溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查課件

溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院高萬(wàn)里編輯課件溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院編輯課件1溶血性貧血的概念

溶血性貧血的分類

主要溶血性貧血的病因分類及常見疾病溶血性貧血的臨床特點(diǎn)

溶血的實(shí)驗(yàn)室檢查

溶血性貧血的常用實(shí)驗(yàn)室檢查及意義血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

編輯課件溶血性貧血的概念編輯課件2溶血的概念

溶血

：病理狀態(tài)下，紅細(xì)胞的壽命縮短，紅細(xì)胞過多、過早被破壞，稱之為溶血。代償性溶血：在溶血情況下，骨髓代償性增生，生成紅細(xì)胞的效率可以補(bǔ)償過早、過多消亡的紅細(xì)胞，而不出現(xiàn)貧血，稱之為代償性溶血。溶血性貧血：紅細(xì)胞的破壞過速、過多，超過代償能力所發(fā)生的貧血，稱之為溶血性貧血。

編輯課件溶血的概念溶血：病理狀態(tài)下，紅細(xì)胞的壽命縮短，3溶血性貧血的分類

根據(jù)溶血發(fā)生的急緩和持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短，分急性和慢性；根據(jù)紅細(xì)胞的破壞場(chǎng)所的不同，分為血管內(nèi)溶血和血管外溶血；常見分類法是按先天性、獲得性和發(fā)病機(jī)理分類。1.先天性溶血性貧血多為遺傳性紅細(xì)胞內(nèi)在缺陷，包括膜、酶、血紅蛋白合成異常所致的溶血性貧血。

2.獲得性溶血性貧血多為紅細(xì)胞外在因素異常，包括免疫因素、藥物因素、生物因素等所致的溶血性貧血。編輯課件溶血性貧血的分類根據(jù)溶血發(fā)生的急緩和持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短，分急性4主要溶血性貧血的病因分類及常見疾病

先天性溶血性貧血

獲得性溶血性貧血

編輯課件主要溶血性貧血的病因分類及常見疾病先天性溶血性貧血編輯課件5先天性溶血性貧血

膜缺陷：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥.酶缺陷：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥、丙酮酸激酶缺陷癥、葡萄糖磷酸異構(gòu)酶缺陷癥、嘧啶-5-核苷酸酶缺陷癥.

珠蛋白異常：（血紅蛋白分子?。┲榈鞍琢康漠惓?，如海洋性貧血等。珠蛋白質(zhì)的異常，如鐮刀形紅細(xì)胞貧血、血紅蛋白C、血紅蛋白D、血紅蛋白E等。編輯課件先天性溶血性貧血膜缺陷：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性橢圓6獲得性溶血性貧血

免疫因素：（存在有破壞紅細(xì)胞的抗體）自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素綜合征、陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血、新生兒同種免疫性溶血性貧血、溶血性輸血反應(yīng)膜缺陷：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿感染因素：原蟲、病毒、支原體及細(xì)菌感染等化學(xué)因素：某些化學(xué)藥物及毒素，如苯肼、砷化氫、蛇毒等物理及機(jī)械因素：大面積燒傷、心臟瓣膜異常、人工瓣膜、血管病變、微血管溶血性貧血其他：脾功能亢進(jìn)編輯課件獲得性溶血性貧血免疫因素：（存在有破壞紅細(xì)胞的抗體）編輯課7溶血性貧血的臨床特點(diǎn)

急性溶血性貧血：1.起病急驟、2.寒戰(zhàn)高熱、3.頭痛惡心嘔吐、4.面色蒼白黃疸、5.嚴(yán)重者可出現(xiàn)周圍循環(huán)衰竭或急性腎功能衰竭.慢性溶血性貧血：1.起病緩慢病狀輕微、2.貧血黃疸肝脾腫大三聯(lián)癥、3.可以并發(fā)膽石癥和肝功能損害.編輯課件溶血性貧血的臨床特點(diǎn)急性溶血性貧血：1.起病急驟、2.寒戰(zhàn)8溶血的實(shí)驗(yàn)室檢查

檢查內(nèi)容

反映紅細(xì)胞破壞增生的檢查

反映紅細(xì)胞壽命縮短、易于破壞的檢查

有關(guān)紅細(xì)胞代償性增生的檢查

編輯課件溶血的實(shí)驗(yàn)室檢查檢查內(nèi)容編輯課件9檢查目的

肯定溶血證據(jù)確定主要溶血部位尋找溶血原因編輯課件檢查目的肯定溶血證據(jù)編輯課件10反映紅細(xì)胞破壞增生的檢查間接膽紅素增高尿中尿膽原排泄增加糞便中糞膽原排泄增加]血清結(jié)合珠蛋白降低血漿游離血紅蛋白明顯增加尿含鐵血黃素陽(yáng)性血紅蛋白尿高鐵血紅蛋白血癥編輯課件反映紅細(xì)胞破壞增生的檢查間接膽紅素增高編輯課件11反映紅細(xì)胞壽命縮短、易于破壞的檢查

紅細(xì)胞畸形、破壞紅細(xì)胞增多單核-巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞現(xiàn)象紅細(xì)胞壽命縮短紅細(xì)胞脆性增加編輯課件反映紅細(xì)胞壽命縮短、易于破壞的檢查紅細(xì)胞畸形、破壞紅細(xì)胞增12有關(guān)紅細(xì)胞代償性增生的檢查

網(wǎng)織紅細(xì)胞增多血中出現(xiàn)大量幼紅細(xì)胞血中大紅細(xì)胞骨髓中幼紅細(xì)胞明顯增生編輯課件有關(guān)紅細(xì)胞代償性增生的檢查網(wǎng)織紅細(xì)胞增多編輯課件13溶血性貧血的常用實(shí)驗(yàn)室檢查及意義紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)增高：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、橢圓形紅細(xì)胞增多癥抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性:

