菌種的管理和保藏課件

2022/12/241菌種的保藏和管理國家藥典委員會杜平華2022/12/201菌種的保藏和管理國家藥典委員會2022/12/242前言

試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。2022/12/202前言試驗過程中，生物樣本2022/12/243菌種保藏的重要性

菌種保藏是微生物學(xué)檢驗工作中的一項常規(guī)技術(shù)，菌種的科學(xué)保藏和管理直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的正確性。

2022/12/203菌種保藏的重要性菌種保藏是微生物學(xué)2022/12/244菌種的來源

藥品微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。2022/12/204菌種的來源藥品微生物檢驗2022/12/245

⒈廣泛收集各種有用的微生物菌種。⒉選擇最適宜的保藏方法。菌種保藏的中心任務(wù)2022/12/205菌種保藏的中心任務(wù)2022/12/246常用菌種保藏方法

菌種保藏的原則降低微生物細(xì)胞的代謝強度，使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但不至于死亡，以減低菌種的變異率。

2022/12/206常用菌種保藏方法菌種保藏的原2022/12/247

標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按驗證的方法進行。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株工作菌株常用菌種保藏方法2022/12/207標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按2022/12/248

工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。2022/12/208工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌2022/12/249

不同的微生物，應(yīng)根據(jù)其生物特征來選擇最適宜的保藏方法，菌種的保藏方法一般分四個階段：2022/12/209不同的微生物，應(yīng)根據(jù)其生物特征來選2022/12/2410⑴

挑選特征典型的菌落。⑵確定保藏的合適菌體。⑶選擇最適宜的方法。⑷定期進行檢查。2022/12/2010⑴

挑選特征典型的菌落。2022/12/2411二、菌種的傳代和使用

工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。

2022/12/2011二、菌種的傳代和使用工2022/12/2412細(xì)菌的接種、分離和培養(yǎng)接種方法涂布法劃線法穿刺法直接加入法等2022/12/2012細(xì)菌的接種、分離和培養(yǎng)2022/12/2413

分離分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。2022/12/2013分離2022/12/2414

培養(yǎng)

需氣菌培養(yǎng)法

厭氧培養(yǎng)法2022/12/2014培養(yǎng)2022/12/2415

培養(yǎng)后微生物的生長判斷

固體培養(yǎng)基：有菌落生長或沿穿刺線擴散生長。

液體培養(yǎng)基：渾濁、菌膜、沉淀等。

2022/12/2015培養(yǎng)后微生2022/12/2416

三、菌種的檢查與復(fù)壯

菌種的衰退控制菌種的衰退方法

⑴控制傳代次數(shù)⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件⑶用不同類型的細(xì)胞進行傳代⑷采用有效的保藏方法

⑸定期檢查

⑹菌種的復(fù)壯2022/12/2016三、菌種的檢查與復(fù)壯菌種2022/12/2417

四、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強的責(zé)任心。

2022/12/2017

四、菌種的管理

1、使用菌種2022/12/2418

⒉實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度

⒊詳細(xì)記錄⒋建立菌種帶出實驗室，外單位索取、購買制度⒌菌種建立菌種處理操作規(guī)程。

2022/12/2018⒉實驗室必須建立菌種保存和使用文2022/12/2419菌懸液的制備與保存

菌懸液的制備方法與保存采用經(jīng)驗證的方法制備菌懸液，除另有規(guī)定外，微生物限度試驗用菌懸液的制備如下：

1、接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時.2、接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48小時。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為10～100cfu的菌懸液。2022/12/2019菌懸液的制備與保存

菌懸液的2022/12/2420

3、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7天。加入3～5ml含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05％（（v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液。2022/12/20203、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至2022/12/2421

4、菌懸液制備后應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在2～8℃的菌懸液可以在24小時內(nèi)使用。黑曲霉也可制成穩(wěn)定的孢子懸液保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)替代對應(yīng)量的新鮮孢子懸液使用。2022/12/20214、菌懸液制備后應(yīng)在2小時內(nèi)2022/12/2422謝謝2022/12/2022謝謝2022/12/2423菌種的保藏和管理國家藥典委員會杜平華2022/12/201菌種的保藏和管理國家藥典委員會2022/12/2424前言

試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。2022/12/202前言試驗過程中，生物樣本2022/12/2425菌種保藏的重要性

菌種保藏是微生物學(xué)檢驗工作中的一項常規(guī)技術(shù)，菌種的科學(xué)保藏和管理直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的正確性。

2022/12/203菌種保藏的重要性菌種保藏是微生物學(xué)2022/12/2426菌種的來源

藥品微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。2022/12/204菌種的來源藥品微生物檢驗2022/12/2427

⒈廣泛收集各種有用的微生物菌種。⒉選擇最適宜的保藏方法。菌種保藏的中心任務(wù)2022/12/205菌種保藏的中心任務(wù)2022/12/2428常用菌種保藏方法

菌種保藏的原則降低微生物細(xì)胞的代謝強度，使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但不至于死亡，以減低菌種的變異率。

2022/12/206常用菌種保藏方法菌種保藏的原2022/12/2429

標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按驗證的方法進行。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株工作菌株常用菌種保藏方法2022/12/207標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按2022/12/2430

工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。2022/12/208工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌2022/12/2431

不同的微生物，應(yīng)根據(jù)其生物特征來選擇最適宜的保藏方法，菌種的保藏方法一般分四個階段：2022/12/209不同的微生物，應(yīng)根據(jù)其生物特征來選2022/12/2432⑴

挑選特征典型的菌落。⑵確定保藏的合適菌體。⑶選擇最適宜的方法。⑷定期進行檢查。2022/12/2010⑴

挑選特征典型的菌落。2022/12/2433二、菌種的傳代和使用

工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。

2022/12/2011二、菌種的傳代和使用工2022/12/2434細(xì)菌的接種、分離和培養(yǎng)接種方法涂布法劃線法穿刺法直接加入法等2022/12/2012細(xì)菌的接種、分離和培養(yǎng)2022/12/2435

分離分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。2022/12/2013分離2022/12/2436

培養(yǎng)

需氣菌培養(yǎng)法

厭氧培養(yǎng)法2022/12/2014培養(yǎng)2022/12/2437

培養(yǎng)后微生物的生長判斷

固體培養(yǎng)基：有菌落生長或沿穿刺線擴散生長。

液體培養(yǎng)基：渾濁、菌膜、沉淀等。

2022/12/2015培養(yǎng)后微生2022/12/2438

三、菌種的檢查與復(fù)壯

菌種的衰退控制菌種的衰退方法

⑴控制傳代次數(shù)⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件⑶用不同類型的細(xì)胞進行傳代⑷采用有效的保藏方法

⑸定期檢查

⑹菌種的復(fù)壯2022/12/2016三、菌種的檢查與復(fù)壯菌種2022/12/2439

四、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強的責(zé)任心。

2022/12/2017

四、菌種的管理

1、使用菌種2022/12/2440

⒉實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度

⒊詳細(xì)記錄⒋建立菌種帶出實驗室，外單位索取、購買制度⒌菌種建立菌種處理操作規(guī)程。

2022/12/2018⒉實驗室必須建立菌種保存和使用文2022/12/2441菌懸液的制備與保存

菌懸液的制備方法與保存采用經(jīng)驗證的方法制備菌懸液，除另有規(guī)定外，微生物限度試驗用菌懸液的制備如下：

1、接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時.2、接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48小時。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為10～100cfu的菌懸液。2022/12/2019菌懸液的制備與保存

菌懸液的2022/12/2442

3、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7天。加入3～5ml含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05％（（v/v