常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗和效力檢驗課件

常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

和效力檢驗常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

和效力檢驗1常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

安全檢驗技術依據(jù)及原理安全檢驗的內容常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗的方法安全檢驗的判定原則安全檢驗注意事項常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

安全檢驗技術依據(jù)及原理2安全檢驗技術依據(jù)及原理

對人、畜環(huán)境安全是對各類獸用生物制品最基本的要求，獸用生物制品質量標準規(guī)定：對于預防、治療等用途的不同類型的獸用生物制品必須進行安全檢驗。在根據(jù)獸用生物制品研究報告所制定的生物制品標準中，用一定的劑量和合適的途徑接種實驗動物（家兔、小鼠、豚鼠等）、雞胚或靶動物（牛、牦牛、山羊、綿羊、馬、犬、豬、雞、鴨、鵝等），經(jīng)過一定的觀察期，通過對被接種動物（或雞胚）局部或全身的評價，可以反映被接種產(chǎn)品的安全性。安全檢驗技術依據(jù)及原理

對人、畜環(huán)境安全是對各類獸用生物制品3安全檢驗的內容檢驗外源性病原污染：如致病性細菌污染或非致病性細菌數(shù)量過多（代謝產(chǎn)物影響安全）；外源病毒或支原體污染；活疫苗細胞培養(yǎng)時帶毒或培養(yǎng)用犢牛血清有其他病毒；原材料、環(huán)境及生產(chǎn)過程各個環(huán)節(jié)污染。檢查病毒滅活情況：對滅活疫苗而言。檢查殘余毒力或毒性物質：主要對活疫苗而言。殘余毒力指生產(chǎn)制品的菌毒株本身是活的減毒株或弱毒株，允許有輕微毒力的存在，能在接種的機體內表現(xiàn)出來。按制品的不同，這種殘余毒力的大小有不同的指標要求，測定和檢驗的方法也不同。

檢查對胚胎的毒性：如國外豬瘟的某些弱毒株，可通過孕豬的胎盤屏障傳給胚胎造成死胎、胎兒畸形或出生后發(fā)育不良等。如歐洲藥典明確規(guī)定豬瘟病毒應經(jīng)過對胚胎毒性的檢查。安全檢驗的內容檢驗外源性病原污染：如致病性細菌污染或非致病性4安全檢驗的方法△成品的安全檢驗方法主要是動物檢驗。根據(jù)產(chǎn)品的特點選用一定數(shù)目的規(guī)定動物（或雞胚），按指定的接種途徑接種活疫苗，不能出現(xiàn)規(guī)定條件之外的不良反應和異常。⊕動物的要求：敏感（一般無母源抗體）、健康、一定的品種、大小。⊕安檢劑量應大于使用劑量。一般說來，活毒疫苗的安檢用劑量是使用劑量的10倍，滅活疫苗的安檢用劑量是使用劑量的2倍。⊕凡能以小動物作出正確判斷者，則多用實驗小動物（材料易得，費用較低）?！鞑《绢惍a(chǎn)品的安全檢驗方法主要有四種類型：1、用本動物進行安全檢驗2、用本動物或實驗動物（或雞胚）任選其一進行安全檢驗3、只用實驗動物進行安全檢驗4、用本動物和實驗動物同時進行安全檢驗安全檢驗的方法△成品的安全檢驗方法主要是動物檢驗。根據(jù)產(chǎn)品的5安全檢驗四種類型的主要產(chǎn)品用本動物進行安全檢驗（18種）：雞新城疫滅活疫苗、雞產(chǎn)蛋下降綜合征滅活疫苗、雞傳染性鼻炎和雞新城疫二聯(lián)滅活疫苗、兔出血癥滅活疫苗、雞痘活疫苗（Ⅰ）、雞痘活疫苗（Ⅱ）、雞傳染性支氣管炎活疫苗（H120、H52）、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞傳染性法氏囊中等毒力株活疫苗（B87）、鴨溫活疫苗、小鵝瘟活疫苗、雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、豬瘟活疫苗（Ⅱ）、偽狂犬活疫苗、山羊痘活疫苗、綿羊痘活疫苗。本動物或實驗動物（或雞胚）任選其一的安全檢驗（3種）：雞馬立克氏病活疫苗、雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗。只用實驗動物進行的安全檢驗（3種）：牛瘟活疫苗（Ⅰ）、牛瘟活疫苗（Ⅱ）、偽狂犬滅活疫苗。用本動物和實驗動物同時進行的安全檢驗（6種）：?？谔阋逴型滅活疫苗、口蹄疫O、A型活疫苗、馬傳染性貧血活疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗、豬瘟活疫苗（Ⅰ）、豬瘟、豬丹毒和豬肺疫三聯(lián)活疫苗。安全檢驗四種類型的主要產(chǎn)品用本動物進行安全檢驗（18種）：雞6安全檢驗方法舉例用本動物進行安全檢驗：兔病毒性出血癥滅活疫苗的安全檢驗：用體重1.5—3kg家兔4只，每只皮下注射4ml，觀察7日，應全部健活。本動物或實驗動物（或雞胚）任選其一的安全檢驗：馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗的安全檢驗，下列方法任擇其一：1、用雞檢：選用1-3日齡易感雛雞或SPF雛雞20只，其中10只各肌肉或皮下注射疫苗0.2ml（含10個使用劑量），觀察14日，對照組至少存活8只，免疫組非特異死亡數(shù)不超過對照組，判疫苗合格。2、用雞胚檢：用10日齡易感雞胚或SPF雞胚10只，每胚尿囊腔接種疫苗0.1ml（含10個使用劑量），接種后24-68小時內雞胚非特異死亡不超過20%，死亡雞胚尿囊液對雞紅細胞凝集試驗應為陰性，120小時收集活胚尿囊液混合，對雞紅細胞凝集試驗應為陰性。只用實驗動物進行的安全檢驗：牛瘟活疫苗(Ⅱ)的安全檢驗:按瓶簽注明頭份，用生理鹽水稀釋為1ml含1個使用劑量，皮下注射小白鼠5只，每只0.2ml；肌肉注射豚鼠2只，每只1ml。觀察10日，均應健活。用本動物和實驗動物同時進行的安全檢驗：

