艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露教學(xué)課件

艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況目前我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室已達(dá)630個1個艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室（省疾控中心）6個艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂疾控中心、山東出入境檢驗(yàn)檢疫局國際旅行衛(wèi)生保健中心）18個艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室（含5個艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室）610個艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。

目前已驗(yàn)收16個待驗(yàn)收艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室2個、確證實(shí)驗(yàn)室1個2我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況目前我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室已達(dá)我省艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況1995年2月6日，山東省衛(wèi)生防疫站艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過衛(wèi)生部驗(yàn)收。2005年2月18日，青島市疾控中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收。2009年4月8日濟(jì)南、淄博、煙臺市疾控中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收。2013年4月1日臨沂疾控中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收。3我省艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況1995年2月6日，山東省衛(wèi)生防我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室

檢測能力省疾控中心：艾滋病抗體的篩查、確證；CD4淋巴細(xì)胞；病毒載量；耐藥；新發(fā)感染；嬰幼兒早期診斷、HBV、HCV、TP?？贵w確證：濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。CD4淋巴細(xì)胞：濟(jì)南、青島、煙臺、菏澤、泰安、濟(jì)寧、臨沂、濰坊市CDC艾滋病抗體篩查：610個實(shí)驗(yàn)室。4我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室

檢測能力省疾控中心：艾滋病抗體的篩查、省CDC實(shí)驗(yàn)室檢測能力2013年8月2～3日順利通過資質(zhì)認(rèn)定、食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定、實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可“三合一”現(xiàn)場評審.實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可項(xiàng)目：27類1313項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定（計(jì)量認(rèn)證）項(xiàng)目：22類740項(xiàng)食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定項(xiàng)目：5類573項(xiàng)艾防所通過項(xiàng)目：艾滋病抗體篩查、確證CD4T淋巴細(xì)胞檢測病毒載量乙肝、丙肝確證5省CDC實(shí)驗(yàn)室檢測能力2013年8月2～3日順利通過資質(zhì)認(rèn)定歷年篩查實(shí)驗(yàn)室考核情況6歷年篩查實(shí)驗(yàn)室考核情況6目標(biāo)1：確證實(shí)驗(yàn)室目前全部建在疾控系統(tǒng)目標(biāo)：2015年底，17市疾控全部建立，鼓勵醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)建立艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室?！渡綎|省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）7目標(biāo)1：確證實(shí)驗(yàn)室目前全部建在疾控系統(tǒng)7目標(biāo)2：艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)：2013年底，皮膚病性病防治機(jī)構(gòu)、婦幼保健機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)（單采漿站）及各類二級以上（含二級）醫(yī)療機(jī)構(gòu)要建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）8目標(biāo)2：艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)：2013年底，皮膚病性病防治機(jī)目標(biāo)3：艾滋病檢測點(diǎn)1、目前全省尚未建立2、目標(biāo)：2015年底，所有的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和一級醫(yī)療機(jī)構(gòu)都建立艾滋病檢測點(diǎn)，鼓勵具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和一級醫(yī)療機(jī)構(gòu)建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）9目標(biāo)3：艾滋病檢測點(diǎn)1、目前全省尚未建立9目標(biāo)4：擴(kuò)大檢測1、腎透析人群2、醫(yī)院侵入性診療人群3、計(jì)劃生育門診就診人群4、單位體檢人群5、無償獻(xiàn)血人群

——五類人群全部進(jìn)行丙肝檢測《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于印發(fā)山東省艾滋病擴(kuò)大檢測工作活動方案的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]29號（2013年5月9日下發(fā)）10目標(biāo)4：擴(kuò)大檢測1、腎透析人群10二、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)（一）HIV(ELISA、金標(biāo)、PA、化學(xué)發(fā)光、WB)（二）TP(ELISA、TPPA、TRUST)（三）HCV(ELISA、RIBA)（四）BED（ELISA、親和力)11二、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)（一）HIV(ELISA、

