枯草芽孢桿菌發(fā)酵實罐操作課件

枯草芽孢桿菌發(fā)酵的實罐操作

第三部分枯草芽孢桿菌發(fā)酵的實罐操作

第三部分1枯草芽孢桿菌的實罐操作

實驗材料及儀器設備10L-100L二級發(fā)酵罐及其附屬設備分光光度計旋轉(zhuǎn)式搖床離心機水浴鍋恒溫培養(yǎng)箱超凈工作臺全自動滅菌鍋搖瓶移液管玻璃棒燒杯等玻璃儀器試劑牛肉膏蛋白胨氯化鈉蒸餾水氫氧化鈉DNS試劑1%淀粉枯草芽孢桿菌的實罐操作

實驗材料及儀器設備10L2實訓意義生化工藝實訓是為了讓學生掌握一定的生物化工工藝單元操作基本技能的基礎上進行的一次綜合性實踐訓練。主要對有機品發(fā)酵過程中常見的單元操作過程及設備進行的基本操作技能訓練。實訓意義生化工藝實訓是為了讓學生掌握一定的生物化工工藝單元操3防止染菌的要點染菌是抗生素發(fā)酵的大敵，不制服染菌就不能實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。影響染菌的因素很多，而且?guī)щS機性質(zhì)，但只要認真對待，過細地工作，染菌是可以防止的。請到左邊的導航欄里選擇查看防止染菌的要點的內(nèi)容。防止染菌的要點染菌是抗生素發(fā)酵的大敵，不制服染菌就不能實現(xiàn)優(yōu)4空氣系統(tǒng)的要求防止空氣帶菌主要是提高空壓機進口空氣的潔凈度，防止空氣夾帶油和水及空氣過濾器失效。提高空壓機進口空氣的潔凈度，可以從提高吸氣口的位置及加強空氣的壓縮前過濾著手。防止空氣夾帶油、水，除加強去除油、水的措施外，還必須防止空氣冷卻器漏水，注意勿使冷卻水壓力大于空氣壓力，防止冷卻水進入空氣系統(tǒng)。空氣系統(tǒng)的要求防止空氣帶菌主要是提高空壓機進口空氣的潔凈度，5蒸汽系統(tǒng)的要求重視飽和蒸汽的質(zhì)量，要嚴防蒸汽中夾帶大量冷凝水，防止蒸汽壓力大幅度波動，保證生產(chǎn)時所用的蒸汽壓力在30～35千帕以上。蒸汽系統(tǒng)的要求重視飽和蒸汽的質(zhì)量，要嚴防蒸汽中夾帶大量冷凝水61、連續(xù)滅菌設備：連消塔結構要求簡單，易于拆裝和清理，操作時蒸汽能與物料混合均勻，并易于控制溫度。2、發(fā)酵罐：發(fā)酵罐及其附屬設備應注意嚴密和防止泄漏，避免形成“死角”。凡與物料、空氣、下水道連接的閥門都必須保證嚴密度。3、無菌室：用超凈工作臺及凈化室代替無菌室，以提高無菌程度。1、連續(xù)滅菌設備：連消塔結構要求簡單，易于拆裝和清理，操作時7一、種子的制備1.1種子的制備1.2培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏0.5g蛋白胨1g氯化鈉0.5g蒸餾水100mlPH7.0~7.21.3將配置好的培養(yǎng)基放入250ml的三角瓶中裝液量為100ml。裝液后進行高溫滅菌一、種子的制備1.1種子的制備81.4一級種子的制備選取長勢良好的菌種，挑取菌落2~3環(huán)接種導液體搖瓶中。培養(yǎng)條件：180r/min，37攝氏度搖床過夜培養(yǎng)。1.5二級種子液的制備將一級種子液接種到藥瓶培養(yǎng)基中接種量為5ml。培養(yǎng)條件：180r/min，37攝氏度搖床過夜培養(yǎng)。1.4一級種子的制備9二、發(fā)酵培養(yǎng)基配置2.1發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏0.5g蛋白胨1g氯化鈉0.5g蒸餾水100mlPH7.0~7.22.2將發(fā)酵培養(yǎng)基按照上述配方比例配好共配培養(yǎng)基45L（由于滅菌過程中有產(chǎn)生大量冷凝水，所以去掉5L）。二、發(fā)酵培養(yǎng)基配置2.1發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基10三、空罐滅菌3.1空氣過濾器滅菌，滅菌后對空氣過濾器通空氣進行保壓，使壓強保持在0.1~0.15mpa之間防止染菌。3.2對罐體進行夾套預熱85攝氏度以上。3.3溫度到達后，關閉夾套進氣開關。通熱蒸汽對罐體經(jīng)行升溫，當溫度達到120攝氏度、壓強0.11mpa時，保持溫度和壓力20min。3.4滅菌后，關閉蒸汽進氣閥，開大放氣閥，進行泄壓。三、空罐滅菌3.1空氣過濾器滅菌，滅菌后對空氣過濾器通空氣進11四、實灌滅菌4.1泄壓后，從進料口開始添加培養(yǎng)基，并開始攪拌（轉(zhuǎn)速130r/min）4.2進料完畢后開始調(diào)節(jié)PH值4.3調(diào)好PH后，對罐體進行夾套預熱85攝氏度以上。4.4溫度到達后，關閉夾套進氣開關。通熱蒸汽對罐體經(jīng)行升溫，當溫度達到120攝氏度、壓強0.11mpa時，保持溫度和壓力20min。4.5滅菌后，關閉蒸汽進氣閥，開大放氣閥，當壓強下降到0.08mpa時開啟通氣閥。使罐內(nèi)壓力保持在0.05mpa左右。4.6開啟冷水閥門，對發(fā)酵罐進行降溫。四、實灌滅菌4.1泄壓后，從進料口開始添加培養(yǎng)基，并開始攪拌12五、接種5.1當罐溫降到37攝氏度后，關閉冷水。用酒精將接種口處仔細擦洗，并放上接種火圈。5.2減少進氣，使罐壓保持在0.02mpa，點燃接種火圈。5.3擰下進料口螺蓋，放入酒精中。5.4按接種瓶的瓶口在火焰上灼燒一下，并在火焰的保護下迅速，將菌種到入發(fā)酵罐。5.5尋上進料口螺蓋，熄滅火焰。并用酒精仔細清洗。五、接種5.1當罐溫降到37攝氏度后，關閉冷水。用酒精將接種13接種