1、用體重350-450g的豚鼠2只，每只皮下注射疫苗2ml；用體重18-22g的小白鼠5只，每只皮下注射疫苗0.5ml。連續(xù)觀察7日，均不得出現(xiàn)因注射疫苗引起的死亡或明顯的局部不良反應或全身反應。2、用至少6月齡的健康易感牛（細胞中和抗體滴度≤1：8，或乳鼠中和抗體滴度≤1：4）3頭，每頭舌背面皮內注射20個點，每點0.1ml疫苗，逐日觀察至少4日。之后，每頭牛按推薦的接種途徑接種3頭份疫苗，繼續(xù)逐日觀察6日。均不得出現(xiàn)口蹄疫癥狀或明顯的因注射疫苗引起的毒性反應。

安全檢驗方法舉例用本動物進行安全檢驗：兔病毒性出血癥滅活疫苗7安全檢驗的判定原則

安檢期間死亡的動物經(jīng)解剖明確非制品所致者可以重檢，如結果可疑難以判斷時，應以加倍頭數(shù)的該種動物重檢。凡規(guī)定用多種動物進行安檢的制品（如?？谔阋逴型滅活疫苗），每種動物均應安全合格。用小動物檢驗不合格者，有的規(guī)定可用使用對象動物重檢。但用使用對象動物檢驗不合格者，不能再以小動物重檢。

安全檢驗的判定原則安檢期間死亡的動物經(jīng)解剖明確非制品所致者8安全檢驗注意事項

1.為保證檢驗的公正性，避免在對安全檢驗結果判定的主觀影響，因此應由2名檢驗員共同進行。2.為防止污染，涉及疫苗稀釋等操作步驟，應當在無菌條件下進行。3.動物飼養(yǎng)環(huán)境要符合動物飼養(yǎng)和檢驗的要求，如果環(huán)境因素不穩(wěn)定，應當設置合適數(shù)量的同來源動物對照。4.檢驗過程要注意對實驗動物進行定時觀察，發(fā)病時要增加觀察次數(shù)，對死亡動物要及時進行解剖。安全檢驗注意事項

1.為保證檢驗的公正性，避免在對安全檢驗結9安全檢驗注意事項

5.安檢動物舍應當專用。并按強毒舍進行管理（如試驗結束后動物應按有關規(guī)定進行處理、動物舍和飼養(yǎng)器具應進行全面消毒。6.如果檢驗結果可疑，難以判斷時，應以加倍動物數(shù)量重新檢驗。7凡生產(chǎn)口蹄疫疫苗的生物制品企業(yè)，其生產(chǎn)的豬用活疫苗，均需用乳鼠進行安檢；凡使用豬瘟強毒或污染豬瘟強毒的生物制品企業(yè)，其生產(chǎn)的豬用活疫苗均用無豬瘟抗體的敏感豬進行安檢。（方法見規(guī)程2000版P20）安全檢驗注意事項5.安檢動物舍應當專用。并按強毒舍進行管理10安全檢驗注意事項

8.安全措施：（1）檢驗過程中應注意防止對檢驗人員和環(huán)境的污染，檢驗人員必須穿戴工作服、口罩及相關的安全防護器具，撒在操作臺、地面的產(chǎn)品要進行消毒處理。檢驗完畢后開封的產(chǎn)品均要進行高壓滅菌處理。（2）發(fā)病或死亡動物、糞便及其污染物必須嚴格按照“防止散毒”等相關規(guī)定處理。（3）懷孕或手部有外傷的檢驗人員禁止解剖死亡動物（4）在檢驗過程中發(fā)生烈性傳染病或人員意外時，必須迅速通知有關部門采取緊急措施。安全檢驗注意事項8.安全措施：（1）檢驗過程中應注意防止對11常見病毒性產(chǎn)品效力檢驗

