般低分辨儀器在2000左右。10000以上時稱高分辨。FT-MS分辨力可達(dá)2百萬。3、掃描時間色譜峰的數(shù)據(jù)點(diǎn)數(shù)目和峰寬以及掃描時間有關(guān)較短的掃描時間，可以獲得良好的峰型，但是不利于信號采集較長的掃描時間，有助于信號采集，但是峰型不好峰型和信號，二者需折衷考慮4靈敏度質(zhì)譜儀的靈敏度有絕對靈敏度、相對靈敏度和分析靈敏度。絕對靈敏度：儀器可以檢測到的最小樣品量；相對靈敏度：儀器可同時檢測的大組分與小組分的含量比值；分析靈敏度：輸入儀器的樣品量與儀器輸出的信號的比值。

第三節(jié)質(zhì)譜儀儀器組成按質(zhì)量分析器(或者磁場種類)可分為靜態(tài)儀器和動態(tài)儀器，即穩(wěn)定磁場（單聚焦及雙聚焦質(zhì)譜儀）和變化磁場（飛行時間和四極桿質(zhì)譜儀）。MS儀器一般由進(jìn)樣系統(tǒng)、電離源、質(zhì)量分析器、真空系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)構(gòu)成。真空系統(tǒng)樣品入口檢測器數(shù)據(jù)系統(tǒng)質(zhì)量分析器離子化方法大氣

1、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)的作用是高效重復(fù)地將樣品引入到離子源中，并且不能造成真空度的降低。常用的進(jìn)樣裝置有：間歇式進(jìn)樣直接探針進(jìn)樣色譜進(jìn)樣系統(tǒng)（GC-MS、HPLC-MS）高頻感藕等離子體進(jìn)樣系統(tǒng)（ICP-MS）2.電離源

將引入的樣品轉(zhuǎn)化成為碎片離子的裝置。根據(jù)樣品離子化方式和電離源能量高低，通常可將電離源分為：氣相源：先蒸發(fā)再激發(fā)，適于沸點(diǎn)低于500oC、對熱穩(wěn)定的樣品的離子化，包括電子轟擊源、化學(xué)電離源、場電離源、火花源；解吸源：固態(tài)或液態(tài)樣品不需要揮發(fā)而直接被轉(zhuǎn)化為氣相，適用于分子量高達(dá)

105的非揮發(fā)性或熱不穩(wěn)定性樣品的離子化。包括場解吸源、快原子轟擊源、激光解吸源、離子噴霧源和熱噴霧離子源等。硬源：離子化能量高，如EI。伴有化學(xué)鍵的斷裂，譜圖復(fù)雜，可得到分子官能團(tuán)的信息；軟源：離子化能量低，如場解吸源。產(chǎn)生的碎片少，譜圖簡單，可得到分子量信息。因此，應(yīng)根據(jù)分子電離所需能量的不同來選擇不同電離源。

常見的幾種離子化方式如下表名稱簡稱類型離子化試劑電子轟擊源EI氣相高能電子化學(xué)電離CI氣相試劑離子場電離FI氣相高能勢電極場解吸FD解吸高能勢電極快原子轟擊FAB解吸高能電子電噴霧電離ESI解吸高場基質(zhì)輔助激光解吸電離MALDI解吸激光輻射電子轟擊源(ElectronImpact，EI)作用過程：采用高速(高能)電子束沖擊樣品，從而產(chǎn)生電子和分子離子M+，M+繼續(xù)受到電子轟擊而引起化學(xué)鍵的斷裂或分子重排，瞬間產(chǎn)生多種離子。水平方向：燈絲與陽極間(70V電壓)—高能電子—沖擊樣品—正離子垂直方向：G3-G4加速電極(低電壓)---較小動能---狹縫準(zhǔn)直G4-G5加速電極(高電壓)---較高動能---狹縫進(jìn)一步準(zhǔn)直--離子進(jìn)入質(zhì)量分析器。特點(diǎn)：使用最廣泛，譜庫最完整；電離效率高；結(jié)構(gòu)簡單，操作方便；但分子離子峰強(qiáng)度較弱或不出現(xiàn)（因電離能量最高）。電子轟擊源

式中M為待測分子，M+為分子離子或母體離子。

當(dāng)電子轟擊源具有足夠高的能量時(一般為7OeV)，大多數(shù)化合物（電離能為10eV）分子不僅可能失去一個電子形成分子離子，而且有可能進(jìn)一步發(fā)生鍵的斷裂，形成大量的各種低質(zhì)量數(shù)的碎片正離子和中性自由基，這些碎片離子可用于化合物的結(jié)構(gòu)鑒定。3、真空系統(tǒng)質(zhì)譜儀中離子的產(chǎn)生及經(jīng)過系統(tǒng)必須處于高真空狀態(tài)。其中，離子源中的真空度：1.3×10-4-1.3×10-5Pa，質(zhì)量分析器中的真空度：1.3×10-6Pa