20092006艾滋病檢測工作有關(guān)的技術(shù)規(guī)范和指南20062008201120112008

20041220092006艾滋病檢測工作有關(guān)的ELISA

13ELISA13OD值S/CO值雙波長的優(yōu)點(diǎn)CUTOFF值OD是opticaldensity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。S/CO=OD/CUTOFF使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。仔細(xì)閱讀和理解說明書,嚴(yán)格按照說明書要求操作14OD值仔細(xì)閱讀和理解說明書,嚴(yán)格按照說明書要求操作14常見問題原因分析及解決辦法(1)試劑1.觀察外包裝，內(nèi)主份有無漏液，注意效期等。2.仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。3.操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘，保證酶等液體的初始反應(yīng)溫度及活性劑的溶解。15常見問題原因分析及解決辦法(1)試劑15(2)加樣過程應(yīng)注意的問題1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。2.漏加樣品或加樣量不足的3.加液器的校正4.加樣時間過長5.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長6.洗板機(jī)不足，不能及時洗板16(2)加樣過程應(yīng)注意的問題1.血清或血將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。優(yōu)點(diǎn)：快速、簡便、易操作BED2次/年用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，造成洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差，直接影響本底。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；嬰幼兒早期診斷、HBV、HCV、TP。在短時間(30分鐘)內(nèi)出結(jié)果CD4T淋巴細(xì)胞檢測試劑必須在有效期內(nèi)使用；（三）HCV(ELISA、RIBA)快速檢測，不是為了取代實(shí)驗(yàn)室，但不能因?yàn)橛辛藢?shí)驗(yàn)室而放棄使用快速檢測。按說明步驟嚴(yán)格控制孵育時間。可檢測100份以內(nèi)小批量樣品2．讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。艾滋病抗體篩查和確證3次/年數(shù)據(jù)來源:Residualriskoftransfusion-transmittedviralinfectionsinShenzhen,China,2001through2004《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于印發(fā)山東省艾滋病擴(kuò)大檢測工作活動方案的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]29號（2013年5月9日下發(fā)）(3)孵育過程中出現(xiàn)的問題1.溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；2.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合，難以清洗徹底。3.孵育時溫度不符合說明書的規(guī)定范圍。1.按規(guī)定加蓋封板膜。2.按說明步驟嚴(yán)格控制孵育時間。3.嚴(yán)格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動酶免）的溫度，建議在儀器內(nèi)放置測量工具（全自動酶免除外）。（解決辦法）17將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅(4)洗板過程中易出現(xiàn)的問題1.采用手工洗板,孔與孔之間液體容易交叉，切不可隨意洗板。2.采用洗板機(jī)洗板時，洗液注入孔中量不足，導(dǎo)致洗板不徹底，造成本底高。3.由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，造成洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差，直接影響本底。4.反應(yīng)板過多，不能保證及時洗板，造成洗板等待時間過長，影響結(jié)果。5.洗板前先將孔內(nèi)液體甩出包被板。解決辦法1.禁止手工洗板。2.保證洗液注滿各孔。3.洗板時注意觀察是否有堵孔現(xiàn)象，保持洗板針暢通。4.合理安排操作（洗板）時間。5.洗板前不要先將孔內(nèi)液體甩出包被板，以免酶液沾于孔邊緣。18(4)洗板過程中易出現(xiàn)的問題1.采用手工洗板,孔與孔之間液體(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題1.顯色劑配制后放置時間過長或使用已經(jīng)變色失效的顯色劑2.用排槍加A、B混合液時，加樣槽不夠干凈，造成花板3.不同廠家試劑的顯色液混用19(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題1.顯色劑配制后放置時間過長或使(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)1．加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。2．讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。20(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)1．加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)1、價格低2、一般實(shí)驗(yàn)室均可操作3、不需特殊儀器設(shè)備4、適用于大面積查體缺點(diǎn)1、易出假陽性2、不適用于單個樣本測定21酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)21快速檢測法優(yōu)先使用項(xiàng)目包括: VCT、母嬰傳播、臨床評估、農(nóng)村血檢、術(shù)前檢測、緊急事件等。技術(shù)角度的考慮包括: 需要快速得到結(jié)果、免去試劑和樣本的冷鏈運(yùn)輸環(huán)節(jié)、小空間實(shí)驗(yàn)室的成本效益、檢測的簡單性等。22快速檢測法優(yōu)先使用項(xiàng)目包括:22快速檢測反應(yīng)模式免疫層析實(shí)驗(yàn)滲濾實(shí)驗(yàn)（間接法/雙抗原夾心法）23快速檢測反應(yīng)模式23免疫層析實(shí)驗(yàn)樣本：血漿/血清/全血（唾液）不同部位固定不同抗原可區(qū)分HIV-1/HIV-2,質(zhì)控線：抗人IgG一般需時15-30min弱陽性結(jié)果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體金標(biāo)HIV抗原顯色24免疫層析實(shí)驗(yàn)樣本：血漿/血清/全血（唾液）+Y+YHIV抗原

HIV?使用試驗(yàn)步驟將檢測條的外包裝撕去

血清和EDTA抗凝血漿

EDTA抗凝全血 加入50uL樣品

加入50uL樣品

過15分鐘讀結(jié)果

加1滴示蹤緩沖液

最多60分鐘(HIV)

過15分鐘讀結(jié)果最多60分鐘(HIV)

25HIV?使用試驗(yàn)步驟25結(jié)果解釋

陽性陰性

無效無效15分鐘后讀結(jié)果，對結(jié)果的解釋不要超過1小時。26結(jié)果解釋陽性陰性CD4T淋巴細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)需幾步：加樣本，加洗液，加信號試劑。一般在5-15min完成用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周反應(yīng)線的強(qiáng)度不一定與標(biāo)本中的抗體滴度相關(guān)。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。6.結(jié)果判讀不客觀，易受主觀因素影響抗體確證：濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖應(yīng)用BED-CEIA進(jìn)行新近感染檢測只適用于HIV陽性樣品。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；（三）HCV(ELISA、RIBA)簡單、易操作、反應(yīng)時間短610個艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。艾滋病抗體篩查：610個實(shí)驗(yàn)室。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露快速檢測，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測方法。實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可項(xiàng)目：27類1313項(xiàng)檢測要注意問題DetermineHIV-1/2試驗(yàn)只能使用人類血清、血漿和全血，對其他標(biāo)本結(jié)果可能不準(zhǔn)確。反應(yīng)線的強(qiáng)度不一定與標(biāo)本中的抗體滴度相關(guān)。含EDTA以外抗凝劑的全血或血漿標(biāo)本給出的結(jié)果可能不正確。陰性結(jié)果應(yīng)當(dāng)與臨床癥狀和風(fēng)險因子一起考慮。陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實(shí)。結(jié)合臨床證據(jù)對結(jié)果做過評價后才能作出診斷。27CD4T淋巴細(xì)胞檢測檢測要注意問題DetermineHIV2828滲濾實(shí)驗(yàn)原理：雙抗原夾心法樣本:血漿/血清（若有過濾裝置，則可測全血）可將抗原固定于不同位置，區(qū)分HIV-1和HIV-2實(shí)驗(yàn)需幾步：加樣本，加洗液，加信號試劑。一般在5-15min完成弱陽性結(jié)果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體金標(biāo)HIV抗原顯色29滲濾實(shí)驗(yàn)原理：雙抗原夾心法+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖30免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖30結(jié)果31結(jié)果31優(yōu)點(diǎn)：快速、簡便、易操作

可檢測100份以內(nèi)小批量樣品需要很少的設(shè)備和試劑檢測地點(diǎn)可擴(kuò)展到實(shí)驗(yàn)室以外只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)大部分為一步法在短時間(30分鐘)內(nèi)出結(jié)果結(jié)果易目測判讀可在室溫下保存32優(yōu)點(diǎn)：快速、簡便、易操作