在無菌環(huán)境下進行接種

在無菌環(huán)境下進行14六、發(fā)酵6.1發(fā)酵條件：37攝氏度、壓強0.07kpa、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min6.2取樣：取樣前用熱蒸汽將出料口處進行滅菌10min。發(fā)酵參數(shù)的測定1PH值的測定：用精確的PH試紙測。六、發(fā)酵6.1發(fā)酵條件：37攝氏度、壓強0.07kpa、攪拌152生長曲線：分光光度計波長600nm測od值（以相同稀釋倍數(shù)的培養(yǎng)基做空白）。以生長量為縱坐標，培養(yǎng)時間為橫坐標繪制生長曲線圖。3淀粉酶活力的測定：1.發(fā)酵液離心處理：8000rpm，5min2.1ml離心后的發(fā)酵液+5ml1%淀粉溶液與37攝氏度水浴5min終止反應。3.取上述溶液1ml，加入DNS試劑2.0ml于沸水浴中加熱2min進行顯色，取出后用水迅速冷卻，加去9ml蒸餾水，搖勻，在540nm波長處測定吸光值。以1%淀粉溶液直接加熱煮沸再加DNS試劑反應作為空白。枯草芽孢桿菌發(fā)酵實罐操作課件16七、發(fā)酵過程中參數(shù)檢測結果時間酶活生長量PH值10.29250.2867.220.971150.2667.032.17151.257.246.01682.557.354.97544.257.5七、發(fā)酵過程中參數(shù)檢測結果時間酶活生長量PH值10.292517酶活曲線酶活曲線18菌濃曲線菌濃曲線19八、實訓結果總結及分析經(jīng)指導老師后期提示才知實驗過程中空白試劑成分錯誤，造成試驗結果一定性的誤差。下次試驗一定注意。通過本次實訓對本專業(yè)的相關知識和操作有了更深層的理解和認識。八、實訓結果總結及分析20九、實訓的后期處理打掃實訓室、清理試驗器具整理實驗數(shù)據(jù)、實訓報告繪制生長曲線及酶活曲線進行實訓總結九、實訓的后期處理打掃實訓室、清理試驗器具21謝謝觀看謝謝觀看22枯草芽孢桿菌發(fā)酵的實罐操作

