中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究的概況

中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究的概況論文內(nèi)容摘要：體外實(shí)驗(yàn)方法對(duì)于藥理學(xué)研究至關(guān)主要，十分是在細(xì)胞、亞細(xì)胞、分子等水平進(jìn)行深切進(jìn)入的機(jī)制研究時(shí)，但此方法對(duì)于中藥而言，存在很多問題。中藥血清藥理學(xué)作為一種新的體外試驗(yàn)方法，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果被證明愈加可信，與整體實(shí)驗(yàn)的相關(guān)性更好。隨著藥研究的不斷深切進(jìn)入以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病防治的需要，中藥復(fù)方有效成分能否能通過血腦屏障并產(chǎn)生效用已成為亟待解決的問題。中藥腦脊液藥理學(xué)方法的提出不僅為我們提供了一種科學(xué)的方法，更為中藥復(fù)方作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究帶來了新思路。論文本文關(guān)鍵詞語：血清藥理學(xué),中藥腦脊液藥理學(xué),體外培養(yǎng)上80年代由日本學(xué)者田代真一在日本第一屆和漢醫(yī)藥學(xué)會(huì)上初次提出的給動(dòng)物灌服中藥一定時(shí)間后，取其血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的方法，遭到了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，并在其后的應(yīng)用中，國(guó)內(nèi)外學(xué)者很重視中藥復(fù)方血清制備方法的研究。上世紀(jì)90年代開始，中藥血清藥理學(xué)在我們國(guó)家興起。作為一種改進(jìn)后的中藥藥理體外實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，它使人們對(duì)于中藥的評(píng)價(jià)系統(tǒng)產(chǎn)生了觀念上的改變，雖然存在一定的爭(zhēng)議，但此種方法的應(yīng)用對(duì)于中藥進(jìn)行藥理乃至藥效學(xué)的研究都起到了至關(guān)主要的作用。近年來，隨著中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病日益成為威脅人類健康的重重要疾病，如以神經(jīng)元病變?yōu)橹鞯呐两鹕『秃嗤㈩D病，及以急性腦出血為主的急性腦血管病變等的發(fā)病率都在逐年增高，進(jìn)而使得中藥及其復(fù)方對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)保衛(wèi)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的研究日益興起，腦脊液藥理學(xué)這一概念隨之被提出。1.中藥藥理作用特點(diǎn)1.1中藥藥理作用的多效性黃芩一味中藥的藥理作用就有抗病原微生物、抗變態(tài)反應(yīng)和抗炎、解熱、抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)cAMP等13項(xiàng)。1.2中藥藥理作用的復(fù)雜性1.2.1影響因素多影響中藥藥理作用的因素有眾多方面，藥物因素有藥材、制劑、劑量和配伍等，機(jī)體因素包含生理因素、病理因素，除此之外還有環(huán)境因素等。藥材的不同產(chǎn)地、品種、采收季節(jié)、貯藏條件、制劑的不同炮制工藝劑型、劑量、煎煮方法、復(fù)方的不同配伍、機(jī)體的不同體質(zhì)、年齡、性別、情志、機(jī)體功能、環(huán)境的不同地理?xiàng)l件、氣候等等對(duì)中藥藥效都有不同水平的影響。1.2.2藥效化學(xué)成分復(fù)雜中藥中即便是單味藥材，其含有的化學(xué)成分也有幾十種以至上百種，譬如人參，更何況中藥又多以復(fù)方用藥，藥效化學(xué)成分也極為復(fù)雜，有蛋白質(zhì)、肽類、氨基酸、脂類、糖類、苷類、生物堿、單寧、甾體、酚類、醌類、揮發(fā)油、維生素以及微量元素等多種成分。1.3中藥藥理作用雙向調(diào)節(jié)性中藥的雙向調(diào)節(jié)作用為同一藥物對(duì)機(jī)體某一功能適宜劑量時(shí)使之興奮，超大劑量時(shí)使之抑制；或同一藥物對(duì)機(jī)體若干功能，有的呈現(xiàn)抑制效應(yīng)，有的呈現(xiàn)興奮效應(yīng)，麝香重要成分麝香酮小劑量可縮短戊巴比妥鈉所致的小鼠睡眠時(shí)間，大劑量則使睡眠時(shí)間延長(zhǎng)。表現(xiàn)為雙向性影響。即小劑量興奮神經(jīng)系統(tǒng)，大劑量抑制。1.4中藥藥理作用整體平衡性中藥及其復(fù)方種類繁多，成效復(fù)雜，但其基本作用為“扶正祛邪，調(diào)節(jié)平衡〞，通過扶正祛邪來加強(qiáng)機(jī)體抗病能力，現(xiàn)代研究表示清楚補(bǔ)益藥，如：人參、黃芪等重要是通過加強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，加強(qiáng)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，尤其是下丘腦一垂體一性腺軸功能而產(chǎn)生扶正之成效。