效力檢驗的內容效力檢驗原理及方法效力檢驗應注意的問題常見病毒性產(chǎn)品效力檢驗12效力檢驗的內容

免疫原性：制備制品的毒種免疫原性應良好。制備疫苗的毒株必須要與流行株相對應，才能起到好的免疫效果。制品的免疫持續(xù)期：理想的制品應具有較長的免疫持續(xù)期，免疫持續(xù)期過短的制品應考慮增加免疫接種的次數(shù)?？乖姆€(wěn)定性：一般滅活苗的熱穩(wěn)定性較好，弱毒苗較差，但也可隨制品的種類而已?？乖康臏y定：活疫苗的效力取決于接種動物的毒量，即一定量病毒才能在體內增殖，促使機體產(chǎn)生免疫應答，若數(shù)量不夠，則達不到免疫效果。滅活苗同樣也需要一定的抗原量才有效。所以應測定制品的最小免疫量。但制品的抗原量并非越多越好，應適量，否則會出現(xiàn)副反應。效力檢驗的內容免疫原性：制備制品的毒種免疫原性應良好。制備13效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗1、攻毒保護試驗原理：使用疫苗進行接種的最終目的是使接種過的動物獲得抵抗強毒病原感染的能力。因此，對靶動物或已經(jīng)建立的實驗動物模型進行接種后，用強毒病原進行人工攻毒，根據(jù)動物的保護情況判斷疫苗的效力，是用以檢驗疫苗效力的最直觀方法。效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗1、攻毒保護試驗原理：使用疫苗14效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗2、攻毒保護試驗方法：按照疫苗的特點和使用對象選擇一定數(shù)目指定年齡（或體重）無特異性抗體的易感健康動物，按照規(guī)定的途徑和劑量給動物接種疫苗。除有特殊規(guī)定外，一般注苗3—4周后連同條件相同的對照動物用指定的強毒和毒量按要求進行攻毒。攻毒后在規(guī)定的時間內觀察動物的健康狀況，不應出現(xiàn)規(guī)定以外的不良反應和異常。效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗2、攻毒保護試驗方法：按照疫苗153、采用攻毒保護試驗方法的常見疫苗如下（17種）：雞新城疫滅活疫苗、雞傳染性鼻炎-雞新城疫二聯(lián)滅活疫苗、偽狂犬病滅活疫苗、兔病毒性出血癥滅活疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗、?？谔阋逴型滅活疫苗、豬瘟活疫苗(I)、豬瘟活疫苗（II）、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力株活疫苗、豬瘟、豬丹毒、豬多殺性巴氏桿菌三聯(lián)活疫苗、偽狂犬活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗、雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、鴨瘟活疫苗。

注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。3、采用攻毒保護試驗方法的常見疫苗如下（17種）：164、攻毒保護試驗效檢方法舉例?？谔阋逴型滅活疫苗效力檢驗：用至少6月齡的健康易感牛（細胞中和抗體滴度≤1：8，或乳鼠中和抗體滴度≤1：4）15頭，分為3組，每組5頭，將待檢疫苗分為1頭份、1/3頭份、1/9頭份3個劑量組，每一劑量組分別于頸部肌肉注射5頭牛。接種21天后，連同條件相同的對照牛2頭，每頭牛舌上表面兩側分兩點皮內注射牛口蹄疫O型病毒強毒，每點0.1ml（共0.2ml，含10000ID50）。連續(xù)觀察10日。對照牛應至少3蹄出現(xiàn)水泡或潰瘍。免疫牛僅在舌面出現(xiàn)水泡或潰瘍，而其他部位無病變時判為保護，除舌面以外任一部位出現(xiàn)典型口蹄疫水泡或潰瘍判為不保護。根據(jù)免疫牛的保護數(shù)，按Reed-Muench法計算被檢疫苗的PD50，每頭份疫苗應至少含3PD50。4、攻毒保護試驗效檢方法舉例?？谔阋逴型滅活疫苗效力檢驗：用17效力檢驗方法之二：病毒含量測定1、病毒含量測定原理：病毒含量的高低直接反映了產(chǎn)品的質量。因此用動物（雞胚、細胞培養(yǎng)物）接種測定病毒性活制品的病毒含量可作為評定效力高低的依據(jù)。效力檢驗方法之二：病毒含量測定1、病毒含量測定原理：病毒含量18效力檢驗方法之二：病毒含量測定2、病毒含量測定方法：每批疫苗按瓶簽注明的頭份用指定的稀釋液作適當稀釋后，通常選擇三個最佳稀釋液，按規(guī)定的途徑和劑量接種一定數(shù)目指定的實驗動物（細胞、雞胚），在規(guī)定的時間內觀察，根據(jù)動物（細胞、雞胚）對疫苗的反應情況來計算疫苗的LD5O（TCID50、ELD50、PD50、EID5O）或蝕班數(shù)（PFU），以此來判定疫苗的效力。效力檢驗方法之二：病毒含量測定2、病毒含量測定方法：每批疫苗193、病毒含量測定常見疫苗（12種）：口蹄疫O、A型活疫苗、山羊活疫苗、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力株活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗、雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、雞痘活疫苗（Ⅰ）、小鵝瘟活疫苗、雞馬立克氏病活疫苗、雞馬力克氏病火雞皰疹病毒活疫苗。注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。3、病毒含量測定常見疫苗（12種）：204、病毒含量測定效檢方法舉例口蹄疫O、A型活疫苗單價苗的效力檢驗：將疫苗用PBS做10倍系列稀釋，O型苗以10-5、10-6、10-7三個個稀釋度，A型苗以10-6、10-7、10-83個稀釋度，各皮下接種3—4日齡乳鼠4只，每只0.1ml，觀察4-5日，根據(jù)乳鼠發(fā)病死亡數(shù)計算LD50，每0.1mlO型苗≥105.5LD50，A型苗≥106.5LD50，判為合格。

