土壤酶活性測定方法

(完整)土壤酶活性測定方法(完整)土壤酶活性測定方法66土壤酶活性測定方法土壤脲酶的測定方法(苯酚鈉—次氯酸鈉比色法）一、原理脲酶存在于大多數細菌、真菌和高等植物里。它是一種酰胺酶作用是極為專性的，它僅能水解尿素，水氮素狀況。土壤中脲酶活性的測定是以脲素為基質經酶促反應后測定生成的氨量,也可以通過測定未水解的尿素量來求得。本方法以尿素為基質，根據酶促產物氨與苯酚—次氯酸鈉作用生成藍色的靛酚，來分析脲酶活性。二、試劑1）甲苯2)10%尿素：稱取10g尿素，用水溶至100ml。3（PH6.:184g檸檬酸和147.5g（KOPH6。7，1000ml。4)苯酚鈉溶液(。35mol/：62。5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀釋至100ml（A100mlBAB20ml100ml。0。9％，溶液穩(wěn)定。0.4717g1000ml，得到1ml0.1mg10（10ml100ml)制成氮的工作液（0.01mg/ml）.三、操作步驟5g50ml1ml15min10ml1020mlPH37℃241ml50ml4ml3ml20min1h578nm（1h。0135791113ml50ml20ml4ml3ml20min定容。1h578nm注意事項：1、每一個樣品應該做一個無基質對照，以等體積的蒸餾水代替基質,其他操作與樣品實驗相同，以排除土樣中原有的氨對實驗結果的影響。2、整個實驗設置一個無土對照，不加土樣，其他操作與樣品實驗相同，以檢驗試劑純度和基質自身分解。3、如果樣品吸光值超過標曲的最大值，則應該增加分取倍數或減少培養(yǎng)的土樣四、結果計算：以24小時后1g土壤中NHN的毫克數表示土壤脲酶活性Ure。3Ure=（a－a）×V×n／m式中：aNH－N3aNH－N3aNH－N3V為顯色液體積;n為分取倍數，浸出液體積／吸取濾液體積；m表示烘干土重土壤磷酸酶活性測定(磷酸苯二鈉比色法）一、原理測定磷酸酶主要根據酶促生成的有機基團量或無機磷量計算磷酸酶活性。前一種通常稱為有有機基團含量法，是目前較為常用的測定磷酸酶的方法，后一種稱為無機磷含量法。研究證明:磷酸酶有三種最適PH值：4～56~78～10PHPH(PH5.0~4（PH70)三羥甲基氨基甲烷緩沖液（PH7.0~8.5)、和硼酸緩沖液（PH9~10。磷酸酶測定時常用基質有磷酸苯二鈉、酚酞磷酸鈉、甘油磷酸鈉、β-萘酚磷酸鈉等。現(xiàn)介紹磷酸苯二鈉比色法。二、試劑緩沖液：醋酸鹽緩沖液（PH。0）0.2mol/L醋酸溶液11.55ml95%冰醋酸溶至1L.0.2mol/L醋酸鈉溶液16。4gCHONa27gCHONa.3HO1L.232 232 2取14。8ml0。2mol/L醋酸溶液和35。2ml0。2mol/L醋酸鈉溶液稀釋至1L。檸檬酸鹽緩沖液7。0）mol/L檸檬酸溶液19.2gCHO1L。678mol/L磷酸氫二鈉溶液53.63g