一般質(zhì)譜儀都采用機(jī)械泵預(yù)抽真空后，再用高效率擴(kuò)散泵連續(xù)地運(yùn)行以保持真空。現(xiàn)代質(zhì)譜儀采用分子泵可獲得更高的真空度。高真空的作用：

a）避免離子源燈絲損壞；

b）減少引起其它分子離子反應(yīng)，避免質(zhì)譜圖的復(fù)雜化；

c）防止用作加速離子的幾千伏高壓引起放電。

各類真空泵4、質(zhì)量分析器

質(zhì)譜儀的質(zhì)量分析器位于離子源和檢測器之間，它的功能是利用不同方式將樣品離子按質(zhì)荷比m/z大小分開。質(zhì)量分析器的主要類型有：磁分析器（單聚焦質(zhì)量分析器，雙聚焦質(zhì)量分析器）、飛行時間分析器、四極濾質(zhì)器（即四級桿）等。（1）單聚焦質(zhì)量分析器：它由單個扇形（90o或60o）或半圓形（180o）的均勻磁場組成。單聚焦質(zhì)量分析器單聚焦質(zhì)量分析器只是將m/z相同而入射方向不同的離子聚焦到一點(diǎn)（或稱實(shí)現(xiàn)了方向聚焦）。但對于m/z相同而動能（或速度）不同的離子不能聚焦，故其分辨率相對較低，一般為5000。

（2）雙聚焦質(zhì)量分析器：為克服動能或速度“分散”的問題，即實(shí)現(xiàn)所謂的“速度(能量)聚焦”，在離子源和磁分析器之間加一靜電分析器（ESA），如下圖所示，于兩個扇形電極板上加一直流電位Ve，離子通過時的曲率半徑為re=U/V，即不同動能的離子re不同，換句話說，相同動能的離子的re相同----能量聚焦了！

：

當(dāng)離開入射狹縫的離子束在穿過靜電分析器的環(huán)形通道時，離子所受到的向心力等于離心力時有：

所以，離子運(yùn)動的軌道半徑r可通過外加靜電場來加以控制，只有動能相同的離子才能通過中間狹縫，實(shí)現(xiàn)能量聚焦。具有不同的方向，也就是說，發(fā)射角度不同具有不同的動能具有相同質(zhì)荷比的離子在進(jìn)入入射狹縫時可以采用單聚焦質(zhì)量分析器聚焦于出射狹縫采用單聚焦質(zhì)量分析器不能完全聚焦于出射狹縫要采用雙聚焦質(zhì)量分析器

它是一種無磁動態(tài)質(zhì)量分析器，根據(jù)不同質(zhì)荷比的離子在無場分離區(qū)中的速度不同，引起漂移時間的差異來實(shí)現(xiàn)分離。（3）飛行時間質(zhì)量分析器(TOF)反射型直線型飛行時間質(zhì)量分析器

如下圖，由燈絲發(fā)射出的電子在電場作用下射向陽極，運(yùn)動中央的電子在離子化區(qū)與氣體分子碰撞并使之電離，在電子控制極上施加一個不大的負(fù)脈沖電壓，引出離子化區(qū)中的正離子，在加速區(qū)上加直流負(fù)電壓，使離子得到加速而獲得動能，以速度v飛越長約1m的無場漂移區(qū)。直線型飛行時間質(zhì)量分析器的工作原理其速度v為：

由此可見，t取決于m/z的平方根之差。也就是說，離子的質(zhì)量越小，運(yùn)動速度越快，運(yùn)行時間也就越短，也就越早到達(dá)接收器。此離子達(dá)到無場漂移管另一端的時間為：故對于具有不同m/z的離子，到達(dá)終點(diǎn)的時間差：（4）四極桿濾質(zhì)器

它由四根互相平行的金屬電極組成，如下圖所示。在兩個相對的極桿之間加電壓(U+Vcost)，在另兩個相對的極桿上加-(U+Vcost)。與前述雙聚焦儀的靜電分析器類似，離子進(jìn)入可變電場后，只有具合適的曲率半徑的離子可以通過中心小孔到達(dá)檢測器。改變U和V并保持U/V比值一定，可實(shí)現(xiàn)不同m/z離子的檢測。5、檢測與記錄質(zhì)譜儀中常用的檢測器有法拉第杯、電子倍增器及閃爍計數(shù)器、照相底片等?，F(xiàn)代質(zhì)譜儀中的檢測器常采用電子倍增管?，F(xiàn)代質(zhì)譜儀的記錄一般都采用較高性能的計算機(jī)對產(chǎn)生的信號進(jìn)行快速接收與處理，同時通過計算機(jī)可以對儀器條件進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控，從而提高精密度和靈敏度。