通過調(diào)整陰陽，調(diào)和氣血使機(jī)體的各功能互相協(xié)調(diào)與平衡，如寒涼藥能減輕或消除熱證，溫?zé)崴幠軠p輕或消除寒證，補(bǔ)偏救弊，促進(jìn)平衡是中藥治療疾病的根本法則之一。2.中藥藥效作用機(jī)理的研究進(jìn)展2.1中藥學(xué)清藥理學(xué)2.1.1中藥血清藥理學(xué)方法的優(yōu)勢(shì)和特色中藥藥理學(xué)方法是在以前體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上加以改良構(gòu)成的，即以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，它不僅具有體外實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：如條件可控性強(qiáng)，可在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平進(jìn)行超微、生化、受體、基因等方面的研究；揭示藥物作用機(jī)理較為深切進(jìn)入，反復(fù)性好，使用材料少等，而且有其更合適中藥及其復(fù)方制劑研究的獨(dú)特之處。由于中藥尤其是復(fù)方制劑的化學(xué)成分極其復(fù)雜，經(jīng)過體外的煎煮或其他制備經(jīng)過，再經(jīng)口服以后在體內(nèi)發(fā)生一系列變化，有的是藥物自己物質(zhì)發(fā)揮作用，有的是經(jīng)過肝臟代謝的產(chǎn)品發(fā)揮作用，有的是腸道細(xì)菌代謝產(chǎn)品發(fā)揮作用。因而，以中藥的粗提物的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果來評(píng)價(jià)藥物的體內(nèi)效應(yīng)是不客觀的也是不確切的。以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)更接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥效的真實(shí)經(jīng)過。中藥血清藥理學(xué)方法優(yōu)點(diǎn)如下：采取含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞能夠直接觀察中藥的藥物學(xué)效應(yīng)，便于從微觀說明藥物作用機(jī)理；利于用現(xiàn)代生命科學(xué)說明中藥復(fù)方配伍本質(zhì)，便于觀察和追蹤藥物的吸收和代謝經(jīng)過，排除體外干擾因素影響，較清楚地認(rèn)識(shí)藥物活性成分和活性部位，為藥物進(jìn)一步開發(fā)提供根據(jù)。因此十分適用于中藥及復(fù)方藥理作用和化學(xué)成分的研究。2.1.2中藥血清藥理學(xué)方法研究中的幾個(gè)關(guān)鍵技術(shù)血清藥理學(xué)方法的問題重要集中在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、給藥次數(shù)與時(shí)間、給藥劑量、含藥血清的收集以及含藥血清的滅活等幾個(gè)方面，其關(guān)鍵技術(shù)在于含藥血清的收集、含藥血清的預(yù)處理以及血清藥理實(shí)驗(yàn)作用效應(yīng)-劑量關(guān)系這3個(gè)方面。血清藥理學(xué)在方法學(xué)上解決了中藥復(fù)方提取物直接應(yīng)用于離體實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn),能夠研究進(jìn)入體內(nèi)的中藥有效成分或其代謝產(chǎn)品的藥理作用。2.2中藥腦脊液藥理學(xué)2.2.1腦脊液藥理學(xué)方法的建立及優(yōu)勢(shì)由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障的存在，使腦的內(nèi)環(huán)境、神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生存的微環(huán)境與本身血液系統(tǒng)有著顯著的不同,而且藥物能否能透過血腦屏障已成為研究中藥神經(jīng)保衛(wèi)作用的關(guān)鍵;同時(shí),由于血清中含有多種活性酶及蛋白,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞均有一定的影響。梅建勛等、馮淑怡等的實(shí)驗(yàn)證明也了這一點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)利用含藥腦脊液進(jìn)行中藥對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效觀察明顯優(yōu)于血清藥理學(xué)方法?；谏鲜鲈?梅建勛等在研究中藥復(fù)方對(duì)神經(jīng)保衛(wèi)作用時(shí),首次提出了腦脊液藥理學(xué)的概念。在該研究小組隨后的清腦益智方對(duì)谷氨酸損傷神經(jīng)保衛(wèi)作用的實(shí)驗(yàn)研究中,正式建立了中藥腦脊液藥理學(xué)方法,即用含藥腦脊液代替含藥血清,研究中藥及其復(fù)方對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保衛(wèi)作用，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：無論是正常血清還是藥物血清均顯現(xiàn)對(duì)神經(jīng)元的毒害作用，對(duì)于觀察中藥的藥理作用產(chǎn)生了障礙，而采取腦脊液則能夠克制上述缺點(diǎn)。