分析方法的開發(fā)

分析方法的開發(fā)目前高效液相多做反相使用，所以本文主要以反相為例進行講解。色譜柱的選擇5um填料的色250mm，3.5um150mm，基本上都是各個粒徑柱長最長的。喜歡近兩m4.6mm3.0mm100A左右，能滿足分析檢測的需要。對于API分析方法開發(fā)，一般要求必須做色譜柱的篩選實驗，最少使用三種不同類型的色譜柱，每種類型三只，要來自于不同廠家。三種類型包括：C18C8WatersSymmetryC18C8，YMCPackProC18或C8，Agilent的RXC8等，其它公司如菲羅門和熱電也有相應的色譜柱；WatersSymmetryShieldRP18ODSZorbaxSBAQ等，其它公司如菲羅門和熱電也有相應的色譜柱；填料用其它官能團修飾過的色譜柱，如苯基柱等，很多公司都有。C18和C8C18保留能力更強，相同的樣品分離度更高，我們一般傾向于選C18測結果的可信度。我比較喜歡用的柱子有：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18、ZorbaxEclipsePlusC18，WatersSymmetryC18、XTerraRP18、XTerraMSC18等，YMC的柱子有時會是不錯的備用選擇，API（IPC）分析方法開發(fā)使用的色譜柱，一般會根據樣品性質直接選取一兩只普通C18或者封端處理過的色譜柱，簡化篩選過程。流動相的選擇20nm，增加了檢測出在低波長下才有吸收的雜質的可能性，所以我常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等，其中最常用的是磷酸和三氟乙pH值，從而改善樣品的分離度和峰形。1)流動相pH2)pH值改變甚至可以改變某些樣品出峰pKa3.54.5pKa3.54.5pH值能幫助0.1%（體積）的磷pH201.%的磷酸，然后再以此為基礎做優(yōu)化。在單獨用酸不行的時候就要考10~20mM10~20mMpHpHNaOH、KOH溶液或氨水pH的試劑，也可以往水里單獨添加氨水做堿性流動相。在緩沖鹽做流10%10倍水溶液濃度的緩沖A、B兩項鹽的濃度相同，可以避免基線漂移嚴重的問題。原料藥一般結構式比較大，分子構成比較復雜，開發(fā)分析方法時用水加磷酸效果可能效果不好，26.5pHpHIPC的分析方法時可以根據經驗酌情簡化流動相的選擇過程梯度的優(yōu)化梯度優(yōu)化主要是通過調節(jié)流動相的起始比例和梯度的斜率來調整樣品的保留時間，優(yōu)化樣品的分離度。有機相起始比例越小，樣品保留時間越長，隨著梯度的改變，樣品出峰的先后順序也有可離度。有機相起始比例越小，樣品保留時間越長，隨著梯度的改變，樣品出峰的先后順序也有可相要注意梯度變化過程中流動相組成改變時不能有鹽析出。使用緩沖鹽溶液的梯度水相起始比例一般要從10~20%開始，為了防止鹽析出，在梯度最后避免用純的有機相做沖洗，梯度斜率采用恒定的就可以，在此基礎上根據方法運行的情況對梯度進0.1%95%95%的有機相結束，注意使用緩沖鹽溶液的梯度水相起始比例一般要從10~20%開始，為了防止鹽析出，在梯度最后避免用純的有機相做沖洗，梯度斜率采用恒定的就可以，在此基礎上根據方法運行的情況對梯度進行調整。API40~5015~20分鐘