1.自身免疫性溶血性貧血2.藥物免疫性溶血性貧血3.新生兒同種免疫溶血病4.冷凝集素綜合征編輯課件溶血性貧血的常用實(shí)驗(yàn)室檢查及意義紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)增高：遺傳14酸溶血試驗(yàn)陽(yáng)性：PNH（作為肯定診斷）ROUS試驗(yàn)陽(yáng)性：PNH（作為篩選檢查）蔗糖溶血試驗(yàn)：PNH（作為篩選檢查）熱溶血試驗(yàn)：PNH（作為篩選檢查）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)：還原率降低葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥血紅蛋白電泳異常：常用于檢查Hbc、HbBar等編輯課件酸溶血試驗(yàn)陽(yáng)性：PNH（作為肯定診斷）編輯課件15HbA2增高：?珠蛋白生成障礙性貧血

HbF增高：?珠蛋白生成障礙性貧血HbH包涵體檢查陽(yáng)性：ɑ珠蛋白生成障礙性貧血異丙醇沉淀試驗(yàn)陽(yáng)性：提示有不穩(wěn)定血紅蛋白存在熱變性試驗(yàn)：沉淀率增高

存在不穩(wěn)定血紅蛋白，大于10%有診斷意義鐮變性試驗(yàn)陽(yáng)性：Hbs病冷熱溶血試驗(yàn)陽(yáng)性：PCH病編輯課件編輯課件16

血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

特征血管內(nèi)溶血（細(xì)胞外溶血）血管外溶血（細(xì)胞內(nèi)溶血）病因紅細(xì)胞內(nèi)缺陷，外因素獲得性多見紅細(xì)胞內(nèi)缺陷，外因素遺傳性多見RBC破壞場(chǎng)所血管內(nèi)（在血循環(huán)中破壞）在肝和脾的單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)破壞發(fā)病特征一般為急性，也可慢性一般為慢性，可有急性溶血危象貧血較重較輕，溶血危象時(shí)加重黃疸較明顯可輕可重血間接膽紅素增高明顯增高肝脾腫大少見常見編輯課件血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

特征血管內(nèi)溶血（細(xì)胞外溶血）血管17

血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

紅細(xì)胞形態(tài)異?？梢姵Ｒ娂t細(xì)胞脆性改變變化小多有改變血漿血紅蛋白增高，常大于100mg/L輕度增高血紅蛋白尿常見無(wú)含鐵血紅蛋白尿慢性常見一般陰性骨髓再障危象少見急性溶血加重時(shí)可見LDH增高輕度增高編輯課件血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

紅細(xì)胞形態(tài)異常可見常見紅細(xì)胞脆性18溶血象檢查的原理、試劑及操作規(guī)程

編輯課件溶血象檢查的原理、試劑及操作規(guī)程

編輯課件19（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理

滲透脆性試驗(yàn)是檢測(cè)紅細(xì)胞對(duì)不同濃度低滲鹽溶液的抵抗力。紅細(xì)胞在低滲鹽溶中，當(dāng)水滲透其內(nèi)部達(dá)一定程度時(shí)，紅細(xì)胞發(fā)生膨脹破裂。根據(jù)不同濃度的低滲鹽溶液中紅細(xì)胞溶血的情況，反映紅細(xì)胞表面積與容積的比值，反映其對(duì)低滲鹽溶液的抵抗性。比值愈小，紅細(xì)胞抵抗力愈小，滲透脆性增加。反之抵抗力增大。編輯課件（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件20試劑171mmol/LNaCl溶液（10g/L）

取經(jīng)100℃烘干的分析純氯化鈉0.7g置100ml容量瓶中，加少量雙蒸水溶液解后，再加雙蒸水至刻度。

樣品要求靜脈血4-5ml編輯課件試劑編輯課件21操作程序

1.靜脈血4-5ml放入盛有玻璃珠的三角燒瓶?jī)?nèi)輕輕搖動(dòng)（去掉纖維蛋白），直到血液不凝為止。將此血液放入離心管內(nèi)離心10分鐘左右，去掉血漿，再用0.9%的NaCl反復(fù)洗滌三次，再配成10%RBC懸液，分別于下列每管加一滴。表格如下：編輯課件操作程序編輯課件22試管號(hào)123456780.7%NaCl1.251.201.151.101.051.000.950.90蒸餾水00.050.100.150.200.250.300.35NaCl濃度（%)0.700.670.640.620.590.560.530.50試管號(hào)9101112131415160.7%NaCl0.850.800.750.700.650.600.550.50蒸餾水0.400.450.500.550.600.650.700.75NaCl濃度（%）0.480.450.420.390.360.330.300.27編輯課件試管號(hào)123456780.7%NaCl1.251.201.123

2.混勻、經(jīng)過兩小時(shí)觀察RBC始溶及全溶NaCl濃度

分析結(jié)果

靜置室溫2小時(shí)，從高濃度試管開始觀察，上層溶液開始出現(xiàn)透明紅色且管底有紅細(xì)胞者為開始溶血管；溶液透明紅色，管底完全無(wú)紅細(xì)胞者為完全溶血。編輯課件2.混勻、經(jīng)過兩小時(shí)觀察RBC始溶及全溶NaCl濃度24參考值正常溶血：初溶0.42-0.46%；全溶0.28-0.33

注：本試驗(yàn)需有正常對(duì)照。編輯課件參考值編輯課件25臨床意義

脆性增加主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥，橢圓形紅細(xì)胞增多癥和部分自身免疫性溶血性貧血。

脆性降低主要見于珠蛋白生成障礙性貧血，血紅蛋白C、D、E病，低色素性貧血，肝疾病等。編輯課件臨床意義編輯課件26（二）抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）

實(shí)驗(yàn)原理

抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）檢測(cè)自身免疫性溶血性貧血的自身抗體（IgG）。分為檢測(cè)紅細(xì)胞表面有無(wú)不完全抗體的直接抗人球蛋白試驗(yàn)和檢測(cè)血清中有無(wú)不完全抗體的間接抗人球蛋白試驗(yàn)。直接抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用抗人球蛋白試劑（抗IgG和/或抗C3d）與紅細(xì)胞表面的IgG分子結(jié)合，如紅細(xì)胞表面存在自身抗體，出現(xiàn)凝集反應(yīng)。間接試驗(yàn)應(yīng)用Rh（D）陽(yáng)性O(shè)型正常人紅細(xì)胞與受檢血清混合孵育，如血清中存在不完全抗體，紅細(xì)胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出現(xiàn)凝集。

編輯課件（二）抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)原理編輯課件27試劑

抗人球蛋白試劑IgG

樣品要求機(jī)械抗凝的靜脈血3ml，用0.9%NaCl洗滌數(shù)次，取RBC備用。編輯課件試劑編輯課件28

操作程序

1.