第三部分枯草芽孢桿菌發(fā)酵的實罐操作

第三部分23枯草芽孢桿菌的實罐操作

實驗材料及儀器設備10L-100L二級發(fā)酵罐及其附屬設備分光光度計旋轉(zhuǎn)式搖床離心機水浴鍋恒溫培養(yǎng)箱超凈工作臺全自動滅菌鍋搖瓶移液管玻璃棒燒杯等玻璃儀器試劑牛肉膏蛋白胨氯化鈉蒸餾水氫氧化鈉DNS試劑1%淀粉枯草芽孢桿菌的實罐操作

實驗材料及儀器設備10L24實訓意義生化工藝實訓是為了讓學生掌握一定的生物化工工藝單元操作基本技能的基礎上進行的一次綜合性實踐訓練。主要對有機品發(fā)酵過程中常見的單元操作過程及設備進行的基本操作技能訓練。實訓意義生化工藝實訓是為了讓學生掌握一定的生物化工工藝單元操25防止染菌的要點染菌是抗生素發(fā)酵的大敵，不制服染菌就不能實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。影響染菌的因素很多，而且?guī)щS機性質(zhì)，但只要認真對待，過細地工作，染菌是可以防止的。請到左邊的導航欄里選擇查看防止染菌的要點的內(nèi)容。防止染菌的要點染菌是抗生素發(fā)酵的大敵，不制服染菌就不能實現(xiàn)優(yōu)26空氣系統(tǒng)的要求防止空氣帶菌主要是提高空壓機進口空氣的潔凈度，防止空氣夾帶油和水及空氣過濾器失效。提高空壓機進口空氣的潔凈度，可以從提高吸氣口的位置及加強空氣的壓縮前過濾著手。防止空氣夾帶油、水，除加強去除油、水的措施外，還必須防止空氣冷卻器漏水，注意勿使冷卻水壓力大于空氣壓力，防止冷卻水進入空氣系統(tǒng)?？諝庀到y(tǒng)的要求防止空氣帶菌主要是提高空壓機進口空氣的潔凈度，27蒸汽系統(tǒng)的要求重視飽和蒸汽的質(zhì)量，要嚴防蒸汽中夾帶大量冷凝水，防止蒸汽壓力大幅度波動，保證生產(chǎn)時所用的蒸汽壓力在30～35千帕以上。蒸汽系統(tǒng)的要求重視飽和蒸汽的質(zhì)量，要嚴防蒸汽中夾帶大量冷凝水281、連續(xù)滅菌設備：連消塔結構要求簡單，易于拆裝和清理，操作時蒸汽能與物料混合均勻，并易于控制溫度。2、發(fā)酵罐：發(fā)酵罐及其附屬設備應注意嚴密和防止泄漏，避免形成“死角”。凡與物料、空氣、下水道連接的閥門都必須保證嚴密度。3、無菌室：用超凈工作臺及凈化室代替無菌室，以提高無菌程度。1、連續(xù)滅菌設備：連消塔結構要求簡單，易于拆裝和清理，操作時29一、種子的制備1.1種子的制備1.2培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏0.5g蛋白胨1g氯化鈉0.5g蒸餾水100mlPH7.0~7.21.3將配置好的培養(yǎng)基放入250ml的三角瓶中裝液量為100ml。裝液后進行高溫滅菌一、種子的制備1.1種子的制備301.4一級種子的制備選取長勢良好的菌種，挑取菌落2~3環(huán)接種導液體搖瓶中。培養(yǎng)條件：180r/min，37攝氏度搖床過夜培養(yǎng)。1.5二級種子液的制備將一級種子液接種到藥瓶培養(yǎng)基中接種量為5ml。培養(yǎng)條件：180r/min，37攝氏度搖床過夜培養(yǎng)。1.4一級種子的制備31二、發(fā)酵培養(yǎng)基配置2.1發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏0.5g蛋白胨1g氯化鈉0.5g蒸餾水100mlPH7.0~7.22.2將發(fā)酵培養(yǎng)基按照上述配方比例配好共配培養(yǎng)基45L（由于滅菌過程中有產(chǎn)生大量冷凝水，所以去掉5L）。二、發(fā)酵培養(yǎng)基配置2.1發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基32三、空罐滅菌3.1空氣過濾器滅菌，滅菌后對空氣過濾器通空氣進行保壓，使壓強保持在0.1~0.15mpa之間防止染菌。3.2對罐體進行夾套預熱85攝氏度以上。3.3溫度到達后，關閉夾套進氣開關。通熱蒸汽對罐體經(jīng)行升溫，當溫度達到120攝氏度、壓強0.11mpa時，保持溫度和壓力20min。3.4滅菌后，關閉蒸汽進氣閥，開大放氣閥，進行泄壓。三、空罐滅菌3.1空氣過濾器滅菌，滅菌后對空氣過濾器通空氣進33四、實灌滅菌4.1泄壓后，從進料口開始添加培養(yǎng)基，并開始攪拌（轉(zhuǎn)速130r/min）4.2進料完畢后開始調(diào)節(jié)PH值4.3調(diào)好PH后，對罐體進行夾套預熱85攝氏度以上。4.4溫度到達后，關閉夾套進氣開關。通熱蒸汽對罐體經(jīng)行升溫，當溫度達到120攝氏度、壓強0.11mpa時，保持溫度和壓力20min。4.5滅菌后，關閉蒸汽進氣閥，開大放氣閥，當壓強下降到0.08mpa時開啟通氣閥。使罐內(nèi)壓力保持在0.05mpa左右。4.6開啟冷水閥門，對發(fā)酵罐進行降溫。四、實灌滅菌4.1泄壓后，從進料口開始添加培養(yǎng)基，并開始攪拌34五、接種5.1當罐溫降到37攝氏度后，關閉冷水。用酒精將接種口處仔細擦洗，并放上接種火圈。5.2減少進氣，使罐壓保持在0.02mpa，點燃接種火圈。5.3擰下進料口螺蓋，放入酒精中。5.4按接種瓶的瓶口在火焰上灼燒一下，并在火焰的保護下迅速，將菌種到入發(fā)酵罐。5.5尋上進料口螺蓋，熄滅火焰。并用酒精仔細清洗。五、接種5.1當罐溫降到37攝氏度后，關閉冷水。用酒精將接種35接種