可檢測100份以內(nèi)小批量樣品32缺點(diǎn)不宜一次檢測100份以上的大批量樣品比ELISA法價格略高。結(jié)果判讀不客觀，易受主觀因素影響33缺點(diǎn)不宜一次檢測100份以上的大批量樣品33快速檢測試劑選擇1.必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；2.試劑必須在有效期內(nèi)使用；3.根據(jù)檢測目的，選擇試劑初篩選擇敏感性高的試劑，復(fù)檢選擇特異性高的試劑；4.推薦使用臨床評估質(zhì)量好并且近幾年連續(xù)考評結(jié)果穩(wěn)定的試劑。

34快速檢測試劑選擇1.必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批3535三代與四代比較（快速試劑）四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/全血樣本中的HIV-1和HIV-2抗體，還可以檢測出p24抗原。p24抗原是感染HIV病毒后產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，比HIV抗體出現(xiàn)的要早，在艾滋病感染初期、窗口期內(nèi)可以通過檢測p24抗原來判斷是否感染HIV。四代試劑比三代試劑平均提前5天可以檢測出HIV感染者。靈敏度為92.31%，特異性為99.66%。目前國內(nèi)尚未上市36三代與四代比較（快速試劑）四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實(shí)。科美東雅：靈敏度100%；用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)31%，特異性為99.2%，但卻將殘余風(fēng)險降低了46.抗體確證：濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。性病艾滋病預(yù)防控制中心于2004年將該方法引進(jìn)國內(nèi)。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；CD4檢測2次/年艾滋病抗體篩查和確證3次/年耐藥檢測2次/年2006年6月美國CDC發(fā)布了“資源有限國家BED檢測/監(jiān)測HIV-1新發(fā)感染指南”暴露于HIV的潛在污染源包括：血液、血性體液、精液、陰道分泌物、腦脊液、胸膜液、腹水、心包液、滑膜液、羊水和組織或病毒培養(yǎng)液。(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題濾紙片干血斑HIV-DNA1次/年阿克蘇：靈敏度100%；將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。BED2次/年二次結(jié)果匯總統(tǒng)計(jì)：兩種試劑檢測結(jié)果一致，符合率為100%。復(fù)核試驗(yàn)方法選擇替代組合WB檢測結(jié)果陽性一致率（%）＋－±EIA1+RT1＋35100100EIA1+RT2＋34900100RT1+EIA1＋35100100RT1+EIA2＋33800100RT1+RT2＋3575098.5EIA1+EIA2＋3341099.737陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實(shí)。復(fù)核試驗(yàn)方法選擇替代組合WB檢免疫層析結(jié)果判讀記錄儀38免疫層析結(jié)果判讀記錄儀383939自動生成報告40自動生成報告40結(jié)果導(dǎo)出Excel41結(jié)果導(dǎo)出Excel414242免疫層析結(jié)果判讀記錄儀優(yōu)點(diǎn)：1.檢測結(jié)果的保存2.自動生成報告3.結(jié)果可導(dǎo)出缺點(diǎn)：1.不適合批量操作43免疫層析結(jié)果判讀記錄儀優(yōu)點(diǎn)：43快速檢測，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測方法?？焖贆z測，是為了更多、更快的的發(fā)現(xiàn)感染者?？焖贆z測，不是為了取代實(shí)驗(yàn)室，但不能因?yàn)橛辛藢?shí)驗(yàn)室而放棄使用快速檢測。44快速檢測，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測方法。44明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）將提純后的HIV抗原連接到有色明膠顆粒上，制成致敏顆粒。當(dāng)加入的檢測標(biāo)本中有HIV抗體存在時，即可使致敏顆粒凝集，出現(xiàn)肉眼可見的淺色凝集環(huán)（斑）；而若標(biāo)本中無HIV抗體，致敏顆粒即在重力作用下沉人U型板底，形成一個深色紅點(diǎn)。45明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）將提純后的HIV抗原連接到有色明膠顆1、加入樣品稀釋液孔號75μl25μl25μl13212、加入測試樣品25μl孔號1321棄去3、樣品倍比稀釋孔號1321最終稀釋倍數(shù)1：1625μl25μl25μl1：8461、加入樣品稀釋液孔號75μl25μl25μl13212、加過15分鐘讀結(jié)果應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。建立了適合于我國的BED方法的窗口期（168天）和4個關(guān)鍵校正系數(shù)（α=0.科美東雅：靈敏度100%；2009艾滋病抗體篩查：610個實(shí)驗(yàn)室。2．讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。BED2次/年(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題DetermineHIV-1/2試驗(yàn)只能使用人類血清、血漿和全血，對其他標(biāo)本結(jié)果可能不準(zhǔn)確。（三）HCV(ELISA、RIBA)濾紙片干血斑HIV-DNA1次/年溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；而若標(biāo)本中無HIV抗體，致敏顆粒即在重力作用下沉人U型板底，形成一個深色紅點(diǎn)。目標(biāo)：2015年底，17市疾控全部建立，鼓勵醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)建立艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室。美國已將用BED方法監(jiān)測新發(fā)感染率納入了國家艾滋病常規(guī)監(jiān)測體系，全美所有需要進(jìn)行新發(fā)感染檢測的樣品均寄至紐約州公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室，統(tǒng)一檢測，統(tǒng)一質(zhì)控，統(tǒng)一數(shù)據(jù)處理。對臨床工作者來講，最常見的暴露源是血液。手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。5、混勻，加蓋，室溫2個小時6、結(jié)果判讀致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號13211：32未致敏顆粒25μl25μl1：1647過15分鐘讀結(jié)果5、混勻，加蓋，室溫2個小時6、結(jié)果判讀致敏4848優(yōu)點(diǎn)：凝集試驗(yàn)具有操作簡便，經(jīng)一步即可迅速得出結(jié)果，不需任何儀器等優(yōu)點(diǎn)該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近不需特殊儀器該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近溶血標(biāo)本不影響結(jié)果缺點(diǎn)與不足：判定結(jié)果用肉眼觀察，無法保存。為了保存試驗(yàn)結(jié)果，需配備數(shù)碼相機(jī)。應(yīng)選用高質(zhì)量的U型板49優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)與不足：49唾液檢測試劑Oralquick50唾液檢測試劑Oralquick50用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周