腦脊液藥理學(xué)優(yōu)勢(shì)重要有下面幾個(gè)方面:一,中藥及復(fù)方的化學(xué)成分,在生物體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化成活性成分,或代謝后失活,或沒有被吸收入體內(nèi),或通過第2、3信使等信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)間接起作用,這使得中藥及復(fù)方的研究趨于困難;又由于化學(xué)成分或生物活性成分通過血腦屏障的數(shù)量有限;而腦脊液藥理學(xué)的方法能夠簡(jiǎn)化這種研究經(jīng)過。二,腦脊液藥理學(xué)排除了體外實(shí)驗(yàn)的各種干擾因素,可直接以觀察中藥及復(fù)方作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效學(xué)效應(yīng)為導(dǎo)向,確證中藥及復(fù)方藥物中重要的有效成分及生物活性部分。三,血清自己內(nèi)源性成分復(fù)雜,含有多種活性物質(zhì)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有一定影響;而腦脊液避免了血清自己的毒害作用所遮蓋的藥效作用。四,腦脊液藥理學(xué)方法不只適用于口服給藥的中藥對(duì)神經(jīng)保衛(wèi)作用研究,也合適于打針給藥的藥物研究。五,腦脊液藥理學(xué)更解決了中藥大分子能否通過血腦屏障的問題,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制研究中,更具有科學(xué)性、真實(shí)性、可行性。2.2.2中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究中的關(guān)鍵技術(shù)腦脊液藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法,是一種新興的重要評(píng)價(jià)作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，其實(shí)驗(yàn)條件尚不特別成熟,還需要進(jìn)一步完善。張啟春等，通過觀察當(dāng)歸芍藥散精簡(jiǎn)方(FBD)含藥腦脊液在不同條件下(給藥方案、添加量、處理方法、批次及保存時(shí)間)對(duì)過氧化氫所致PC12細(xì)胞損傷模型的保衛(wèi)作用,對(duì)腦脊液藥理實(shí)驗(yàn)條件規(guī)范化進(jìn)行了初步討論。而該方法的關(guān)鍵在于獲得有效的含藥腦脊液，其重要環(huán)節(jié)包含下面幾方面：一,動(dòng)物的選擇,一般多項(xiàng)選擇用大鼠、家兔、犬等動(dòng)物來制備含藥腦脊液,由于各種動(dòng)物間存在種屬差別,且腦脊液含量相對(duì)較少,收集比較困難。因而在采取腦脊液藥理學(xué)方法時(shí),一方面,應(yīng)考慮制備腦脊液的動(dòng)物應(yīng)與獲得離體細(xì)胞的動(dòng)物相一致,進(jìn)而縮小動(dòng)物腦脊液間在理化、生物等特性上的差別,減少因種屬差別造成的免疫反應(yīng);另一方面,根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求,確定含藥腦脊液的用量。二,給藥次數(shù)及給藥劑量。大多實(shí)驗(yàn)研究通過增長(zhǎng)給藥劑量倍數(shù)來彌補(bǔ)實(shí)驗(yàn)時(shí)所稀釋倍數(shù);但是,含藥腦脊液組和含藥腦脊液凍干濃縮組比較,對(duì)β樣淀粉蛋白所致細(xì)胞損傷研究顯示,含藥腦脊液凍干濃縮組保衛(wèi)作用較強(qiáng),提示增長(zhǎng)給藥劑量不一定被動(dòng)物吸收、分布和代謝等,這可能導(dǎo)致藥效濃度與腦內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)的內(nèi)環(huán)境存在差別所致。因而，為了使試驗(yàn)條件更接近于藥物在體內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)的內(nèi)環(huán)境,建議含藥腦脊液的制備,可采取連續(xù)屢次給藥方案,無需滅活處理,一般以體外添加終體積的10%、-20℃保存、不跨越30d為宜。三,腦脊液的收集方法及制備技術(shù)。精確的收集足量的含藥腦脊液,是腦脊液藥理學(xué)方法中至關(guān)主要的一步。富宏等,采取經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法;曹遠(yuǎn)東等，比照了兩種收集SD大鼠腦脊液方法后，以為經(jīng)枕骨大孔法簡(jiǎn)單易行，損傷小，并發(fā)癥少，成功率高，優(yōu)于經(jīng)側(cè)腦室法；李惠勉等設(shè)計(jì)了一種經(jīng)顱鉆孔開窗置管收集兔腦脊液的方法，此方法收集腦脊液量大且快速省時(shí)。