在無菌環(huán)境下進行接種

在無菌環(huán)境下進行36六、發(fā)酵6.1發(fā)酵條件：37攝氏度、壓強0.07kpa、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min6.2取樣：取樣前用熱蒸汽將出料口處進行滅菌10min。發(fā)酵參數(shù)的測定1PH值的測定：用精確的PH試紙測。六、發(fā)酵6.1發(fā)酵條件：37攝氏度、壓強0.07kpa、攪拌372生長曲線：分光光度計波長600nm測od值（以相同稀釋倍數(shù)的培養(yǎng)基做空白）。以生長量為縱坐標，培養(yǎng)時間為橫坐標繪制生長曲線圖。3淀粉酶活力的測定：1.發(fā)酵液離心處理：8000rpm，5min2.1ml離心后的發(fā)酵液+5ml1%淀粉溶液與37攝氏度水浴5min終止反應。3.取上述溶液1ml，加入DNS試劑2.0ml于沸水浴中加熱2min進行顯色，取出后用水迅速冷卻，加去9ml蒸餾水，搖勻，在540nm波長處測定吸光值。以1%淀粉溶液直接加熱煮沸再加DNS試劑反應作為空白?？莶菅挎邨U菌發(fā)酵實罐操作課件38七、發(fā)酵過程中參數(shù)檢測結果時間酶活生長量PH值10.29250.2867.220.971150.2667.032.17151.25