山羊痘活疫苗效力檢驗方法之一：按瓶簽注明頭份，用生理鹽水稀釋測其毒價，每頭份病毒含量應≥103.5TCID50。4、病毒含量測定效檢方法舉例口蹄疫O、A型活疫苗單價苗的效力21效力檢驗方法之三：血清學試驗1、血清學試驗原理：根據(jù)相關血清學檢驗的原理，檢驗抗體水平和抗原活性，從而評定產(chǎn)品的效力。病毒性產(chǎn)品主要采用以下兩種：（1）抗體效價測定：動物體的免疫系統(tǒng)能夠對進入體內的外源物質進行吸收、加工處理和遞呈，使有關淋巴細胞活化并產(chǎn)生特異性抗體。在部分疾病的免疫防治中，以這種體液免疫機制為主，其特異性抗體水平與攻毒保護率之間有一定平行關系。在這種情況下，對本動物或已經(jīng)建立的實驗動物模型進行接種后，通過適宜的血清學試驗檢測動物的抗體水平，可以作為判斷疫苗效力高低的有效方法。效力檢驗方法之三：血清學試驗1、血清學試驗原理：根據(jù)相關血清22效力檢驗方法之三：血清學試驗2）中和試驗：病毒與適量抗體完全中和后，接種敏感動物或細胞，可不受侵害而獲得保護。如果用一定抗原分別與系列稀釋的抗體（血清）中和，可得到使50%動物或細胞獲得保護的最高血清稀釋度，即血清的中和效價進而評價某疫苗（抗原）的效價或試驗動物的相關抗體是否符合規(guī)定。2、血清學試驗方法：血清學相關方法，如紅細胞凝集抑制試驗、中和試驗、補體結合試驗等。效力檢驗方法之三：血清學試驗2）中和試驗：病毒與適量抗體完全233、血清學試驗常見疫苗抗體效價測定：主要有雞產(chǎn)蛋下降綜合征滅活疫苗（HI抗體測定）、馬傳染性貧血活疫苗（補體結合試驗和瓊脂擴散試驗）。中和試驗法：雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、小鵝瘟活疫苗、偽狂犬病滅活疫苗。注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。3、血清學試驗常見疫苗抗體效價測定：主要有雞產(chǎn)蛋下降綜合征244、血清學試驗效檢方法舉例雞產(chǎn)蛋下降綜合癥效力檢驗：用3-6周齡的健康易感雞（HI抗體≤1：4）10只，每只肌肉或皮下注射疫苗0.5ml,另取10只雞飼養(yǎng)不免疫；3-5周后采血，測定HI抗體，免疫雞HI抗體幾何平均滴度≥1：128，對照雞抗體HI抗體效價應≤1：4。小鵝瘟活疫苗效力檢驗方法之一；取健康成年鵝4只，分別采血1ml,分離血清并混合備用。然后注射1個使用劑量的疫苗，每只鵝1ml，21-28日后采血，分離血清混合，將接種疫苗前后的2次血清分別與小鵝瘟GD株在鴨胚中作中和試驗。兩次ELD50值之差≥2對數(shù)值為合格。4、血清學試驗效檢方法舉例雞產(chǎn)蛋下降綜合癥效力檢驗：用3-625其他效力檢驗方法熱型反應和發(fā)病觀察：某些疫苗以適當劑量及途徑接種實驗動物（本動物、雞胚）后，可產(chǎn)生典型的熱型反應或特征癥狀及病理變化，借以判定疫苗的效力。主要產(chǎn)品如下：山羊活疫苗、綿羊痘活疫苗、牛瘟活疫苗（Ⅰ）、牛瘟活疫苗（Ⅱ）、豬瘟活疫苗(I)、豬瘟活疫苗（II）、雞痘活疫苗（Ⅰ）、雞痘活疫苗（Ⅱ）。注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。其他效力檢驗方法熱型反應和發(fā)病觀察：某些疫苗以適當劑量及途徑26方法舉例：

牛瘟活疫苗效力檢驗：按瓶簽注明頭份，用生理鹽水稀釋為1ml含0.01個使用劑量，耳靜脈注射1.5-2kg家兔4只，每只1ml。應出現(xiàn)典型牛瘟兔化弱毒的臨床反應和病理變化。（癥狀：體溫升高，食欲減退，呼吸急迫，鼻分泌物增多，精神不佳，懷孕后期母兔，間或流產(chǎn)；感染后3-14日可有死亡，內臟可見明顯病理變化。山羊痘效力檢驗方法之一：用羊檢驗：按瓶簽按瓶簽注明頭份用生理鹽水稀釋成每0.5ml含2個使用劑量，胸腹部皮內接種山羊3只,每只2粒,每粒0.5ml,觀察15日。在接種后5-7日應至少有2只羊出現(xiàn)直徑為0.5—3cm微紅色或無色痘腫反應,持續(xù)4日以上,逐漸消退。發(fā)痘羊間或可有輕度體溫反應,但精神食欲應正常。方法舉例：27效力檢驗應注意的問題