將樣本轉(zhuǎn)入小瓶中攪動唾液檢測試劑Oralquick51用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣用采樣盤沿上/下牙床外表插入檢測設(shè)備

20分鐘后讀取結(jié)果

無效陰性陽性52插入檢測設(shè)備20分鐘后讀取結(jié)果無效陰性陽性52優(yōu)點(diǎn):簡單、易操作、反應(yīng)時間短適用于吸毒人群缺點(diǎn)：價格高影響因素多（口腔雜質(zhì)、反應(yīng)溫度等）53優(yōu)點(diǎn):534.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

（Chemiluminescenceimmunoassay）化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是將化學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測定技術(shù)。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。544.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

（Chemiluminescenc化學(xué)發(fā)光檢測使窗口期由43.6天縮短為38.3天，雖然只縮短了12.2%，但卻將殘余風(fēng)險降低了46.4%。數(shù)據(jù)來源:Residualriskoftransfusion-transmittedviralinfectionsinShenzhen,China,2001through2004方法學(xué)窗口期（天）殘余風(fēng)險ELISA43.61/17501CLIA38.31/32637可以降低殘余風(fēng)險55化學(xué)發(fā)光檢測使窗口期由43.6天縮短為38.3天，雖然只縮短評估本次評估使用隨機(jī)抽樣方式抽取已知血清標(biāo)本1556份，其中陽性標(biāo)本501份，陰性標(biāo)本為1055份?？泼罇|雅：靈敏度100%；特異度99.43%；準(zhǔn)確度99.61%。阿克蘇：靈敏度100%；特異度99.15%；準(zhǔn)確度99.42%結(jié)論：科美東雅CLIA試劑HIV抗體初篩結(jié)果與生物梅里埃（Ag+Ab）ELISA試劑比較有較高的靈敏度、特異性。統(tǒng)計(jì)分析表明：二者準(zhǔn)確度顯著性檢驗(yàn)無差異(u=0.7765，u＜1.96，P＞0.05)。將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。二次結(jié)果匯總統(tǒng)計(jì)：兩種試劑檢測結(jié)果一致，符合率為100%。56評估本次評估使用隨機(jī)抽樣方式抽取已知血清標(biāo)本1556份，其對臨床工作者來講，最常見的暴露源是血液。應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。統(tǒng)計(jì)分析表明：二者準(zhǔn)確度顯著性檢驗(yàn)無差異(u=0.預(yù)防性用藥應(yīng)在暴露后立即開始，一般在1h之內(nèi)服藥效果最好。梅毒抗體3次/年應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。二、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)3、計(jì)劃生育門診就診人群《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)15分鐘后讀結(jié)果，對結(jié)果的解釋不要超過1小時。一般在5-15min完成溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；科美東雅：靈敏度100%；食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定項(xiàng)目：5類573項(xiàng)1．加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。HIV-1新發(fā)感染血清學(xué)方法檢測美國已將用BED方法監(jiān)測新發(fā)感染率納入了國家艾滋病常規(guī)監(jiān)測體系，全美所有需要進(jìn)行新發(fā)感染檢測的樣品均寄至紐約州公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室，統(tǒng)一檢測，統(tǒng)一質(zhì)控，統(tǒng)一數(shù)據(jù)處理。2006年6月美國CDC發(fā)布了“資源有限國家BED檢測/監(jiān)測HIV-1新發(fā)感染指南”性病艾滋病預(yù)防控制中心于2004年將該方法引進(jìn)國內(nèi)。建立了適合于我國的BED方法的窗口期（168天）和4個關(guān)鍵校正系數(shù)（α=0.8098，β=0.7571，γ=0.9315，ε=0.0685）57對臨床工作者來講，最常見的暴露源是血液。HIV-1新發(fā)感染血原理其原理是根據(jù)HIV特異性IgG占總IgG抗體的比例隨著感染時間的延長而逐漸增高。應(yīng)用BED-CEIA進(jìn)行新近感染檢測只適用于HIV陽性樣品。由于個體間抗體生成的變異性，對個體而言，BED結(jié)果的預(yù)測值偏低，而且在個體水平上，BED檢測可能產(chǎn)生一定的假陽性和假陰性，但在人群水平上，假陽性的數(shù)目與假陰性的數(shù)目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。美國FDA將BED-CEIA歸為“只應(yīng)用于監(jiān)測目的，不能用于個體診斷和臨床”的實(shí)驗(yàn)方法。58原理其原理是根據(jù)HIV特異性IgG占總IgG抗體的比例隨著感5959建議：各實(shí)驗(yàn)室盡量多參加實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證（PT）工作！

國家級PT艾滋病抗體篩查和確證3次/年梅毒抗體3次/年乙肝表面抗原3次/年HCV抗體檢測3次/年WB條帶判讀3次/年BED2次/年CD4檢測2次/年耐藥檢測2次/年基因序列判讀1次/年濾紙片干血斑HIV-DNA1次/年省級PT篩查實(shí)驗(yàn)室1次/年篩查中心實(shí)驗(yàn)室2次/年60建議：各實(shí)驗(yàn)室盡量多參加實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證（PT）工作！