取10支小試管，每管加入0.85%生理鹽水0.5ml，取1：5抗人球蛋白血清0.5ml，加入第一，充分混勻，再?gòu)牡谝还苋〕龌旌弦?.5ml注入第二管混勻，再取0.5ml注入第三管，依次下去直至第10管，取出0.5ml棄去，則每管的濃度為1：10，1：20，1：40，1：80，1：160，1：320…2.

將不同濃度的液體，分別滴一滴于玻璃板上（用一滴管由低濃度向高濃度加）3.

將10%病人RBC分別滴加一滴于上述玻板液滴內(nèi)，同時(shí)充分混勻，15分鐘后觀察結(jié)果。編輯課件操作程序編輯課件29結(jié)果分析

RBC凝集為陽(yáng)性（需要正常對(duì)照）參考值正常人直接和間接抗人球蛋白試驗(yàn)均為陰性臨床意義自身免疫性溶血性貧血，冷凝集素綜合征，新生兒同種免疫性溶血，陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿，藥物性免疫性溶血等直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性。

編輯課件結(jié)果分析編輯課件30（三）酸溶血（Hams）試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理

PNH患者體內(nèi)存在對(duì)補(bǔ)體敏感的紅細(xì)胞。Hams試驗(yàn)即紅細(xì)胞在酸性（PH6.4-6.5）的正常血清中孵育，補(bǔ)體被激活，PNH紅細(xì)胞破壞而產(chǎn)生溶血，而正常人RBC不被溶解，無(wú)溶血現(xiàn)象。編輯課件（三）酸溶血（Hams）試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理編輯課件31試劑

1.1/6NHCL

2.8.5g/LNaCl溶液樣品要求

1.機(jī)械抗凝靜脈血5ml，用0.9%NaCl洗滌數(shù)次，取RBC備用（需同時(shí)用同型或O型正常人對(duì)照）。2.靜脈血2ml分離出血清備用

編輯課件試劑編輯課件32操作程序

1.

取兩支小試管分別注入患者血清0.25ml2.

一管加入患者50%的RBC懸液0.0125ml，再加入1/6NHCL0.025ml3.另一管加正常人同型或者O型者50%的RBC懸液0.0125ml，加入1/6NHCL0.025ml4.以上兩管充分混勻，加棉塞于37℃溫箱中一小時(shí)觀察有無(wú)溶血現(xiàn)象（可離心后觀察）

編輯課件操作程序編輯課件33

參考值正常人

陰性臨床意義本試驗(yàn)陽(yáng)性主要見于PNH，確診意義大。某些自身免疫性溶血性貧血發(fā)作嚴(yán)重時(shí)可呈陽(yáng)性

編輯課件

參考值編輯課件34（四）熱溶血試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理利用患者的紅細(xì)胞在其自身的血清（含補(bǔ)體）中于37℃孵育后，由于葡萄糖分解產(chǎn)酸使血清酸化，從而導(dǎo)致溶血的發(fā)生。樣品要求

靜脈血3ml（分成兩管）編輯課件（四）熱溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件35操作程序取靜脈血3ml，注入兩支小試管中（各加入1.5ml），傾斜放置，一管置于室溫，另一管放37℃溫箱中，4h，6h，12h，24h，觀察有無(wú)溶血現(xiàn)象（可離心觀察）。

編輯課件操作程序編輯課件36參考值陰性

臨床意義

陽(yáng)性見于PNH。遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥和自身免疫性溶血性貧血亦可陽(yáng)性，但陽(yáng)性率比PNH為低。本試驗(yàn)用于PNH篩選試驗(yàn)。編輯課件參考值編輯課件37（五）蔗糖溶血試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理

在離子狀態(tài)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生某些變化，RBC與血清免疫球蛋白之間發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，被補(bǔ)體包圍，PNH患者RBC由于膜結(jié)構(gòu)異常，在有補(bǔ)體情況下，容易破壞，發(fā)生溶血。編輯課件（五）蔗糖溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件38試劑

1.蔗糖

2.3.8%枸櫞酸鈉溶液樣本要求枸櫞酸鈉抗凝靜脈血2ml（3.8%枸櫞酸鈉與靜脈血比為1：9）編輯課件試劑編輯課件39

操作程序

將一份枸櫞酸鈉全血加入9份新鮮配制的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸餾水+0.5ml抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血），混合后，置37℃溫箱中孵育30分鐘，離心沉淀。結(jié)果分析

如有溶血蔗糖液為紅色，即為陽(yáng)性。參考值正常為陰性編輯課件操作程序編輯課件40

臨床意義PNH患者蔗糖溶血試驗(yàn)為陽(yáng)性或溶血率增加，可作為PNH的篩選試驗(yàn)。自身免疫性溶血性貧血有的可為陽(yáng)性，白血病、骨髓硬化時(shí)可出現(xiàn)假陽(yáng)性。編輯課件

臨床意義編輯課件41（六）尿含鐵血黃素試驗(yàn)

（Rous試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)原理

當(dāng)血紅蛋白通過腎濾過時(shí)，部分鐵離子以含鐵血黃素的形式沉積于上皮細(xì)胞，并隨尿排出。尿中含鐵血黃素是不穩(wěn)定的鐵蛋白的聚合體，其中的高鐵離子與亞鐵氰化鉀作用，在酸性環(huán)境下產(chǎn)生普魯士藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀。尿沉渣腎小管細(xì)胞內(nèi)外可見直徑1-3μm的蘭色顆粒。

編輯課件（六）尿含鐵血黃素試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)原理編輯課件42試劑1.2%亞鐵氰化鉀水溶液：用時(shí)新鮮配制。

2.3%鹽酸樣品要求新鮮晨尿10ml

編輯課件試劑編輯課件43

操作程序

1.

取新鮮尿離心沉淀，去掉上清液。2.

取等量的2%的低鐵氰化鉀和1/5NHCL混合。3.