2.2.3腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)在狀況及前景近年來，腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用重要集中在中藥復(fù)方對(duì)防治腦血管疾病的作用機(jī)制的研究上,重要包含對(duì)海馬神經(jīng)細(xì)胞、皮層神經(jīng)細(xì)胞、凋亡的抑制造用以及對(duì)PC12細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的保衛(wèi)作用以及星形膠質(zhì)細(xì)胞CRL-2541活力和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP表達(dá)的影響等的體外觀察。腦脊液藥理學(xué)方法為研究中藥及其復(fù)方在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療方面提供了新的思路及行之有效的途徑，具有良好的應(yīng)用前景。以下為參考文獻(xiàn)1HtiokoI,SekaeA,Yukioofshosaikoto,aJapaneseandChineseherbalmedicinalmixtureonthemitogenicactivityoflipopolysaocharide,anewpharmacologicaltestingmethod[J].JEthnohpermacol,1987,21:45-53.2梅建勛,張伯禮,陸融.中藥腦脊液藥理學(xué)研究方法的初建—對(duì)中藥影響的星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的觀察[J].中草藥,2000,31:523-526.3張方,黃泰康.中藥藥效研究方法進(jìn)展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2004,21(2):156-159.4黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊(cè)[M].北京:科技出版社,1994,1866—1868.5薛潔,謝梅林.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究近況[J].中草藥,2003,34(6):附9~l1.6孫艷紅,方曉艷,劉紅雨.中藥血清藥理學(xué)方法研究大概情況[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2002,13(2):ll4~l15.7劉成海.抗肝纖維化有效中藥復(fù)方血清藥理學(xué)方法討論[J].中實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.1998,4(2):16~19.8崔曉蘭,賀玉琢,高英杰,等.中藥復(fù)方血清藥理研究方法學(xué)討論Ⅲ[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,1998,4(3):45.9王力倩,李儀奎,等.血清藥理學(xué)方法研究探尋求索[J].中藥藥理與臨床,1997,13(2):35.10周明眉,楊奎,姜遠(yuǎn)平,等.中藥血清藥理學(xué)的方法學(xué)研究(Ⅳ)——采血時(shí)間確實(shí)定及時(shí)效關(guān)系研究.中藥藥理與臨床[J].1998,14(增):110.11黃敏,楊坤杰.中藥血清藥理學(xué)的研究方法及其改良思路[J].湖北中醫(yī)雜志,2006,28:24-25.12馮淑怡.含與不含朱砂雄黃的安宮牛黃丸對(duì)大鼠出血性腦損傷的保衛(wèi)作用及機(jī)理研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2007.13梅建勛,張伯禮,陸融.中藥腦脊液藥理學(xué)方法的建立—清腦益智方對(duì)谷氨酸損傷神經(jīng)保衛(wèi)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].天津中醫(yī),1999,16:25.14閆晨,康立源.中藥腦脊液藥理學(xué)方法研究進(jìn)展[J].雜志,2009,25(3):257-259.15張啟春,寇俊萍,朱丹妮,等.腦脊液藥理實(shí)驗(yàn)條件規(guī)范化初探—當(dāng)歸芍藥散精簡(jiǎn)方的神經(jīng)保衛(wèi)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13:10-13.16VandenBergMP,RomeijnSG,VerhoefJC,etal.Serialcerebrospinalfluidsamplinginaratmodeltostudydruguptakefromthenasalcavity[J].JNeurosciMethods,2002,116(1):99-107.17富宏,陶迎紅,王學(xué)美,等.經(jīng)皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠腦脊液的方法[J]..中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志.2006,16(11):684-687.18曹遠(yuǎn)東,章龍珍,王梅申,等.兩種收集SD大鼠腦脊液方法的比較[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,25(4):317-319.19李惠勉,李建章,姚淑芬.一種實(shí)用