HPO2

。7H4

O71。7g2

HPO2

.12H4

O溶至1L。2取6。4ml0.1mol/L檸檬酸溶液加43。6ml0。2mol/L磷酸氫二鈉溶液稀釋至100ml。硼酸鹽緩沖液（PH。6）0.05mol/L硼砂溶液19。05g硼砂溶至1L.0。2mol/LNaOH溶液8gNaOH溶至1L.取50ml0。05mol/L硼砂溶液加23ml0。2mol/LNaOH溶液稀釋至200ml.2）0.5％磷酸苯二鈉（用緩沖液配制）0125g10ml96放在冰箱里。保存的黃色溶液未變褐色之前均可使用。甲苯5）0.3%硫酸鋁溶液6）酚標準溶液1g1L，酚工作液（0。01mg/ml）:10ml1L。三、操作步驟5g200ml2.5ml15min20ml0。5%磷酸苯二鈉（酸酶用乙酸鹽緩沖液；中性磷酸酶用檸檬酸鹽緩沖液；堿性磷酸酶用硼酸鹽緩沖液24h.100ml0.33ml50ml660nm035791113ml50ml5ml4,30min660nm注意事項：1、每一個樣品應該做一個無基質對照，以等體積的蒸餾水代替基質，其他操作與樣品實驗相同,以排除土樣中原有的氨對實驗結果的影響。2、整個實驗設置一個無土對照，不加土樣,其他操作與樣品實驗相同,以檢驗試劑純度和基質自身分解。3、如果樣品吸光值超過標曲的最大值，則應該增加分取倍數或減少培養(yǎng)的土樣四、結果計算24h1g磷酸酶活性=（aa－a）×V×n／m式中：a樣品為樣品吸光值由標準曲線求得的酚毫克數；a無土為無土對照吸光值由標準曲線求得的酚毫克數;a無基質為無基質對照吸光值由標準曲線求得的酚毫克數;V為顯色液體積；n為分取倍數，浸出液體積／吸取濾液體積；m表示烘干土重土壤蔗糖酶活性測定（3，5-二硝基水楊酸比色法）一、原理蔗糖酶與土壤許多因子有相關性,如與土壤有機質、氮、磷含量，微生物數量及土壤呼吸強度有關，一般情況下,土壤肥力越高，蔗糖酶活性越高.蔗糖酶酶解所生成的還原糖與3，5—二硝基水楊酸反應而生成橙色的3—氨基-5-硝基水楊酸。顏色深度與還原糖量相關,因而可用測定還原糖量來表示蔗糖酶的活性。二、試劑8％蔗糖，pH5。51/15M（11.876gNaHPO·2HO2 4 21L）0.5ml1/15M（9.078gKHPO1L）9.5ml2 4葡萄糖標準液（1mg/mL)80℃烘箱內約1250mg50mL4℃保存期約一星期3，5—(DNS）05g20ml2mol/LNaOH50ml30g100ml（保存期不過7天).三、操作步驟（1）標準曲線繪制1mg/mL的標準葡糖糖溶液05mL3mL540nmOD（2)土壤蔗糖酶測定5g50mL15ml，5mlpH5.5537℃24h50ml3mlDNS5min3min3—氨基—5-50ml,508nm四、結果計算：24h，1g蔗糖酶活性=（a－a）×n／ma樣品、a無土、a無機質分別表示其由標準曲線求的葡萄糖毫克數；n為分取倍數；m表示烘干土重土壤纖維素酶活性測定（3，5-二硝基水楊酸比色法)(完整)土壤酶活性測定方法一、原理(完整)土壤酶活性測定方法一、原理66纖維素是植物殘體進入土壤的碳水化合物的重要組分之一。在纖維素酶作用下,它的最初水解產物是纖維二糖，在纖二糖酶作用下，纖維二糖分解成葡萄糖.所以，纖維素酶是碳素循環(huán)中的一個重要的酶。纖維素酶解所生成的還原糖與3,5-二硝基水楊酸反應而生成橙色的3—氨基—5—硝基水楊酸。顏色深度與還原糖量相關,因而可用測定還原糖量來表示蔗糖酶的活性。二、試劑1）甲苯2）1%羧甲基纖維素溶液：1g羧甲基纖維素鈉,用50％的乙醇溶至100ml.3）pH5.5醋酸鹽緩沖液：0.2mol/L醋酸溶液11.55ml95％冰醋酸溶至1L。0。2mol/L醋酸鈉溶液16.4gCHONa2722gCHONa。3HO1L。232 232 2取11ml0。2mol/L醋酸溶液和88ml0。2mol/L醋酸鈉溶液混勻即成PH5.5醋酸鹽緩沖液.3，5—1。25g50ml2mol/LNaOH125ml75g250ml（7）,葡萄糖標準液(1mg/mL）預先將分析純葡萄糖置80℃烘箱內約12小時。準確稱取50mg葡萄糖于燒杯中,用蒸餾水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容,搖勻（冰箱中4℃保存期約一星期)。若該溶液發(fā)生混濁和出現(xiàn)絮狀物現(xiàn)象，則應棄之，重新配制。三、操作步驟1mg/mL00.10.20.4060.8mL1mL，加DNS3ml5min，540nmOD10g50ml。5ml15min5ml1％羧甲基纖維素溶5mlpH5.53772h1ml）四、結果計算72h,1g－aa樣品、a無土、a無機質分別表示其由標準曲線求的葡萄糖毫克數；n為分取倍數；m表示烘干土重過氧化氫酶活性測定(高錳酸鉀滴定法）過氧化氫對生物和土壤具有毒害作用。與此同時，在生物體和土壤中存有過氧化氫酶,能促進過氧化氫分解（HOHO+O（含22 2 2有過氧化氫酶)和過氧化氫作用析出的氧氣體積或過氧化氫的消耗量,測定過氧化氫的分解速度，以此代表過氧化氫酶的活性。測定過氧化氫酶的具體方法比較多,如氣量法：根據析出的氧氣體積來計算過氧化氫酶的活性；比色法：根據過氧化氫與硫酸銅產生黃色或橙黃色絡合物的量來表征過氧化氫酶的活性；滴定法:用鉀滴定法。二、試劑2mol/LHSO5。43ml500ml,置于冰箱貯存；2 4002mol/L17g400mL500mL，避光保存,用時用0.1mol/L草酸溶液標定；0.1mol/L草酸溶液：稱取優(yōu)級純HCO 2HO。334g,用蒸餾水溶解后，定容至250ml；224 23%HO30%HO25ml250ml0.1mol/L

溶液標定。22 22 4三、操作步驟5g5mL4℃冰箱中30min25mL3％HO22

水溶液，充分混勻后,再置于冰箱中放置1h.取出,迅2mol/LHSO1mL5mL5mL2mol/L2 4HSO溶液，用0.02mol/LH

的量所消2 4 22耗的KmnO.過氧化氫酶活性以每g干土1h內消耗的0.1mol/LKmnO體積數表示(以mL計）表示.4 4四、結果計算（如下面處理)：KMnO10mL0.1mol/LHC

用KMnO滴定，所消耗KMnO體積數為19.49mL，由此計算出KMnO標4準溶液濃度為0.0205mol/L。

224 4 4 4HO標定：1ml3%HO用KMnO滴定,所消耗KMnO體積數為16。51ml,由此計算出HO22 22 4 4 2

濃度為0.846