碎片離子重排裂解碰撞裂解

設(shè)一有機(jī)化合物由A，B，C和D組成，當(dāng)蒸汽分子進(jìn)入離子源，受到電子轟擊可能發(fā)生下列過程而形成各種類型的離子如下：舉例：分子離子第四節(jié)質(zhì)譜解析解析未知物的圖譜，可按下述程序進(jìn)行。第一步對分子離子區(qū)進(jìn)行解析（推斷分子式）（1）確認(rèn)分子離子峰，并注意分子離子峰對基峰的相對強(qiáng)度比，這對判斷分子離子的穩(wěn)定性以及確定結(jié)構(gòu)是有一定幫助的。（2）注意是偶數(shù)還是奇數(shù)，如果為奇數(shù)，而元素分析又證明含有氮時，則分子中一定含有奇數(shù)個氮原子。（3）注意同位素峰中M+1/M及M+2/M數(shù)值的大小，據(jù)此可以判斷分子中是否含有S、CI、Br，并可初步推斷分子式。（4）根據(jù)高分辨質(zhì)譜測得的分子離子的m/z值，推定分子式。第二步對碎片離子區(qū)的解析（推斷碎片結(jié)構(gòu)）

（1）找出主要碎片離子峰。并根據(jù)碎片離子的質(zhì)荷比，確定碎片離子的組成。常見碎片離子的組成見下表離子失去的碎片可能存在的結(jié)構(gòu)M-1H醛，某些醚及胺M-15CH3甲基M-18H2O醇類，包括糖類M-28C2H4，CO，N2C2H4，麥?zhǔn)现嘏牛珻OM-29CHO，C2H5醛類，乙基M-34H2S硫醇M-35CIM-36HCI氯化物M-43CH3CO，C3H7甲基酮，丙基M-45COOH

羧酸類M-60CH3COOH醋酸酯（2）注意分子離子有何重要碎片脫去

m/e離子可能的結(jié)構(gòu)類型29CHO、C2H5

醛類、乙基30CH2NH2

伯胺43C3H7

丙基29、43、57、71等C2H5、C3H7

等

直鏈烷烴39、50、71芳香化合物芳香化合物60CH3COOH羧酸類、醋酸類91C6H5CH2

芐基105C6H5CO苯甲?；?）找出亞穩(wěn)離子峰，利用m*=m22/m1，確定m1與m2的關(guān)系，確定開裂類型。第三步提出結(jié)構(gòu)式根據(jù)以上分析，列出可能存在的結(jié)構(gòu)單元及剩余碎片，根據(jù)可能的方式進(jìn)行連接，組成可能的結(jié)構(gòu)式當(dāng)前主要的高分辨儀器（HRGC/HRMS）生產(chǎn)商有3家，分別是沃特世（Waters）、賽默飛世爾科技（ThermoFisherScientific）、日本電子（JEOL）。第五節(jié)高分辨氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀Waters簡介沃特世(Waters)公司是全球最大的液相色譜、質(zhì)譜及相關(guān)產(chǎn)品專業(yè)生產(chǎn)廠家之一，擁有實(shí)力最雄厚的研究機(jī)構(gòu)和世界最大的色譜柱生產(chǎn)廠之一，是較早同時生產(chǎn)液相色譜儀器、化學(xué)品及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)三大液相色譜要素的廠商；Waters產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于制藥、生物技術(shù)、食品和飲料、聚合物、環(huán)境等各個領(lǐng)域，是較早能提供整體解決方案的供應(yīng)商；

Waters公司高分辨儀器型號為WatersAutopremier。ThermoFisher簡介賽默飛世爾科技是全球科學(xué)服務(wù)領(lǐng)域的領(lǐng)導(dǎo)者，在全球范圍內(nèi)服務(wù)超過35萬家客戶?？蛻舭ㄡt(yī)藥和生物公司，大學(xué)、科研院所和政府機(jī)構(gòu)等；旗下有ThermoScientific和FisherScientific兩個品牌；賽默飛世爾科技進(jìn)入中國發(fā)展已有30余年，在中國的總部設(shè)于上海，并在北京、廣州、香港、成都、沈陽等地設(shè)立了分公司，員工人數(shù)超過1400名，服務(wù)于第一線的專業(yè)人員超過800名