將管（2）之酸性低鐵氰化鉀注入尿的沉渣試管中混合，在室溫中靜置10-20分鐘，離心沉淀取沉渣鏡檢。編輯課件操作程序編輯課件44

結(jié)果分析如有蘭色顆粒則為陽(yáng)性。參考值正常人為陰性

臨床意義Rous試驗(yàn)陽(yáng)性提示慢性血管內(nèi)溶血，尿中有鐵排除出。無(wú)論有無(wú)血紅蛋白尿，只要存在慢性血管內(nèi)溶血如PNH，本試驗(yàn)結(jié)果即呈陽(yáng)性，并可持續(xù)數(shù)周。但在溶血初期，雖然有血紅蛋白尿，上皮細(xì)胞內(nèi)尚未形成可檢出的含鐵血黃素，此時(shí)本試驗(yàn)可呈陰性反應(yīng)。編輯課件結(jié)果分析編輯課件45（七）紅細(xì)胞形態(tài)觀察（涂片、染色、鏡檢）

成熟紅細(xì)胞的形態(tài)觀察對(duì)診斷溶血性貧血具有重要意義，它可為本病的診斷提供重要的線索和根據(jù)；如遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥時(shí)可達(dá)20-30%以上，嚴(yán)重者可達(dá)100%；遺傳性橢圓形紅細(xì)胞高達(dá)50-90%；靶形紅細(xì)胞主要見于地中海貧血和其他血紅蛋白病。某些獲得性貧血如自身免疫、感染、理化和機(jī)械因素所致的溶血性貧血，亦可因紅細(xì)胞損害而出現(xiàn)紅細(xì)胞形態(tài)改變，其中最主要的為出現(xiàn)球形紅細(xì)胞和紅細(xì)胞的碎裂現(xiàn)象。編輯課件（七）紅細(xì)胞形態(tài)觀察（涂片、染色、鏡檢）成熟46（八）網(wǎng)織紅細(xì)胞檢驗(yàn)

概述

網(wǎng)織紅細(xì)胞是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間，尚未完全成熟的紅細(xì)胞，因網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘留有多少不等的核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，用堿性染料（如煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)）進(jìn)行染色后呈綠色網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故稱為網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞較成熟紅細(xì)胞體積稍大，直徑為8-9.5μm，在瑞氏染色后的血涂中為嗜多色紅細(xì)胞。新鮮血液中的紅細(xì)胞用核酸熒光染料染色后，在流式細(xì)胞儀或某些以流式細(xì)胞術(shù)為原理的血細(xì)胞分析儀上計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分比和每升血液中的絕對(duì)值。

在一些全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上，還可直接測(cè)量網(wǎng)織紅細(xì)胞的體積，體積分布寬度，血紅蛋白含量等參數(shù)。

編輯課件（八）網(wǎng)織紅細(xì)胞檢驗(yàn)概述編輯課件47參考值

1.

RC百分比：手工法0.5-1.5%

儀量法0.5-2.0%2.

RC絕對(duì)值：手工法

（24-84）×109/L儀量法

（29-75）×109/L3.

RC成熟指數(shù)：10-344.

RC血紅蛋白含量：30.4-35.8Pg（成人）

編輯課件參考值編輯課件48臨床意義網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是反映紅細(xì)胞系統(tǒng)造血旺盛的可靠指標(biāo)，臨床常用相對(duì)百分比反映網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量變化，但易受紅細(xì)胞比容的影響。網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)技術(shù)較相對(duì)百分比更為準(zhǔn)確。網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）能反映骨髓紅系細(xì)胞造血活性，并可用于貧血的進(jìn)一步分類。網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）可以更早期、靈敏的反映紅細(xì)胞血紅蛋白的合成，對(duì)缺鐵性貧血的早期診斷、療效觀察及功能性缺鐵的鑒別有重要意義。編輯課件臨床意義編輯課件491.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

（1）溶血性貧血時(shí)，骨髓紅系因受到缺氧及大量紅細(xì)胞破壞產(chǎn)物的刺激而增生，未完全成熟的紅細(xì)胞提前釋放到外周血，使網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，常在5%以上。急性溶血性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可高達(dá)50%以上。（2）急性失血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增多，其增高的幅度依賴于出血量的多少，一般在出血后的第2-3天達(dá)峰值，可達(dá)5-15%，出血停止后網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸恢復(fù)正常，臨床上可據(jù)此判斷出血是否停止。編輯課件1.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（1）溶血性貧血時(shí)，骨髓紅系因受到缺氧50（3）缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可正常、輕度升高或減低，當(dāng)給予足夠的鐵劑或VB12及葉酸治療，用藥一周內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞開始上升，在24周后達(dá)高峰，一般增至5%以上，可達(dá)10-20%。隨后網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量逐漸下降，紅細(xì)胞及血紅蛋白則逐漸增高，這一現(xiàn)象稱為網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)，可以作為貧血治療有效的判斷指標(biāo)。編輯課件（3）缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可正常、輕度升高51（4）再生障礙性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞減少，一般網(wǎng)織紅細(xì)胞常低于0.5%，部分慢性再障患者網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比可為1%左右，但其絕對(duì)值計(jì)數(shù)明顯減低。臨床將網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值低于15×109/L，作為急性再障的診斷指標(biāo)。（5）骨髓病性貧血如急性白血病、淋巴瘤、骨髓瘤患者，骨髓中腫瘤細(xì)胞大量浸潤(rùn)，使紅系細(xì)胞增生受到抑制，網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量明顯減少。編輯課件（4）再生障礙性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞減少，一般網(wǎng)織紅細(xì)胞常低于522.網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）

RMI增高時(shí)紅系細(xì)胞造血應(yīng)激反應(yīng)的早期信號(hào)，此時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量可能仍處于參考范圍內(nèi)。急性大出血后，58h即可見成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，RMI增大，而網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量常在2天后才會(huì)出現(xiàn)有意義的增高。紅細(xì)胞生成素（EPO）治療后，紅系造血應(yīng)激反應(yīng)隨之而出現(xiàn)，RMI升高可作為骨髓移植后造血功能重建的一項(xiàng)早期觀察指標(biāo)。編輯課件2.網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）