國家級三、職業(yè)暴露61三、職業(yè)暴露616262636364646565666667676868696970707171727273737474機(jī)構(gòu)分布2011年，26個省份（系統(tǒng)）報告有艾滋病防治工作人員發(fā)生職業(yè)暴露，總例數(shù)為1043（比2010年增加15.4%）765例暴露者及時服用了抗病毒藥物，并接受了咨詢與隨訪檢測，到目前為止未發(fā)現(xiàn)職業(yè)暴露后感染HIV的案例。75機(jī)構(gòu)分布2011年，26個省份（系統(tǒng)）報告有艾滋病防治工作人7676待驗(yàn)收艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室2個、確證實(shí)驗(yàn)室1個比ELISA法價格略高。由于個體間抗體生成的變異性，對個體而言，BED結(jié)果的預(yù)測值偏低，而且在個體水平上，BED檢測可能產(chǎn)生一定的假陽性和假陰性，但在人群水平上，假陽性的數(shù)目與假陰性的數(shù)目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。本次評估使用隨機(jī)抽樣方式抽取已知血清標(biāo)本1556份，其中陽性標(biāo)本501份，陰性標(biāo)本為1055份。2006年6月美國CDC發(fā)布了“資源有限國家BED檢測/監(jiān)測HIV-1新發(fā)感染指南”樣本：血漿/血清/全血（唾液）用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；艾防所通過項(xiàng)目：艾滋病抗體篩查、確證耐藥檢測2次/年31%，特異性為99.2、一般實(shí)驗(yàn)室均可操作四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/全血樣本中的HIV-1和HIV-2抗體，還可以檢測出p24抗原。建立了適合于我國的BED方法的窗口期（168天）和4個關(guān)鍵校正系數(shù)（α=0.艾滋病抗體篩查和確證3次/年（三）HCV(ELISA、RIBA)加入50uL樣品 加入50uL樣品免疫層析結(jié)果判讀記錄儀77待驗(yàn)收艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室2個、確證實(shí)驗(yàn)室1個77787879798080暴露源暴露于HIV的潛在污染源包括：血液、血性體液、精液、陰道分泌物、腦脊液、胸膜液、腹水、心包液、滑膜液、羊水和組織或病毒培養(yǎng)液。對HIV檢測實(shí)驗(yàn)室來講，最重要而常見的HIV來源是血液、含血液的各種體液和含有高滴度HIV的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物。對臨床工作者來講，最常見的暴露源是血液。暴露源暴露于HIV的潛在污染源包括：血液、血性體液、精液、陰82828383暴露后監(jiān)測與隨訪應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。

預(yù)防性用藥應(yīng)在暴露后立即開始，一般在1h之內(nèi)服藥效果最好。對于感染危險性很高的暴露者，即使間隔時間很長（比如1～2周），也應(yīng)考慮使用預(yù)防性治療；因?yàn)榧词共荒芊乐垢腥?，早期治療對HIV急性感染也有好處。由于服用4周AZT才有一定保護(hù)作用，如果無很大的副作用，預(yù)防性治療用藥時間應(yīng)持續(xù)4周。暴露后監(jiān)測與隨訪謝謝觀看！謝謝觀看！艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況目前我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室已達(dá)630個1個艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室（省疾控中心）6個艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂疾控中心、山東出入境檢驗(yàn)檢疫局國際旅行衛(wèi)生保健中心）18個艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室（含5個艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室）610個艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。

目前已驗(yàn)收16個待驗(yàn)收艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室2個、確證實(shí)驗(yàn)室1個87我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況目前我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室已達(dá)我省艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況1995年2月6日，山東省衛(wèi)生防疫站艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過衛(wèi)生部驗(yàn)收。2005年2月18日，青島市疾控中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收。2009年4月8日濟(jì)南、淄博、煙臺市疾控中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收。2013年4月1日臨沂疾控中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收。88我省艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況1995年2月6日，山東省衛(wèi)生防我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室

檢測能力省疾控中心：艾滋病抗體的篩查、確證；CD4淋巴細(xì)胞；病毒載量；耐藥；新發(fā)感染；嬰幼兒早期診斷、HBV、HCV、TP?？贵w確證：濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。CD4淋巴細(xì)胞：濟(jì)南、青島、煙臺、菏澤、泰安、濟(jì)寧、臨沂、濰坊市CDC艾滋病抗體篩查：610個實(shí)驗(yàn)室。89我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室

檢測能力省疾控中心：艾滋病抗體的篩查、省CDC實(shí)驗(yàn)室檢測能力2013年8月2～3日順利通過資質(zhì)認(rèn)定、食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定、實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可“三合一”現(xiàn)場評審.實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可項(xiàng)目：27類1313項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定（計(jì)量認(rèn)證）項(xiàng)目：22類740項(xiàng)食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定項(xiàng)目：5類573項(xiàng)艾防所通過項(xiàng)目：艾滋病抗體篩查、確證CD4T淋巴細(xì)胞檢測病毒載量乙肝、丙肝確證90省CDC實(shí)驗(yàn)室檢測能力2013年8月2～3日順利通過資質(zhì)認(rèn)定歷年篩查實(shí)驗(yàn)室考核情況91歷年篩查實(shí)驗(yàn)室考核情況6目標(biāo)1：確證實(shí)驗(yàn)室目前全部建在疾控系統(tǒng)目標(biāo)：2015年底，17市疾控全部建立，鼓勵醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)建立艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室。《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）92目標(biāo)1：確證實(shí)驗(yàn)室目前全部建在疾控系統(tǒng)7目標(biāo)2：艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)：2013年底，皮膚病性病防治機(jī)構(gòu)、婦幼保健機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)（單采漿站）及各類二級以上（含二級）醫(yī)療機(jī)構(gòu)要建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室?！渡綎|省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）93目標(biāo)2：艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室目標(biāo)：2013年底，皮膚病性病防治機(jī)目標(biāo)3：艾滋病檢測點(diǎn)1、目前全省尚未建立2、目標(biāo)：2015年底，所有的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和一級醫(yī)療機(jī)構(gòu)都建立艾滋病檢測點(diǎn)，鼓勵具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和一級醫(yī)療機(jī)構(gòu)建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室?！渡綎|省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾滋病檢測工作的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]28號（2013年5月9日下發(fā)）94目標(biāo)3：艾滋病檢測點(diǎn)1、目前全省尚未建立9目標(biāo)4：擴(kuò)大檢測1、腎透析人群2、醫(yī)院侵入性診療人群3、計(jì)劃生育門診就診人群4、單位體檢人群5、無償獻(xiàn)血人群

——五類人群全部進(jìn)行丙肝檢測《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于印發(fā)山東省艾滋病擴(kuò)大檢測工作活動方案的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]29號（2013年5月9日下發(fā)）95目標(biāo)4：擴(kuò)大檢測1、腎透析人群10二、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)（一）HIV(ELISA、金標(biāo)、PA、化學(xué)發(fā)光、WB)（二）TP(ELISA、TPPA、TRUST)（三）HCV(ELISA、RIBA)（四）BED（ELISA、親和力)96二、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)（一）HIV(ELISA、