；ThermoFisher高分辨儀器型號為MAT95和ThermofisherDFS，MAT95為老型號產(chǎn)品，現(xiàn)在型號為ThermofisherDFSJEOL簡介日本電子株式會社（JEOL）是國際資深分析儀器生產(chǎn)商。JEOL目前面向中國及全球，生產(chǎn)銷售各型掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡、電子探針、掃描探針顯微鏡、X射線熒光光譜儀、核磁共振設(shè)備、質(zhì)譜儀等設(shè)備；

在中國國內(nèi)，眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、科學(xué)院部門、科研所、大專院校、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、政府機(jī)構(gòu)和企業(yè)單位都有JEOL的產(chǎn)品。日本電子在北京、上海、廣州、武漢、成都設(shè)有辦事處；

JEOL高分辨儀器型號為JMS-800D。產(chǎn)品特點(diǎn)

ThermoFisherDFS質(zhì)譜部分：高性能的環(huán)形ESA靜電場色譜部分：自己公司產(chǎn)品，雙氣相色譜進(jìn)樣方式接高分辨磁質(zhì)譜耗電少：最大功率12Kw檢測器：電子倍增管最小尺寸：3.14m*3.35m

WatersAutopremier質(zhì)譜部分：由兩個靜電場和一個磁場組成三場EBE結(jié)構(gòu)色譜部分：安捷倫公司產(chǎn)品7890變壓器：英制設(shè)備需要變壓器，但是比較小巧雙GC接口，可同時進(jìn)樣，或交替進(jìn)樣檢測器：光電倍增器

最小尺寸：4.5m*4.3m

JEOLJMS-800D質(zhì)譜部分：EB兩場結(jié)構(gòu)色譜部分：安捷倫公司產(chǎn)品7890變壓器：需要三臺變壓器體積較大檢測器：光電倍增器最小尺寸：4.5m*4.5m技術(shù)指標(biāo)WatersAutopremierThermoFishersDFSJEOLJMS-800D分辨率（10%谷*）日?！?0000，靜態(tài)≥80000，采樣過程中實(shí)時監(jiān)測分辨率大于10000極限分辨率>60000極限分辨率>60000，日常≥10000質(zhì)量范圍：1-2200Da2-6000Da1-1000Da靈敏度：100fgTCDD，S/N>125100fgTCDD，S/N>80030fgTCDD，S/N>400質(zhì)量精度：<3ppmRMS<2ppmRMS<5ppm第六節(jié)質(zhì)譜儀的臨床應(yīng)用蛋白質(zhì)分析Myoglobin用胰蛋白酶限制酶切后產(chǎn)生的肽段

（從堿性氨基酸的羧基端切斷）Myoglobin

GLSDGEWQQVLNVWGKVEADIAGHGQEVLIRLFTGHPETLEKFDKFKHLKTEAEMKASEDLKKHGTVVLTALGGILKKKGHHEAELKPLAQSHATKHKIPIKYLEFISDAIIHVLHSKHPGDFGADAQGAMTKALELFRNDIAAKYKELGFQG胰蛋白酶酶切Myoglobin產(chǎn)生的肽段及其分子量

1811.90 GLSDGEWQQVLNVWGK1606.85 VEADIAGHGQEVLIR1271.66 LFTGHPETLEK1378.83 HGTVVLTALGGILK1982.05 KGHHEAELKPLAQSHATK1853.95 GHHEAELKPLAQSHATK1884.01 YLEFISDAIIHVLHSK1502.66 HPGDFGADAQGAMTK748.43 ALELFR

實(shí)際質(zhì)譜分析所得的肽質(zhì)量指紋譜GLSDGEWQQVLNVWGKVEADIAGHGQEVLIRLFTGHPETLEKHGTVVLTALGGILKKGHHEAELKPLAQSHATKGHHEAELKPLAQSHATKYLEFISDAIIHVLHSKHPGDFGADAQGAMTKALELFR實(shí)例：鼻咽癌病人血清標(biāo)志物檢測卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)液上清中分泌蛋白的SELDI-TOFMS檢測分析MS/MS

串連質(zhì)譜分析原理示意圖限制酶切蛋白質(zhì)為肽段EnzymaticDigestandFractionation第一步MS分離各個肽段

第二步MS對其中的一個肽段進(jìn)行氨基酸序列分析MS/MS碰撞誘導(dǎo)解離CID中多肽分子結(jié)構(gòu)中鍵斷裂的多種可能性-HN-CH-CO-NH-CH-CO-NH-RiCH-R’biyn-iyn-i-1bi+1R”i+1i+1aixn-icizn-i控制CID過程中