RMI增高時(shí)533.網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）

缺鐵性貧血的早期診斷：缺鐵性貧血時(shí)，CHr明顯減低。當(dāng)體內(nèi)貯存鐵減低但尚未出現(xiàn)貧血，即處于潛在性缺鐵期時(shí)，CHr先于血紅蛋白和血清鐵等減低。當(dāng)CHr的臨界值（cut-off)<26pg時(shí)，對(duì)缺鐵性貧血診斷的靈敏度可達(dá)100%、特異性為80%。若用足量鐵劑治療后，CHr上升早于其他紅細(xì)胞參數(shù)。EPO治療檢測(cè)：EPO治療后，紅細(xì)胞生成量增多，鐵消耗加劇，若體內(nèi)貯存鐵不足，CHr降低，呈功能性缺鐵狀態(tài)。當(dāng)及時(shí)補(bǔ)充鐵劑后，功能性缺鐵狀態(tài)消失，CHr逐漸恢復(fù)正常。編輯課件3.網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）缺鐵性貧血的早期診54（九）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)是在血液中加入亞硝酸鹽，人類紅細(xì)胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細(xì)胞的G-6-PD催化成糖旁路使NADP（氧化型輔酶Ⅱ）變成NADPH（還原型輔酶Ⅱ），其脫的氫通過亞甲藍(lán)試劑的遞氫作用而使高鐵血紅蛋白（Fe3+）還原成亞鐵血紅蛋白（Fe2+）,通過比色可知道還原的多少。當(dāng)G-6-PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白的還原率下降。編輯課件（九）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件55參考值正常人高鐵血紅蛋白的還原率>75%臨床意義G-6-PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白的還原率下降。中間缺乏（雜合子）為31-74%，嚴(yán)重缺乏（半合子或純合子）<30%。編輯課件參考值編輯課件56（十）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒

光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測(cè)定

原理在G-6-PD和NADP

+存在下，G-6-PD能使NADP+還原成NADPH，后者在紫外線照射下會(huì)發(fā)出熒光。NADPH的吸收峰在波長(zhǎng)340nm處，可通過單位時(shí)間生成的NADPH的量來測(cè)定G-6-PD活性。

參考值及臨床意義正常人有很強(qiáng)熒光。G-6-PD缺乏者熒光很弱或無(wú)熒光。編輯課件（十）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒

光斑點(diǎn)試57（十一）丙酮酸激酶熒光斑點(diǎn)試

驗(yàn)和活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理在二磷酸腺苷（ADP)存在的條件下丙酮酸激酶催化磷酸烯醇丙酮酸轉(zhuǎn)化成丙酮酸，在輔酶Ⅰ還原型(NADH)存在的情況下，丙酮酸被LDH轉(zhuǎn)化為乳酸，若標(biāo)記熒光于NADH上，此時(shí)有熒光的NADH變?yōu)闊o(wú)熒光的NAD.參考值正常人丙酮酸激酶活性斑點(diǎn)在25分鐘內(nèi)消失。酶活性（15.0±1.99）U／gHb.臨床意義熒光斑點(diǎn)不消失或時(shí)間延長(zhǎng)說明丙酮酸激酶活性缺乏，中間缺乏（雜合子）時(shí)，熒光25-60分鐘消失，嚴(yán)重缺乏（純合子）時(shí)，熒光60分鐘不消失。編輯課件（十一）丙酮酸激酶熒光斑點(diǎn)試

驗(yàn)和58（十二）血紅蛋白電泳檢測(cè)

原理血紅蛋白電泳使根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點(diǎn)不同，在一定的PH緩沖液中，緩沖液的PH大于Hb的等電點(diǎn)時(shí)其帶負(fù)電荷，電泳時(shí)在電場(chǎng)中向陽(yáng)極泳動(dòng)；反之，Hb帶的電荷向陰極泳動(dòng)。經(jīng)過一定電壓和時(shí)間的電泳，不同的血紅蛋白所帶的電荷不同，相對(duì)分子質(zhì)量不同，其泳動(dòng)方向和速度不同，可分離出各自的區(qū)帶，同時(shí)對(duì)電泳出的各區(qū)帶進(jìn)行電泳掃描，可進(jìn)行各種血紅蛋白的定量分析。編輯課件（十二）血紅蛋白電泳檢測(cè)

原理編輯課件59

參考值

1.

PH8.6TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳正常血紅蛋白電泳區(qū)帶HbA>95%,HbF<2%,HbA2為1.0-3.1%。PH8.6TEB緩沖液適合于檢出HbA、HbA2、HbS、HbC、但HbF不易與HbA分開，HbH與HbBarts不能分開和顯示，應(yīng)再選擇其他緩沖液進(jìn)行電泳分離。

2.

PH6.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳主要用于HbH和HbBarts的檢出。HbH等電點(diǎn)為5.6，在PH6.5TEB緩沖液中電泳時(shí)泳向陽(yáng)極，HbBarts則在點(diǎn)樣點(diǎn)不動(dòng)，而其余的血紅蛋白都向陰極移動(dòng)。編輯課件

參考值編輯課件60臨床意義

1.

通過與正常人血紅蛋白電泳圖譜進(jìn)行比較，可發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白的區(qū)帶。如HbH、HbE、HbBarts、HbS、HbD、HbC等異常血紅蛋白的異常。

2.

HbA2增多，見于?珠蛋白生成障礙性貧血，為雜合子的重要實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。HbE病時(shí)也在HbA2區(qū)帶位置出增加，但含量很大（在10%以上）HbA2輕度增加亦可見于肝病，腫瘤和某些血液病。編輯課件臨床意義編輯課件61

溶血性貧血實(shí)驗(yàn)室檢查篩選試驗(yàn)主要臨床表現(xiàn)：

黃疸、貧血、肝脾腫大等。血象檢查：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

紅細(xì)胞形態(tài)

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)尿液檢查：尿膽原

血紅蛋白尿

含鐵血黃素尿生化檢查：總膽紅素及間接膽紅素測(cè)定骨髓檢查：紅系增生情況

粒/紅比值編輯課件溶血性貧血實(shí)驗(yàn)室檢查篩選試驗(yàn)主要臨床表現(xiàn)：黃疸、貧血、肝62抗人球蛋白試驗(yàn)：

陽(yáng)性-免疫性溶血性貧血陰性-非免疫性溶血性貧血-遺傳性溶血性貧血

（自幼發(fā)病家族史陽(yáng)性）編輯課件抗人球蛋白試驗(yàn)：編輯課件63免疫性溶血性貧血：

自身免疫性溶血性貧血：1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)增高或正常2.自溶試驗(yàn)陽(yáng)性，不能為葡萄糖所糾正。