20092006艾滋病檢測工作有關(guān)的技術(shù)規(guī)范和指南20062008201120112008

20049720092006艾滋病檢測工作有關(guān)的ELISA

98ELISA13OD值S/CO值雙波長的優(yōu)點(diǎn)CUTOFF值OD是opticaldensity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。S/CO=OD/CUTOFF使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。仔細(xì)閱讀和理解說明書,嚴(yán)格按照說明書要求操作99OD值仔細(xì)閱讀和理解說明書,嚴(yán)格按照說明書要求操作14常見問題原因分析及解決辦法(1)試劑1.觀察外包裝，內(nèi)主份有無漏液，注意效期等。2.仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。3.操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘，保證酶等液體的初始反應(yīng)溫度及活性劑的溶解。100常見問題原因分析及解決辦法(1)試劑15(2)加樣過程應(yīng)注意的問題1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。2.漏加樣品或加樣量不足的3.加液器的校正4.加樣時間過長5.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長6.洗板機(jī)不足，不能及時洗板101(2)加樣過程應(yīng)注意的問題1.血清或血將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。優(yōu)點(diǎn)：快速、簡便、易操作BED2次/年用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。我省艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)情況由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，造成洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差，直接影響本底。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；嬰幼兒早期診斷、HBV、HCV、TP。在短時間(30分鐘)內(nèi)出結(jié)果CD4T淋巴細(xì)胞檢測試劑必須在有效期內(nèi)使用；（三）HCV(ELISA、RIBA)快速檢測，不是為了取代實(shí)驗(yàn)室，但不能因?yàn)橛辛藢?shí)驗(yàn)室而放棄使用快速檢測。按說明步驟嚴(yán)格控制孵育時間。可檢測100份以內(nèi)小批量樣品2．讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。艾滋病抗體篩查和確證3次/年數(shù)據(jù)來源:Residualriskoftransfusion-transmittedviralinfectionsinShenzhen,China,2001through2004《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于印發(fā)山東省艾滋病擴(kuò)大檢測工作活動方案的通知》魯衛(wèi)疾控字[2013]29號（2013年5月9日下發(fā)）(3)孵育過程中出現(xiàn)的問題1.溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；2.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合，難以清洗徹底。3.孵育時溫度不符合說明書的規(guī)定范圍。1.按規(guī)定加蓋封板膜。2.按說明步驟嚴(yán)格控制孵育時間。3.嚴(yán)格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動酶免）的溫度，建議在儀器內(nèi)放置測量工具（全自動酶免除外）。（解決辦法）102將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅(4)洗板過程中易出現(xiàn)的問題1.采用手工洗板,孔與孔之間液體容易交叉，切不可隨意洗板。2.采用洗板機(jī)洗板時，洗液注入孔中量不足，導(dǎo)致洗板不徹底，造成本底高。3.由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，造成洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差，直接影響本底。4.反應(yīng)板過多，不能保證及時洗板，造成洗板等待時間過長，影響結(jié)果。5.洗板前先將孔內(nèi)液體甩出包被板。解決辦法1.禁止手工洗板。2.保證洗液注滿各孔。3.洗板時注意觀察是否有堵孔現(xiàn)象，保持洗板針暢通。4.合理安排操作（洗板）時間。5.洗板前不要先將孔內(nèi)液體甩出包被板，以免酶液沾于孔邊緣。103(4)洗板過程中易出現(xiàn)的問題1.采用手工洗板,孔與孔之間液體(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題1.顯色劑配制后放置時間過長或使用已經(jīng)變色失效的顯色劑2.用排槍加A、B混合液時，加樣槽不夠干凈，造成花板3.不同廠家試劑的顯色液混用104(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題1.顯色劑配制后放置時間過長或使(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)1．加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。2．讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。105(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)1．加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)1、價格低2、一般實(shí)驗(yàn)室均可操作3、不需特殊儀器設(shè)備4、適用于大面積查體缺點(diǎn)1、易出假陽性2、不適用于單個樣本測定106酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)21快速檢測法優(yōu)先使用項(xiàng)目包括: VCT、母嬰傳播、臨床評估、農(nóng)村血檢、術(shù)前檢測、緊急事件等。技術(shù)角度的考慮包括: 需要快速得到結(jié)果、免去試劑和樣本的冷鏈運(yùn)輸環(huán)節(jié)、小空間實(shí)驗(yàn)室的成本效益、檢測的簡單性等。107快速檢測法優(yōu)先使用項(xiàng)目包括:22快速檢測反應(yīng)模式免疫層析實(shí)驗(yàn)滲濾實(shí)驗(yàn)（間接法/雙抗原夾心法）108快速檢測反應(yīng)模式23免疫層析實(shí)驗(yàn)樣本：血漿/血清/全血（唾液）不同部位固定不同抗原可區(qū)分HIV-1/HIV-2,質(zhì)控線：抗人IgG一般需時15-30min弱陽性結(jié)果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體金標(biāo)HIV抗原顯色109免疫層析實(shí)驗(yàn)樣本：血漿/血清/全血（唾液）+Y+YHIV抗原

HIV?使用試驗(yàn)步驟將檢測條的外包裝撕去

血清和EDTA抗凝血漿

EDTA抗凝全血 加入50uL樣品

加入50uL樣品

過15分鐘讀結(jié)果

加1滴示蹤緩沖液

最多60分鐘(HIV)

過15分鐘讀結(jié)果最多60分鐘(HIV)

