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文檔簡介
實驗一第一部分坐骨神經腓腸肌標本的制備1a1a目的和原理蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處,而且其離體組織的生活條件比較簡單,易于控制和掌握,來源也較豐富,由此在生理學實驗,尤其是細胞生理學的某些實驗中,常用蛙或蟾蜍的坐骨神經腓腸肌標本來觀察神經肌肉的興奮性、刺激與反應的規(guī)律及肌肉收縮的特點等。制備具有正常興奮收縮功能的蛙類坐骨神經腓腸肌標本是生理學實驗的基本操作技術之一。2a目的和原理蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似材料蟾蜍或蛙;蛙板、探針、粗剪刀、細剪刀、尖鑷子、玻璃分針、大頭針、培養(yǎng)皿、滴管、瓷碗、鋅銅弓或鋁銀電極、任氏液。3a材料蟾蜍或蛙;蛙板、探針、粗剪刀、細剪刀、尖鑷子、玻璃分針、步驟1、毀腦脊髓
取蟾蜍一只,用左手握住,以示指壓其頭部前端使其盡量前俯,右手持探針自枕骨大孔處垂直刺入,到達椎管,即將探針改變方向刺入顱腔,向各側不斷攪動,徹底搗毀腦組織;再將探針原路退出,刺向尾側,捻動探針使逐漸刺入整個椎管內,搗毀脊髓。此時蟾蜍下頜呼吸運動應消失,四肢松軟,即成為一毀腦脊髓的蟾蜍(pithedtoad)。否則須按上法再行搗毀。4a步驟4a5a5a2.剪除軀干上部及內臟用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍脊柱,右手將粗剪刀沿兩側(避開坐骨神經)剪開腹壁。此時軀干上部及內臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內臟組織,棄于瓷碗內。6a2.剪除軀干上部及內臟用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握7a7a8a8a9a9a3.剝皮避開神經,用左手持圓頭鑷子夾住脊柱,右手捏住皮膚邊緣,逐步向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時,如阻力較大,可先剝下一側,再剝另一側。將全部皮膚剝除后,將標本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。10a3.剝皮避開神經,用左手持圓頭鑷子夾住脊柱,右手捏住皮膚11a11a4、分離兩腿:避開坐骨神經,用粗剪刀從背側剪去骶骨,然后沿中線將脊柱剪成左右兩半,再從恥骨聯合中央剪開(為保證兩側坐骨神經完整,應避免剪時偏向一側)。將已分離的標本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。12a4、分離兩腿:避開坐骨神經,用粗剪刀從背側剪去骶骨,然后沿中13a13a14a14a5、游離坐骨神經:取腿一條,先用玻璃分針沿脊柱側游離坐骨神經腹腔部,然后用大頭針將標本背位固定于干凈蛙板上。再用玻璃分針循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經溝,縱向分離暴露坐骨神經之大腿部分,直至分離至腘窩脛神經分叉處。然后剪斷股二頭肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱,并繞至前方剪斷股四頭肌腱。自上向下剪斷所有坐骨神經分支。將連著3~4節(jié)椎骨的坐骨神經分離出來。15a5、游離坐骨神經:取腿一條,先用玻璃分針沿脊柱側游離坐骨神經16a16a6、完成坐骨神經腓腸肌標本:將已游離的坐骨神經搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關節(jié)周圍向上剪除并刮凈所有大腿肌肉,在距膝關節(jié)約1cm處剪斷股骨。棄去上段股骨,保留部分即為坐骨神經腓腸肌標本17a6、完成坐骨神經腓腸肌標本:將已游離的坐骨神經搭在腓腸肌上。18a18a19a19a第二部分骨骼肌的單收縮與強直收縮20a第二部分20a一、實驗目的學習和掌握骨骼肌收縮的記錄方法觀察刺激強度與肌肉收縮反應的關系觀察骨骼肌的單收縮、收縮的總和以及強直收縮現象21a一、實驗目的學習和掌握骨骼肌收縮的記錄方法21a二、原理腓腸肌由許多肌纖維組成,刺激腓腸肌時,不同的刺激強度會引起肌肉的不同反應。當刺激強度過小時,肌肉不發(fā)生收縮反應,刺激為閾下刺激。而能引起肌肉發(fā)生收縮反應的最小刺激為閾刺激,刺激的強度稱為閾強度,當全部肌纖維同時收縮時,出現最大的收縮反應,引起最大收縮反應的最小刺激強度稱為最適刺激強度。肌肉組織對于一個閾上強度的刺激發(fā)生一次迅速的收縮反應,稱為單收縮。