同種免疫性溶血性貧血:Rh血型、ABO血型鑒定（新生兒溶血病、誤輸異型血）藥物性免疫性溶血性貧血（有青霉素、奎尼丁等藥物史）

陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿冷溶血試驗(yàn)陽(yáng)性編輯課件免疫性溶血性貧血：自身免疫性溶血性貧血：編輯課件64非免疫性溶血性貧血：

有各種誘因感染、藥物、化學(xué)中毒、蛇毒、繼發(fā)性脾腫大、肝硬化等因素所致溶血性貧血

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿羅氏試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）陽(yáng)性酸溶血試驗(yàn)（Hams）試驗(yàn)陽(yáng)性

熱溶血試驗(yàn)及蔗糖溶血試驗(yàn)陽(yáng)性

紅細(xì)胞碎裂現(xiàn)象微血管病性溶貧、溶血性尿毒綜合征常為陽(yáng)性編輯課件非免疫性溶血性貧血：有各種誘因編輯課件65遺傳性溶血性貧血（自幼發(fā)病家族史陽(yáng)性）

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)：

增高：提示紅細(xì)胞膜的異常

正常：提示紅細(xì)胞酶的缺乏

降低：

提示血紅蛋白病

編輯課件遺傳性溶血性貧血（自幼發(fā)病家族史陽(yáng)性）紅細(xì)66紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

增高：提示紅細(xì)胞膜的異常

1.遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥

血片可見球形紅細(xì)胞增多，自溶試驗(yàn)陽(yáng)性

—能為葡萄糖所糾正

2.遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥血片見橢圓形紅細(xì)胞增多編輯課件紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)增高：提示紅細(xì)胞膜的異常編輯課件67紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)正常：提示紅細(xì)胞酶的缺乏

1.丙酮酸激酶缺乏（PK）

自溶試驗(yàn)陽(yáng)性，能為ATP所糾正

2.6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏（G-6-PD）

高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)陽(yáng)性

變性珠蛋白小體（Heinz）陽(yáng)性

編輯課件紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)正常：提示紅細(xì)胞酶的缺乏編輯課件68降低：

提示血紅蛋白病

血紅蛋白電泳陽(yáng)性ɑ地中海貧血—”H”包涵體、異丙醇試驗(yàn)弱陽(yáng)性

?地中海貧血：重—抗堿血紅蛋白增高

輕—血紅蛋白A2增高血紅蛋白S病—鐮變?cè)囼?yàn)陽(yáng)性不穩(wěn)定血紅蛋白病

—熱變性試驗(yàn)及異丙醇試驗(yàn)陽(yáng)性

其他：C、D、E血紅蛋白病—相應(yīng)血紅蛋白增高編輯課件降低：提示血紅蛋白病編輯課件69謝謝！編輯課件謝謝！編輯課件70溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院高萬(wàn)里編輯課件溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院編輯課件71溶血性貧血的概念

溶血性貧血的分類

主要溶血性貧血的病因分類及常見疾病溶血性貧血的臨床特點(diǎn)

溶血的實(shí)驗(yàn)室檢查

溶血性貧血的常用實(shí)驗(yàn)室檢查及意義血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

編輯課件溶血性貧血的概念編輯課件72溶血的概念

溶血

：病理狀態(tài)下，紅細(xì)胞的壽命縮短，紅細(xì)胞過多、過早被破壞，稱之為溶血。代償性溶血：在溶血情況下，骨髓代償性增生，生成紅細(xì)胞的效率可以補(bǔ)償過早、過多消亡的紅細(xì)胞，而不出現(xiàn)貧血，稱之為代償性溶血。溶血性貧血：紅細(xì)胞的破壞過速、過多，超過代償能力所發(fā)生的貧血，稱之為溶血性貧血。

編輯課件溶血的概念溶血：病理狀態(tài)下，紅細(xì)胞的壽命縮短，73溶血性貧血的分類

根據(jù)溶血發(fā)生的急緩和持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短，分急性和慢性；根據(jù)紅細(xì)胞的破壞場(chǎng)所的不同，分為血管內(nèi)溶血和血管外溶血；常見分類法是按先天性、獲得性和發(fā)病機(jī)理分類。1.先天性溶血性貧血多為遺傳性紅細(xì)胞內(nèi)在缺陷，包括膜、酶、血紅蛋白合成異常所致的溶血性貧血。

2.獲得性溶血性貧血多為紅細(xì)胞外在因素異常，包括免疫因素、藥物因素、生物因素等所致的溶血性貧血。編輯課件溶血性貧血的分類根據(jù)溶血發(fā)生的急緩和持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短，分急性74主要溶血性貧血的病因分類及常見疾病

先天性溶血性貧血

獲得性溶血性貧血

編輯課件主要溶血性貧血的病因分類及常見疾病先天性溶血性貧血編輯課件75先天性溶血性貧血

膜缺陷：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥.酶缺陷：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥、丙酮酸激酶缺陷癥、葡萄糖磷酸異構(gòu)酶缺陷癥、嘧啶-5-核苷酸酶缺陷癥.