110HIV?使用試驗(yàn)步驟25結(jié)果解釋

陽性陰性

無效無效15分鐘后讀結(jié)果，對結(jié)果的解釋不要超過1小時。111結(jié)果解釋陽性陰性CD4T淋巴細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)需幾步：加樣本，加洗液，加信號試劑。一般在5-15min完成用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周反應(yīng)線的強(qiáng)度不一定與標(biāo)本中的抗體滴度相關(guān)。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。6.結(jié)果判讀不客觀，易受主觀因素影響抗體確證：濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖應(yīng)用BED-CEIA進(jìn)行新近感染檢測只適用于HIV陽性樣品。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；（三）HCV(ELISA、RIBA)簡單、易操作、反應(yīng)時間短610個艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室。艾滋病抗體篩查：610個實(shí)驗(yàn)室。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露快速檢測，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測方法。實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可項(xiàng)目：27類1313項(xiàng)檢測要注意問題DetermineHIV-1/2試驗(yàn)只能使用人類血清、血漿和全血，對其他標(biāo)本結(jié)果可能不準(zhǔn)確。反應(yīng)線的強(qiáng)度不一定與標(biāo)本中的抗體滴度相關(guān)。含EDTA以外抗凝劑的全血或血漿標(biāo)本給出的結(jié)果可能不正確。陰性結(jié)果應(yīng)當(dāng)與臨床癥狀和風(fēng)險因子一起考慮。陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實(shí)。結(jié)合臨床證據(jù)對結(jié)果做過評價后才能作出診斷。112CD4T淋巴細(xì)胞檢測檢測要注意問題DetermineHIV11328滲濾實(shí)驗(yàn)原理：雙抗原夾心法樣本:血漿/血清（若有過濾裝置，則可測全血）可將抗原固定于不同位置，區(qū)分HIV-1和HIV-2實(shí)驗(yàn)需幾步：加樣本，加洗液，加信號試劑。一般在5-15min完成弱陽性結(jié)果較難判斷+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體金標(biāo)HIV抗原顯色114滲濾實(shí)驗(yàn)原理：雙抗原夾心法+Y+YHIV抗原HIV特異性抗體免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖115免疫滲濾原理的產(chǎn)品構(gòu)造示意圖30結(jié)果116結(jié)果31優(yōu)點(diǎn)：快速、簡便、易操作

可檢測100份以內(nèi)小批量樣品需要很少的設(shè)備和試劑檢測地點(diǎn)可擴(kuò)展到實(shí)驗(yàn)室以外只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)大部分為一步法在短時間(30分鐘)內(nèi)出結(jié)果結(jié)果易目測判讀可在室溫下保存117優(yōu)點(diǎn)：快速、簡便、易操作

可檢測100份以內(nèi)小批量樣品32缺點(diǎn)不宜一次檢測100份以上的大批量樣品比ELISA法價格略高。結(jié)果判讀不客觀，易受主觀因素影響118缺點(diǎn)不宜一次檢測100份以上的大批量樣品33快速檢測試劑選擇1.必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；2.試劑必須在有效期內(nèi)使用；3.根據(jù)檢測目的，選擇試劑初篩選擇敏感性高的試劑，復(fù)檢選擇特異性高的試劑；4.推薦使用臨床評估質(zhì)量好并且近幾年連續(xù)考評結(jié)果穩(wěn)定的試劑。

119快速檢測試劑選擇1.必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批12035三代與四代比較（快速試劑）四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/全血樣本中的HIV-1和HIV-2抗體，還可以檢測出p24抗原。p24抗原是感染HIV病毒后產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，比HIV抗體出現(xiàn)的要早，在艾滋病感染初期、窗口期內(nèi)可以通過檢測p24抗原來判斷是否感染HIV。四代試劑比三代試劑平均提前5天可以檢測出HIV感染者。靈敏度為92.31%，特異性為99.66%。目前國內(nèi)尚未上市121三代與四代比較（快速試劑）四代試劑不僅可以檢測出血清/血漿/陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實(shí)?？泼罇|雅：靈敏度100%；用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)31%，特異性為99.2%，但卻將殘余風(fēng)險降低了46.抗體確證：濟(jì)南、青島、淄博、煙臺、臨沂市CDC（待建濰坊市CDC）。性病艾滋病預(yù)防控制中心于2004年將該方法引進(jìn)國內(nèi)。必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)的快速試劑；CD4檢測2次/年艾滋病抗體篩查和確證3次/年耐藥檢測2次/年2006年6月美國CDC發(fā)布了“資源有限國家BED檢測/監(jiān)測HIV-1新發(fā)感染指南”暴露于HIV的潛在污染源包括：血液、血性體液、精液、陰道分泌物、腦脊液、胸膜液、腹水、心包液、滑膜液、羊水和組織或病毒培養(yǎng)液。(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題濾紙片干血斑HIV-DNA1次/年阿克蘇：靈敏度100%；將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。BED2次/年二次結(jié)果匯總統(tǒng)計(jì)：兩種試劑檢測結(jié)果一致，符合率為100%。復(fù)核試驗(yàn)方法選擇替代組合WB檢測結(jié)果陽性一致率（%）＋－±EIA1+RT1＋35100100EIA1+RT2＋34900100RT1+EIA1＋35100100RT1+EIA2＋33800100RT1+RT2＋3575098.5EIA1+EIA2＋3341099.7122陽性結(jié)果應(yīng)當(dāng)用第二種方法證實(shí)。復(fù)核試驗(yàn)方法選擇替代組合WB檢免疫層析結(jié)果判讀記錄儀123免疫層析結(jié)果判讀記錄儀3812439自動生成報告125自動生成報告40結(jié)果導(dǎo)出Excel126結(jié)果導(dǎo)出Excel4112742免疫層析結(jié)果判讀記錄儀優(yōu)點(diǎn)：1.檢測結(jié)果的保存2.自動生成報告3.結(jié)果可導(dǎo)出缺點(diǎn)：1.不適合批量操作128免疫層析結(jié)果判讀記錄儀優(yōu)點(diǎn)：43快速檢測，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測方法?？焖贆z測，是為了更多、更快的的發(fā)現(xiàn)感染者?？焖贆z測，不是為了取代實(shí)驗(yàn)室，但不能因?yàn)橛辛藢?shí)驗(yàn)室而放棄使用快速檢測。129快速檢測，是艾滋病實(shí)驗(yàn)室多了一種檢測方法。44明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）將提純后的HIV抗原連接到有色明膠顆粒上，制成致敏顆粒。當(dāng)加入的檢測標(biāo)本中有HIV抗體存在時，即可使致敏顆粒凝集，出現(xiàn)肉眼可見的淺色凝集環(huán)（斑）；而若標(biāo)本中無HIV抗體，致敏顆粒即在重力作用下沉人U型板底，形成一個深色紅點(diǎn)。130明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）將提純后的HIV抗原連接到有色明膠顆1、加入樣品稀釋液孔號75μl25μl25μl13212、加入測試樣品25μl孔號1321棄去3、樣品倍比稀釋孔號1321最終稀釋倍數(shù)1：1625μl25μl25μl1：81311、加入樣品稀釋液孔號75μl25μl25μl13212、加過15分鐘讀結(jié)果應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。建立了適合于我國的BED方法的窗口期（168天）和4個關(guān)鍵校正系數(shù)（α=0.科美東雅：靈敏度100%；2009艾滋病抗體篩查：610個實(shí)驗(yàn)室。2．讀板時板底如果不清潔，就會導(dǎo)致所讀的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)板的底部是清潔的。BED2次/年(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題DetermineHIV-1/2試驗(yàn)只能使用人類血清、血漿和全血，對其他標(biāo)本結(jié)果可能不準(zhǔn)確。（三）HCV(ELISA、RIBA)濾紙片干血斑HIV-DNA1次/年溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；而若標(biāo)本中無HIV抗體，致敏顆粒即在重力作用下沉人U型板底，形成一個深色紅點(diǎn)。目標(biāo)：2015年底，17市疾控全部建立，鼓勵醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)建立艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室。美國已將用BED方法監(jiān)測新發(fā)感染率納入了國家艾滋病常規(guī)監(jiān)測體系，全美所有需要進(jìn)行新發(fā)感染檢測的樣品均寄至紐約州公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室，統(tǒng)一檢測，統(tǒng)一質(zhì)控，統(tǒng)一數(shù)據(jù)處理。對臨床工作者來講，最常見的暴露源是血液。手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及職業(yè)暴露應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。5、混勻，加蓋，室溫2個小時6、結(jié)果判讀致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號13211：32未致敏顆粒25μl25μl1：16132過15分鐘讀結(jié)果5、混勻，加蓋，室溫2個小時6、結(jié)果判讀致敏13348優(yōu)點(diǎn)：凝集試驗(yàn)具有操作簡便，經(jīng)一步即可迅速得出結(jié)果，不需任何儀器等優(yōu)點(diǎn)該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近不需特殊儀器該方法的敏感性及特異性與EL1SA方法相近溶血標(biāo)本不影響結(jié)果缺點(diǎn)與不足：判定結(jié)果用肉眼觀察，無法保存。為了保存試驗(yàn)結(jié)果，需配備數(shù)碼相機(jī)。應(yīng)選用高質(zhì)量的U型板134優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)與不足：49唾液檢測試劑Oralquick135唾液檢測試劑Oralquick50用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周