1.在檢驗過程中，必須嚴格按照規(guī)定的檢驗程序進行操作，并進行記錄和判定。2.實驗動物（雞胚、細胞培養(yǎng)物）應符合實驗要求，其品種、體重應大致相同。外購動物必須經(jīng)過隔離飼養(yǎng)，觀察適當時間證明符合實驗動物標準后方可使用。實驗結束后應對動物進行無害化處理。3.凡注射強毒的動物，必須在固定隔離舍內飼養(yǎng)，強毒舌必須有嚴格的消毒設施，并由專人負責。同時動物實驗設施應符合國家有關規(guī)定。4.應按有關規(guī)定設立對照組（最好用標準品或參照品作對照）。對于活疫苗，實驗組和對照組應隔離飼養(yǎng)。效力檢驗應注意的問題

1.在檢驗過程中，必須嚴格按照規(guī)定的檢28效力檢驗應注意的問題5.效力檢驗的免疫動物，免疫途中有意外死亡或損失，如存活頭數(shù)仍能達到規(guī)定的保護頭數(shù)以上的，可以進行攻毒。攻毒后，如達到規(guī)定的保護頭數(shù)，可判為合格。6、效力攻擊強毒的，免疫動物與對照動物必須同時對照。強毒不應注射疫苗的同一部位。7、規(guī)定用一種小動物或使用防疫對象效檢的制品，可用小動物效檢2次，本動物效檢1次，如本動物檢驗不合格者，不再用小動物檢驗。8.必要的安全措施，防止人員感染和散毒。效力檢驗應注意的問題5.效力檢驗的免疫動物，免疫途中有意外死29謝謝謝謝30演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！31常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

和效力檢驗常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

和效力檢驗32常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

安全檢驗技術依據(jù)及原理安全檢驗的內容常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗的方法安全檢驗的判定原則安全檢驗注意事項常見病毒性產(chǎn)品安全檢驗

安全檢驗技術依據(jù)及原理33安全檢驗技術依據(jù)及原理

對人、畜環(huán)境安全是對各類獸用生物制品最基本的要求，獸用生物制品質量標準規(guī)定：對于預防、治療等用途的不同類型的獸用生物制品必須進行安全檢驗。在根據(jù)獸用生物制品研究報告所制定的生物制品標準中，用一定的劑量和合適的途徑接種實驗動物（家兔、小鼠、豚鼠等）、雞胚或靶動物（牛、牦牛、山羊、綿羊、馬、犬、豬、雞、鴨、鵝等），經(jīng)過一定的觀察期，通過對被接種動物（或雞胚）局部或全身的評價，可以反映被接種產(chǎn)品的安全性。安全檢驗技術依據(jù)及原理

對人、畜環(huán)境安全是對各類獸用生物制品34安全檢驗的內容檢驗外源性病原污染：如致病性細菌污染或非致病性細菌數(shù)量過多（代謝產(chǎn)物影響安全）；外源病毒或支原體污染；活疫苗細胞培養(yǎng)時帶毒或培養(yǎng)用犢牛血清有其他病毒；原材料、環(huán)境及生產(chǎn)過程各個環(huán)節(jié)污染。檢查病毒滅活情況：對滅活疫苗而言。檢查殘余毒力或毒性物質：主要對活疫苗而言。殘余毒力指生產(chǎn)制品的菌毒株本身是活的減毒株或弱毒株，允許有輕微毒力的存在，能在接種的機體內表現(xiàn)出來。按制品的不同，這種殘余毒力的大小有不同的指標要求，測定和檢驗的方法也不同。