單收縮的過程可分三個時期:潛伏期、縮短期和舒張期。兩個同等強度的閾上刺激,相繼作用于神經肌肉標本,如果刺激間隔小于單收縮的時程,則出現兩個收縮反應的重疊,稱為收縮的總和。強直收縮:不完全強直收縮;完全強直收縮。22a二、原理腓腸肌由許多肌纖維組成,刺激腓腸肌時,不同的刺激強度23a23aabcd蟾蜍坐骨神經腓腸肌單收縮曲線24aabcd蟾蜍坐骨神經腓腸肌單收縮曲線24a25a25a三、試劑與器材蛙、計算機、生物信號處理系統(tǒng)、解剖針、手術剪、圓頭手術鑷、尖頭手術鑷、玻璃分針、蛙板、肌槽、連接導線、張力換能器、刺激輸出線、任氏液、棉線、培養(yǎng)皿。26a三、試劑與器材蛙、計算機、生物信號處理系統(tǒng)、解剖針、手術剪、27a27a肌槽張力換能器28a肌槽張力換能器28a1、剝制有活性的坐骨神經-腓腸肌標本(在任氏液中浸泡十分鐘左右,使其興奮性較穩(wěn)定)。2、連接實驗裝置
將張力換能器和肌槽固定在鐵支架上,肌肉標本的股骨固定于肌槽側面的小孔中,腓腸肌跟腱的結扎線連于張力換能器的受力片上,連線應松緊適宜,并與桌面垂直,張力換能器的輸入端與第四通道相連四、實驗內容(步驟)29a1、剝制有活性的坐骨神經-腓腸肌標本四、實驗內容(步驟)23、調節(jié)刺激器,改變刺激強度(從弱到強),觀察刺激強度變化對肌肉收縮的影響四、實驗內容(步驟)30a3、調節(jié)刺激器,改變刺激強度(從弱到強),觀察刺激強度變化對四、實驗內容(步驟)4、單收縮的分析電極直接刺激腓腸肌,測量單收縮的3個時程:潛伏期、收縮期和舒張期刺激參數不變,刺激坐骨神經,再測量單收縮的三個時程31a四、實驗內容(步驟)4、單收縮的分析31a四、實驗內容(續(xù))5、復合收縮的分析刺激強度不變,調整刺激頻率,記錄不完全強直收縮曲線。逐漸增大刺激頻率,記錄腓腸肌的完全強直收縮曲線。32a四、實驗內容(續(xù))5、復合收縮的分析32a五、注意事項標本制備時要注意保持標本的濕潤標本制備時盡量避免使用尖銳的器械,以免損傷神經、肌肉使用電刺激時,刺激強度不宜太大,否則可能導致神經的損傷實驗中保持換能器與標本連線的張力不變標本未給刺激即出現攣縮,是由于漏電引起,請檢查連接每兩次剌激之間要讓標本休息30秒,連續(xù)刺激不可超過5s。并用任氏液濕潤標本,以保持良好興奮性。33a五、注意事項標本制備時要注意保持標本的濕潤33a1、隨著刺激強度的增加,肌肉的收縮曲線出現什么變化,繪出該變化的曲線,并在相應部位標出對應的刺激強度的大小,其中必須標出閾刺激強度、最適刺激強度的大小,最后再分析肌肉收縮曲線出現這些變化的原因。2、直接刺激腓腸肌與刺激神經的單收縮曲線有何不同,繪出各自的曲線并說明原因。六、結果分析(作業(yè))34a1、隨著刺激強度的增加,肌肉的收縮曲線出現什么變化,繪出該六、結果分析(作業(yè))3、觀察和記錄單收縮和復合收縮曲線(不完全強直和完全強直收縮)并對其特性進行分析(刺激神經或肌肉任選一種),測出復合收縮的臨界刺激頻率35a六、結果分析(作業(yè))3、觀察和記錄單收縮和復合收縮曲線(不完實驗一第一部分坐骨神經腓腸肌標本的制備36a1a目的和原理蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處,而且其離體組織的生活條件比較簡單,易于控制和掌握,來源也較豐富,由此在生理學實驗,尤其是細胞生理學的某些實驗中,常用蛙或蟾蜍的坐骨神經腓腸肌標本來觀察神經肌肉的興奮性、刺激與反應的規(guī)律及肌肉收縮的特點等。制備具有正常興奮收縮功能的蛙類坐骨神經腓腸肌標本是生理學實驗的基本操作技術之一。37a目的和原理蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似材料蟾蜍或蛙;蛙板、探針、粗剪刀、細剪刀、尖鑷子、玻璃分針、大頭針、培養(yǎng)皿、滴管、瓷碗、鋅銅弓或鋁銀電極、任氏液。38a材料蟾蜍或蛙;蛙板、探針、粗剪刀、細剪刀、尖鑷子、玻璃分針、步驟1、毀腦脊髓
取蟾蜍一只,用左手握住,以示指壓其頭部前端使其盡量前俯,右手持探針自枕骨大孔處垂直刺入,到達椎管,即將探針改變方向刺入顱腔,向各側不斷攪動,徹底搗毀腦組織;再將探針原路退出,刺向尾側,捻動探針使逐漸刺入整個椎管內,搗毀脊髓。此時蟾蜍下頜呼吸運動應消失,四肢松軟,即成為一毀腦脊髓的蟾蜍(pithedtoad)。否則須按上法再行搗毀。39a步驟4a40a5a2.剪除軀干上部及內臟用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍脊柱,右手將粗剪刀沿兩側(避開坐骨神經)剪開腹壁。此時軀干上部及內臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內臟組織,棄于瓷碗內。