珠蛋白異常：（血紅蛋白分子病）珠蛋白量的異常，如海洋性貧血等。珠蛋白質(zhì)的異常，如鐮刀形紅細(xì)胞貧血、血紅蛋白C、血紅蛋白D、血紅蛋白E等。編輯課件先天性溶血性貧血膜缺陷：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、遺傳性橢圓76獲得性溶血性貧血

免疫因素：（存在有破壞紅細(xì)胞的抗體）自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素綜合征、陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血、新生兒同種免疫性溶血性貧血、溶血性輸血反應(yīng)膜缺陷：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿感染因素：原蟲、病毒、支原體及細(xì)菌感染等化學(xué)因素：某些化學(xué)藥物及毒素，如苯肼、砷化氫、蛇毒等物理及機(jī)械因素：大面積燒傷、心臟瓣膜異常、人工瓣膜、血管病變、微血管溶血性貧血其他：脾功能亢進(jìn)編輯課件獲得性溶血性貧血免疫因素：（存在有破壞紅細(xì)胞的抗體）編輯課77溶血性貧血的臨床特點(diǎn)

急性溶血性貧血：1.起病急驟、2.寒戰(zhàn)高熱、3.頭痛惡心嘔吐、4.面色蒼白黃疸、5.嚴(yán)重者可出現(xiàn)周圍循環(huán)衰竭或急性腎功能衰竭.慢性溶血性貧血：1.起病緩慢病狀輕微、2.貧血黃疸肝脾腫大三聯(lián)癥、3.可以并發(fā)膽石癥和肝功能損害.編輯課件溶血性貧血的臨床特點(diǎn)急性溶血性貧血：1.起病急驟、2.寒戰(zhàn)78溶血的實(shí)驗(yàn)室檢查

檢查內(nèi)容

反映紅細(xì)胞破壞增生的檢查

反映紅細(xì)胞壽命縮短、易于破壞的檢查

有關(guān)紅細(xì)胞代償性增生的檢查

編輯課件溶血的實(shí)驗(yàn)室檢查檢查內(nèi)容編輯課件79檢查目的

肯定溶血證據(jù)確定主要溶血部位尋找溶血原因編輯課件檢查目的肯定溶血證據(jù)編輯課件80反映紅細(xì)胞破壞增生的檢查間接膽紅素增高尿中尿膽原排泄增加糞便中糞膽原排泄增加]血清結(jié)合珠蛋白降低血漿游離血紅蛋白明顯增加尿含鐵血黃素陽(yáng)性血紅蛋白尿高鐵血紅蛋白血癥編輯課件反映紅細(xì)胞破壞增生的檢查間接膽紅素增高編輯課件81反映紅細(xì)胞壽命縮短、易于破壞的檢查

紅細(xì)胞畸形、破壞紅細(xì)胞增多單核-巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞現(xiàn)象紅細(xì)胞壽命縮短紅細(xì)胞脆性增加編輯課件反映紅細(xì)胞壽命縮短、易于破壞的檢查紅細(xì)胞畸形、破壞紅細(xì)胞增82有關(guān)紅細(xì)胞代償性增生的檢查

網(wǎng)織紅細(xì)胞增多血中出現(xiàn)大量幼紅細(xì)胞血中大紅細(xì)胞骨髓中幼紅細(xì)胞明顯增生編輯課件有關(guān)紅細(xì)胞代償性增生的檢查網(wǎng)織紅細(xì)胞增多編輯課件83溶血性貧血的常用實(shí)驗(yàn)室檢查及意義紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)增高：遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、橢圓形紅細(xì)胞增多癥抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性:

1.自身免疫性溶血性貧血2.藥物免疫性溶血性貧血3.新生兒同種免疫溶血病4.冷凝集素綜合征編輯課件溶血性貧血的常用實(shí)驗(yàn)室檢查及意義紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)增高：遺傳84酸溶血試驗(yàn)陽(yáng)性：PNH（作為肯定診斷）ROUS試驗(yàn)陽(yáng)性：PNH（作為篩選檢查）蔗糖溶血試驗(yàn)：PNH（作為篩選檢查）熱溶血試驗(yàn)：PNH（作為篩選檢查）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)：還原率降低葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥血紅蛋白電泳異常：常用于檢查Hbc、HbBar等編輯課件酸溶血試驗(yàn)陽(yáng)性：PNH（作為肯定診斷）編輯課件85HbA2增高：?珠蛋白生成障礙性貧血

HbF增高：?珠蛋白生成障礙性貧血HbH包涵體檢查陽(yáng)性：ɑ珠蛋白生成障礙性貧血異丙醇沉淀試驗(yàn)陽(yáng)性：提示有不穩(wěn)定血紅蛋白存在熱變性試驗(yàn)：沉淀率增高

存在不穩(wěn)定血紅蛋白，大于10%有診斷意義鐮變性試驗(yàn)陽(yáng)性：Hbs病冷熱溶血試驗(yàn)陽(yáng)性：PCH病編輯課件編輯課件86

血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

特征血管內(nèi)溶血（細(xì)胞外溶血）血管外溶血（細(xì)胞內(nèi)溶血）病因紅細(xì)胞內(nèi)缺陷，外因素獲得性多見紅細(xì)胞內(nèi)缺陷，外因素遺傳性多見RBC破壞場(chǎng)所血管內(nèi)（在血循環(huán)中破壞）在肝和脾的單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)破壞發(fā)病特征一般為急性，也可慢性一般為慢性，可有急性溶血危象貧血較重較輕，溶血危象時(shí)加重黃疸較明顯可輕可重血間接膽紅素增高明顯增高肝脾腫大少見常見編輯課件血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

特征血管內(nèi)溶血（細(xì)胞外溶血）血管87

血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

紅細(xì)胞形態(tài)異常可見常見紅細(xì)胞脆性改變變化小多有改變血漿血紅蛋白增高，常大于100mg/L輕度增高血紅蛋白尿常見無(wú)含鐵血紅蛋白尿慢性常見一般陰性骨髓再障危象少見急性溶血加重時(shí)可見LDH增高輕度增高編輯課件血管內(nèi)和血管外溶血的鑒別

紅細(xì)胞形態(tài)異常可見常見紅細(xì)胞脆性88溶血象檢查的原理、試劑及操作規(guī)程

編輯課件溶血象檢查的原理、試劑及操作規(guī)程

編輯課件89（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理

滲透脆性試驗(yàn)是檢測(cè)紅細(xì)胞對(duì)不同濃度低滲鹽溶液的抵抗力。紅細(xì)胞在低滲鹽溶中，當(dāng)水滲透其內(nèi)部達(dá)一定程度時(shí)，紅細(xì)胞發(fā)生膨脹破裂。根據(jù)不同濃度的低滲鹽溶液中紅細(xì)胞溶血的情況，反映紅細(xì)胞表面積與容積的比值，反映其對(duì)低滲鹽溶液的抵抗性。比值愈小，紅細(xì)胞抵抗力愈小，滲透脆性增加。反之抵抗力增大。編輯課件（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件90試劑171mmol/LNaCl溶液（10g/L）