檢查對胚胎的毒性：如國外豬瘟的某些弱毒株，可通過孕豬的胎盤屏障傳給胚胎造成死胎、胎兒畸形或出生后發(fā)育不良等。如歐洲藥典明確規(guī)定豬瘟病毒應經(jīng)過對胚胎毒性的檢查。安全檢驗的內容檢驗外源性病原污染：如致病性細菌污染或非致病性35安全檢驗的方法△成品的安全檢驗方法主要是動物檢驗。根據(jù)產(chǎn)品的特點選用一定數(shù)目的規(guī)定動物（或雞胚），按指定的接種途徑接種活疫苗，不能出現(xiàn)規(guī)定條件之外的不良反應和異常。⊕動物的要求：敏感（一般無母源抗體）、健康、一定的品種、大小。⊕安檢劑量應大于使用劑量。一般說來，活毒疫苗的安檢用劑量是使用劑量的10倍，滅活疫苗的安檢用劑量是使用劑量的2倍。⊕凡能以小動物作出正確判斷者，則多用實驗小動物（材料易得，費用較低）?！鞑《绢惍a(chǎn)品的安全檢驗方法主要有四種類型：1、用本動物進行安全檢驗2、用本動物或實驗動物（或雞胚）任選其一進行安全檢驗3、只用實驗動物進行安全檢驗4、用本動物和實驗動物同時進行安全檢驗安全檢驗的方法△成品的安全檢驗方法主要是動物檢驗。根據(jù)產(chǎn)品的36安全檢驗四種類型的主要產(chǎn)品用本動物進行安全檢驗（18種）：雞新城疫滅活疫苗、雞產(chǎn)蛋下降綜合征滅活疫苗、雞傳染性鼻炎和雞新城疫二聯(lián)滅活疫苗、兔出血癥滅活疫苗、雞痘活疫苗（Ⅰ）、雞痘活疫苗（Ⅱ）、雞傳染性支氣管炎活疫苗（H120、H52）、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞傳染性法氏囊中等毒力株活疫苗（B87）、鴨溫活疫苗、小鵝瘟活疫苗、雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、豬瘟活疫苗（Ⅱ）、偽狂犬活疫苗、山羊痘活疫苗、綿羊痘活疫苗。本動物或實驗動物（或雞胚）任選其一的安全檢驗（3種）：雞馬立克氏病活疫苗、雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗。只用實驗動物進行的安全檢驗（3種）：牛瘟活疫苗（Ⅰ）、牛瘟活疫苗（Ⅱ）、偽狂犬滅活疫苗。用本動物和實驗動物同時進行的安全檢驗（6種）：?？谔阋逴型滅活疫苗、口蹄疫O、A型活疫苗、馬傳染性貧血活疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗、豬瘟活疫苗（Ⅰ）、豬瘟、豬丹毒和豬肺疫三聯(lián)活疫苗。安全檢驗四種類型的主要產(chǎn)品用本動物進行安全檢驗（18種）：雞37安全檢驗方法舉例用本動物進行安全檢驗：兔病毒性出血癥滅活疫苗的安全檢驗：用體重1.5—3kg家兔4只，每只皮下注射4ml，觀察7日，應全部健活。本動物或實驗動物（或雞胚）任選其一的安全檢驗：馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗的安全檢驗，下列方法任擇其一：1、用雞檢：選用1-3日齡易感雛雞或SPF雛雞20只，其中10只各肌肉或皮下注射疫苗0.2ml（含10個使用劑量），觀察14日，對照組至少存活8只，免疫組非特異死亡數(shù)不超過對照組，判疫苗合格。2、用雞胚檢：用10日齡易感雞胚或SPF雞胚10只，每胚尿囊腔接種疫苗0.1ml（含10個使用劑量），接種后24-68小時內雞胚非特異死亡不超過20%，死亡雞胚尿囊液對雞紅細胞凝集試驗應為陰性，120小時收集活胚尿囊液混合，對雞紅細胞凝集試驗應為陰性。只用實驗動物進行的安全檢驗：牛瘟活疫苗(Ⅱ)的安全檢驗:按瓶簽注明頭份，用生理鹽水稀釋為1ml含1個使用劑量，皮下注射小白鼠5只，每只0.2ml；肌肉注射豚鼠2只，每只1ml。觀察10日，均應健活。用本動物和實驗動物同時進行的安全檢驗：

1、用體重350-450g的豚鼠2只，每只皮下注射疫苗2ml；用體重18-22g的小白鼠5只，每只皮下注射疫苗0.5ml。連續(xù)觀察7日，均不得出現(xiàn)因注射疫苗引起的死亡或明顯的局部不良反應或全身反應。2、用至少6月齡的健康易感牛（細胞中和抗體滴度≤1：8，或乳鼠中和抗體滴度≤1：4）3頭，每頭舌背面皮內注射20個點，每點0.1ml疫苗，逐日觀察至少4日。之后，每頭牛按推薦的接種途徑接種3頭份疫苗，繼續(xù)逐日觀察6日。均不得出現(xiàn)口蹄疫癥狀或明顯的因注射疫苗引起的毒性反應。

安全檢驗方法舉例用本動物進行安全檢驗：兔病毒性出血癥滅活疫苗38安全檢驗的判定原則

安檢期間死亡的動物經(jīng)解剖明確非制品所致者可以重檢，如結果可疑難以判斷時，應以加倍頭數(shù)的該種動物重檢。凡規(guī)定用多種動物進行安檢的制品（如牛口蹄疫O型滅活疫苗），每種動物均應安全合格。用小動物檢驗不合格者，有的規(guī)定可用使用對象動物重檢。但用使用對象動物檢驗不合格者，不能再以小動物重檢。

安全檢驗的判定原則安檢期間死亡的動物經(jīng)解剖明確非制品所致者39安全檢驗注意事項

1.為保證檢驗的公正性，避免在對安全檢驗結果判定的主觀影響，因此應由2名檢驗員共同進行。2.為防止污染，涉及疫苗稀釋等操作步驟，應當在無菌條件下進行。3.動物飼養(yǎng)環(huán)境要符合動物飼養(yǎng)和檢驗的要求，如果環(huán)境因素不穩(wěn)定，應當設置合適數(shù)量的同來源動物對照。4.檢驗過程要注意對實驗動物進行定時觀察，發(fā)病時要增加觀察次數(shù)，對死亡動物要及時進行解剖。安全檢驗注意事項