41a2.剪除軀干上部及內臟用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握42a7a43a8a44a9a3.剝皮避開神經,用左手持圓頭鑷子夾住脊柱,右手捏住皮膚邊緣,逐步向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時,如阻力較大,可先剝下一側,再剝另一側。將全部皮膚剝除后,將標本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。45a3.剝皮避開神經,用左手持圓頭鑷子夾住脊柱,右手捏住皮膚46a11a4、分離兩腿:避開坐骨神經,用粗剪刀從背側剪去骶骨,然后沿中線將脊柱剪成左右兩半,再從恥骨聯合中央剪開(為保證兩側坐骨神經完整,應避免剪時偏向一側)。將已分離的標本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。47a4、分離兩腿:避開坐骨神經,用粗剪刀從背側剪去骶骨,然后沿中48a13a49a14a5、游離坐骨神經:取腿一條,先用玻璃分針沿脊柱側游離坐骨神經腹腔部,然后用大頭針將標本背位固定于干凈蛙板上。再用玻璃分針循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經溝,縱向分離暴露坐骨神經之大腿部分,直至分離至腘窩脛神經分叉處。然后剪斷股二頭肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱,并繞至前方剪斷股四頭肌腱。自上向下剪斷所有坐骨神經分支。將連著3~4節(jié)椎骨的坐骨神經分離出來。50a5、游離坐骨神經:取腿一條,先用玻璃分針沿脊柱側游離坐骨神經51a16a6、完成坐骨神經腓腸肌標本:將已游離的坐骨神經搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關節(jié)周圍向上剪除并刮凈所有大腿肌肉,在距膝關節(jié)約1cm處剪斷股骨。棄去上段股骨,保留部分即為坐骨神經腓腸肌標本52a6、完成坐骨神經腓腸肌標本:將已游離的坐骨神經搭在腓腸肌上。53a18a54a19a第二部分骨骼肌的單收縮與強直收縮55a第二部分20a一、實驗目的學習和掌握骨骼肌收縮的記錄方法觀察刺激強度與肌肉收縮反應的關系觀察骨骼肌的單收縮、收縮的總和以及強直收縮現象56a一、實驗目的學習和掌握骨骼肌收縮的記錄方法21a二、原理腓腸肌由許多肌纖維組成,刺激腓腸肌時,不同的刺激強度會引起肌肉的不同反應。當刺激強度過小時,肌肉不發(fā)生收縮反應,刺激為閾下刺激。而能引起肌肉發(fā)生收縮反應的最小刺激為閾刺激,刺激的強度稱為閾強度,當全部肌纖維同時收縮時,出現最大的收縮反應,引起最大收縮反應的最小刺激強度稱為最適刺激強度。肌肉組織對于一個閾上強度的刺激發(fā)生一次迅速的收縮反應,稱為單收縮。單收縮的過程可分三個時期:潛伏期、縮短期和舒張期。兩個同等強度的閾上刺激,相繼作用于神經肌肉標本,如果刺激間隔小于單收縮的時程,則出現兩個收縮反應的重疊,稱為收縮的總和。強直收縮:不完全強直收縮;完全強直收縮。57a二、原理腓腸肌由許多肌纖維組成,刺激腓腸肌時,不同的刺激強度58a23aabcd蟾蜍坐骨神經腓腸肌單收縮曲線59aabcd蟾蜍坐骨神經腓腸肌單收縮曲線24a60a25a三、試劑與器材蛙、計算機、生物信號處理系統(tǒng)、解剖針、手術剪、圓頭手術鑷、尖頭手術鑷、玻璃分針、蛙板、肌槽、連接導線、張力換能器、刺激輸出線、任氏液、棉線、培養(yǎng)皿。61a三、試劑與器材蛙、計算機、生物信號處理系統(tǒng)、解剖針、手術剪、62a27a肌槽張力換能器63a肌槽張力換能器28a1、剝制有活性的坐骨神經-腓腸肌標本(在任氏液中浸泡十分鐘左右,使其興奮性較穩(wěn)定)。2、連接實驗裝置
將張力換能器和肌槽固定在鐵支架上,肌肉標本的股骨固定于肌槽側面的小孔中,腓腸肌跟腱的結扎線連于張力換能器的受力片上,連線應松緊適宜,并與桌面垂直,張力換能器的輸入端與第四通道相連四、實驗內容(步驟)64a1、剝制有活性的坐骨神經-腓腸肌標本四、實驗內容(步驟)23、調節(jié)刺激器,改變刺激強度(從弱到強),觀察刺激強度變化對肌肉收縮的影響四、實驗內容(步驟)65a3、調節(jié)刺激器,改變刺激強度(從弱到強),觀察刺激強度變化對四、實驗內容(步驟)4、單收縮的分析電極直接刺激腓腸肌,測量單收縮的3個時程:潛伏期、收縮期和舒張期刺激參數不變,刺激坐骨神經,再測量單收縮的三個時程66a四、實驗內容(步驟)4、單收縮的分析31a四、實驗內
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