將樣本轉(zhuǎn)入小瓶中攪動唾液檢測試劑Oralquick136用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣用采樣盤沿上/下牙床外表插入檢測設(shè)備

20分鐘后讀取結(jié)果

無效陰性陽性137插入檢測設(shè)備20分鐘后讀取結(jié)果無效陰性陽性52優(yōu)點(diǎn):簡單、易操作、反應(yīng)時間短適用于吸毒人群缺點(diǎn)：價格高影響因素多（口腔雜質(zhì)、反應(yīng)溫度等）138優(yōu)點(diǎn):534.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

（Chemiluminescenceimmunoassay）化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是將化學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測定技術(shù)。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣，快速、簡便，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等。1394.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

（Chemiluminescenc化學(xué)發(fā)光檢測使窗口期由43.6天縮短為38.3天，雖然只縮短了12.2%，但卻將殘余風(fēng)險降低了46.4%。數(shù)據(jù)來源:Residualriskoftransfusion-transmittedviralinfectionsinShenzhen,China,2001through2004方法學(xué)窗口期（天）殘余風(fēng)險ELISA43.61/17501CLIA38.31/32637可以降低殘余風(fēng)險140化學(xué)發(fā)光檢測使窗口期由43.6天縮短為38.3天，雖然只縮短評估本次評估使用隨機(jī)抽樣方式抽取已知血清標(biāo)本1556份，其中陽性標(biāo)本501份，陰性標(biāo)本為1055份。科美東雅：靈敏度100%；特異度99.43%；準(zhǔn)確度99.61%。阿克蘇：靈敏度100%；特異度99.15%；準(zhǔn)確度99.42%結(jié)論：科美東雅CLIA試劑HIV抗體初篩結(jié)果與生物梅里埃（Ag+Ab）ELISA試劑比較有較高的靈敏度、特異性。統(tǒng)計(jì)分析表明：二者準(zhǔn)確度顯著性檢驗(yàn)無差異(u=0.7765，u＜1.96，P＞0.05)。將第一次兩種試劑檢出的15份假陽性標(biāo)本（科美東雅6份，生物梅里埃9份），分別進(jìn)行重復(fù)檢測，結(jié)果均陰性。二次結(jié)果匯總統(tǒng)計(jì)：兩種試劑檢測結(jié)果一致，符合率為100%。141評估本次評估使用隨機(jī)抽樣方式抽取已知血清標(biāo)本1556份，其對臨床工作者來講，最常見的暴露源是血液。應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。統(tǒng)計(jì)分析表明：二者準(zhǔn)確度顯著性檢驗(yàn)無差異(u=0.預(yù)防性用藥應(yīng)在暴露后立即開始，一般在1h之內(nèi)服藥效果最好。梅毒抗體3次/年應(yīng)在暴露當(dāng)日、暴露后4周、8周、12周、6個月，定期抽血檢測HIV抗體，有條件時，可以采用核酸檢測和病毒分離等進(jìn)行早期診斷。二、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)(6)終止和讀數(shù)時的注意事項(xiàng)只需對技術(shù)人員做適當(dāng)培訓(xùn)3、計(jì)劃生育門診就診人群《山東省衛(wèi)生廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)全省艾