1.為保證檢驗的公正性，避免在對安全檢驗結40安全檢驗注意事項

5.安檢動物舍應當專用。并按強毒舍進行管理（如試驗結束后動物應按有關規(guī)定進行處理、動物舍和飼養(yǎng)器具應進行全面消毒。6.如果檢驗結果可疑，難以判斷時，應以加倍動物數(shù)量重新檢驗。7凡生產(chǎn)口蹄疫疫苗的生物制品企業(yè)，其生產(chǎn)的豬用活疫苗，均需用乳鼠進行安檢；凡使用豬瘟強毒或污染豬瘟強毒的生物制品企業(yè)，其生產(chǎn)的豬用活疫苗均用無豬瘟抗體的敏感豬進行安檢。（方法見規(guī)程2000版P20）安全檢驗注意事項5.安檢動物舍應當專用。并按強毒舍進行管理41安全檢驗注意事項

8.安全措施：（1）檢驗過程中應注意防止對檢驗人員和環(huán)境的污染，檢驗人員必須穿戴工作服、口罩及相關的安全防護器具，撒在操作臺、地面的產(chǎn)品要進行消毒處理。檢驗完畢后開封的產(chǎn)品均要進行高壓滅菌處理。（2）發(fā)病或死亡動物、糞便及其污染物必須嚴格按照“防止散毒”等相關規(guī)定處理。（3）懷孕或手部有外傷的檢驗人員禁止解剖死亡動物（4）在檢驗過程中發(fā)生烈性傳染病或人員意外時，必須迅速通知有關部門采取緊急措施。安全檢驗注意事項8.安全措施：（1）檢驗過程中應注意防止對42常見病毒性產(chǎn)品效力檢驗

效力檢驗的內容效力檢驗原理及方法效力檢驗應注意的問題常見病毒性產(chǎn)品效力檢驗43效力檢驗的內容

免疫原性：制備制品的毒種免疫原性應良好。制備疫苗的毒株必須要與流行株相對應，才能起到好的免疫效果。制品的免疫持續(xù)期：理想的制品應具有較長的免疫持續(xù)期，免疫持續(xù)期過短的制品應考慮增加免疫接種的次數(shù)?？乖姆€(wěn)定性：一般滅活苗的熱穩(wěn)定性較好，弱毒苗較差，但也可隨制品的種類而已?？乖康臏y定：活疫苗的效力取決于接種動物的毒量，即一定量病毒才能在體內增殖，促使機體產(chǎn)生免疫應答，若數(shù)量不夠，則達不到免疫效果。滅活苗同樣也需要一定的抗原量才有效。所以應測定制品的最小免疫量。但制品的抗原量并非越多越好，應適量，否則會出現(xiàn)副反應。效力檢驗的內容免疫原性：制備制品的毒種免疫原性應良好。制備44效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗1、攻毒保護試驗原理：使用疫苗進行接種的最終目的是使接種過的動物獲得抵抗強毒病原感染的能力。因此，對靶動物或已經(jīng)建立的實驗動物模型進行接種后，用強毒病原進行人工攻毒，根據(jù)動物的保護情況判斷疫苗的效力，是用以檢驗疫苗效力的最直觀方法。效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗1、攻毒保護試驗原理：使用疫苗45效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗2、攻毒保護試驗方法：按照疫苗的特點和使用對象選擇一定數(shù)目指定年齡（或體重）無特異性抗體的易感健康動物，按照規(guī)定的途徑和劑量給動物接種疫苗。除有特殊規(guī)定外，一般注苗3—4周后連同條件相同的對照動物用指定的強毒和毒量按要求進行攻毒。攻毒后在規(guī)定的時間內觀察動物的健康狀況，不應出現(xiàn)規(guī)定以外的不良反應和異常。效力檢驗方法之一：攻毒保護試驗2、攻毒保護試驗方法：按照疫苗463、采用攻毒保護試驗方法的常見疫苗如下（17種）：雞新城疫滅活疫苗、雞傳染性鼻炎-雞新城疫二聯(lián)滅活疫苗、偽狂犬病滅活疫苗、兔病毒性出血癥滅活疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗、?？谔阋逴型滅活疫苗、豬瘟活疫苗(I)、豬瘟活疫苗（II）、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力株活疫苗、豬瘟、豬丹毒、豬多殺性巴氏桿菌三聯(lián)活疫苗、偽狂犬活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗、雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、鴨瘟活疫苗。

注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。3、采用攻毒保護試驗方法的常見疫苗如下（17種）：474、攻毒保護試驗效檢方法舉例?？谔阋逴型滅活疫苗效力檢驗：用至少6月齡的健康易感牛（細胞中和抗體滴度≤1：8，或乳鼠中和抗體滴度≤1：4）15頭，分為3組，每組5頭，將待檢疫苗分為1頭份、1/3頭份、1/9頭份3個劑量組，每一劑量組分別于頸部肌肉注射5頭牛。接種21天后，連同條件相同的對照牛2頭，每頭牛舌上表面兩側分兩點皮內注射?？谔阋逴型病毒強毒，每點0.1ml（共0.2ml，含10000ID50）。連續(xù)觀察10日。對照牛應至少3蹄出現(xiàn)水泡或潰瘍。免疫牛僅在舌面出現(xiàn)水泡或潰瘍，而其他部位無病變時判為保護，除舌面以外任一部位出現(xiàn)典型口蹄疫水泡或潰瘍判為不保護。根據(jù)免疫牛的保護數(shù)，按Reed-Muench法計算被檢疫苗的PD50，每頭份疫苗應至少含3PD50。4、攻毒保護試驗效檢方法舉例?？谔阋逴型滅活疫苗效力檢驗：用48效力檢驗方法之二：病毒含量測定1、病毒含量測定原理：病毒含量的高低直接反映了產(chǎn)品的質量。因此用動物（雞胚、細胞培養(yǎng)物）接種測定病毒性活制品的病毒含量可作為評定效力高低的依據(jù)。效力檢驗方法之二：病毒含量測定1、病毒含量測定原理：病毒含量49效力檢驗方法之二：病毒含量測定2、病毒含量測定方法：每批疫苗按瓶簽注明的頭份用指定的稀釋液作適當稀釋后，通常選擇三個最佳稀釋液，按規(guī)定的途徑和劑量接種一定數(shù)目指定的實驗動物（細胞、雞胚），在規(guī)定的時間內觀察，根據(jù)動物（細胞、雞胚）對疫苗的反應情況來計算疫苗的LD5O（TCID50、ELD50、PD50、EID5O）或蝕班數(shù)（PFU），以此來判定疫苗的效力。效力檢驗方法之二：病毒含量測定2、病毒含量測定方法：每批疫苗503、病毒含量測定常見疫苗（12種）：口蹄疫O、A型活疫苗、山羊活疫苗、雞傳染性喉氣管炎活疫苗、雞傳染性法氏囊病中等毒力株活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞新城疫中等毒力活疫苗、雞新城疫低毒力活疫苗、雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗、雞痘活疫苗（Ⅰ）、小鵝瘟活疫苗、雞馬立克氏病活疫苗、雞馬力克氏病火雞皰疹病毒活疫苗。注：紅色字體疫苗表示可采用此方法，也可采用其他方法。3、病毒含量測定常見疫苗（12種）：514、病毒含量測定效檢方法舉例口蹄疫O、A型活疫苗單價苗的效力檢驗：將疫苗用PBS做10倍系列稀釋，O型苗以10-5、10-6、10-7三個個稀釋度，A型苗以10-6、10-7、10-83個稀釋度，各皮下接種3—4日齡乳鼠4只，每只0.1ml，觀察4-5日，根據(jù)乳鼠發(fā)病死亡數(shù)計算LD50，每0.1mlO型苗≥105.5LD50，A型苗≥106.5LD50，判為合格。

山羊痘活疫苗效力檢驗方法之一：按瓶簽注明頭份，用生理鹽水稀釋測其毒價，每頭份病毒含量應≥103.5TCID50。4、病毒含量測定效檢方法舉例口蹄疫O、A型活疫苗單價苗的效力52效力檢驗方法之三：血清學試驗1、血清學試驗原理：根據(jù)相關血清學檢驗的原理，檢驗抗體水平和抗原活性，從而評定產(chǎn)品的效力。病毒性產(chǎn)品主要采用以下兩種：（1）抗體效價測定：動物體的免疫系統(tǒng)能夠對進入體內的外源物質進行吸收、加工處理和遞呈，使有關淋巴細胞活化并產(chǎn)生特異性抗體。在部分疾病的免疫防治中，以這種體液免疫機制為主，其特異性抗體水平與攻毒保護率之間有一定平行關系。在這種情況下，對本動物或已經(jīng)建立的實驗動物模型進行接種后，通過適宜的血清學試驗檢測動物的抗體水平，可以作為判斷疫苗效力高低的有效方法。效力檢驗方法之三：血清學試驗1、血清學試驗原理：根據(jù)相關血清53效力檢驗方法之三：血清學試驗2）中和試驗：病毒與適量抗體完全中和后，接種敏感動物或細胞，可不受侵害而獲得保護。如果用一定抗原分別與系列稀釋的抗體（血清）中和，可得到使50%動物或細胞獲得保護的最高血清稀釋度，即血清的中和效價進而評價某疫苗（抗原）的效價或試驗動物的相關抗體是否符合規(guī)定。2、血清學試驗方法：血清學相關方法，如紅細胞凝集抑制試驗、中和試驗、補體結合試驗等。效力檢驗方法之三：血清學試驗2）中和試驗：病毒與適量抗體完全543、血清學試驗常見疫苗抗體效價測定：主要有雞產(chǎn)蛋下降綜合征滅活疫苗（HI抗體測定）、馬傳染性貧血活疫苗（補體結合試驗和瓊脂擴散試驗）。中和試驗法：雞新城疫-雞傳染性支氣管炎二聯(lián)活