取經(jīng)100℃烘干的分析純氯化鈉0.7g置100ml容量瓶中，加少量雙蒸水溶液解后，再加雙蒸水至刻度。

樣品要求靜脈血4-5ml編輯課件試劑編輯課件91操作程序

1.靜脈血4-5ml放入盛有玻璃珠的三角燒瓶?jī)?nèi)輕輕搖動(dòng)（去掉纖維蛋白），直到血液不凝為止。將此血液放入離心管內(nèi)離心10分鐘左右，去掉血漿，再用0.9%的NaCl反復(fù)洗滌三次，再配成10%RBC懸液，分別于下列每管加一滴。表格如下：編輯課件操作程序編輯課件92試管號(hào)123456780.7%NaCl1.251.201.151.101.051.000.950.90蒸餾水00.050.100.150.200.250.300.35NaCl濃度（%)0.700.670.640.620.590.560.530.50試管號(hào)9101112131415160.7%NaCl0.850.800.750.700.650.600.550.50蒸餾水0.400.450.500.550.600.650.700.75NaCl濃度（%）0.480.450.420.390.360.330.300.27編輯課件試管號(hào)123456780.7%NaCl1.251.201.193

2.混勻、經(jīng)過兩小時(shí)觀察RBC始溶及全溶NaCl濃度

分析結(jié)果

靜置室溫2小時(shí)，從高濃度試管開始觀察，上層溶液開始出現(xiàn)透明紅色且管底有紅細(xì)胞者為開始溶血管；溶液透明紅色，管底完全無(wú)紅細(xì)胞者為完全溶血。編輯課件2.混勻、經(jīng)過兩小時(shí)觀察RBC始溶及全溶NaCl濃度94參考值正常溶血：初溶0.42-0.46%；全溶0.28-0.33

注：本試驗(yàn)需有正常對(duì)照。編輯課件參考值編輯課件95臨床意義

脆性增加主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥，橢圓形紅細(xì)胞增多癥和部分自身免疫性溶血性貧血。

脆性降低主要見于珠蛋白生成障礙性貧血，血紅蛋白C、D、E病，低色素性貧血，肝疾病等。編輯課件臨床意義編輯課件96（二）抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）

實(shí)驗(yàn)原理

抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）檢測(cè)自身免疫性溶血性貧血的自身抗體（IgG）。分為檢測(cè)紅細(xì)胞表面有無(wú)不完全抗體的直接抗人球蛋白試驗(yàn)和檢測(cè)血清中有無(wú)不完全抗體的間接抗人球蛋白試驗(yàn)。直接抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用抗人球蛋白試劑（抗IgG和/或抗C3d）與紅細(xì)胞表面的IgG分子結(jié)合，如紅細(xì)胞表面存在自身抗體，出現(xiàn)凝集反應(yīng)。間接試驗(yàn)應(yīng)用Rh（D）陽(yáng)性O(shè)型正常人紅細(xì)胞與受檢血清混合孵育，如血清中存在不完全抗體，紅細(xì)胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出現(xiàn)凝集。

編輯課件（二）抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)原理編輯課件97試劑

抗人球蛋白試劑IgG

樣品要求機(jī)械抗凝的靜脈血3ml，用0.9%NaCl洗滌數(shù)次，取RBC備用。編輯課件試劑編輯課件98

操作程序

1.

取10支小試管，每管加入0.85%生理鹽水0.5ml，取1：5抗人球蛋白血清0.5ml，加入第一，充分混勻，再?gòu)牡谝还苋〕龌旌弦?.5ml注入第二管混勻，再取0.5ml注入第三管，依次下去直至第10管，取出0.5ml棄去，則每管的濃度為1：10，1：20，1：40，1：80，1：160，1：320…2.

將不同濃度的液體，分別滴一滴于玻璃板上（用一滴管由低濃度向高濃度加）3.

將10%病人RBC分別滴加一滴于上述玻板液滴內(nèi)，同時(shí)充分混勻，15分鐘后觀察結(jié)果。編輯課件操作程序編輯課件99結(jié)果分析

RBC凝集為陽(yáng)性（需要正常對(duì)照）參考值正常人直接和間接抗人球蛋白試驗(yàn)均為陰性臨床意義自身免疫性溶血性貧血，冷凝集素綜合征，新生兒同種免疫性溶血，陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿，藥物性免疫性溶血等直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性。

編輯課件結(jié)果分析編輯課件100（三）酸溶血（Hams）試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理

PNH患者體內(nèi)存在對(duì)補(bǔ)體敏感的紅細(xì)胞。Hams試驗(yàn)即紅細(xì)胞在酸性（PH6.4-6.5）的正常血清中孵育，補(bǔ)體被激活，PNH紅細(xì)胞破壞而產(chǎn)生溶血，而正常人RBC不被溶解，無(wú)溶血現(xiàn)象。編輯課件（三）酸溶血（Hams）試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理編輯課件101試劑

1.1/6NHCL

2.8.5g/LNaCl溶液樣品要求

1.機(jī)械抗凝靜脈血5ml，用0.9%NaCl洗滌數(shù)次，取RBC備用（需同時(shí)用同型或O型正常人對(duì)照）。2.靜脈血2ml分離出血清備用

編輯課件試劑編輯課件102操作程序

1.

取兩支小試管分別注入患者血清0.25ml2.

一管加入患者50%的RBC懸液0.0125ml，再加入1/6NHCL0.025ml3.另一管加正常人同型或者O型者50%的RBC懸液0.0125ml，加入1/6NHCL0.025ml4.以上兩管充分混勻，加棉塞于37℃溫箱中一小時(shí)觀察有無(wú)溶血現(xiàn)象（可離心后觀察）

編輯課件操作程序編輯課件103

參考值正常人

陰性臨床意義本試驗(yàn)陽(yáng)性主要見于PNH，確診意義大。某些自身免疫性溶血性貧血發(fā)作嚴(yán)重時(shí)可呈陽(yáng)性

編輯課件

參考值編輯課件104（四）熱溶血試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理利用患者的紅細(xì)胞在其自身的血清（含補(bǔ)體）中于37℃孵育后，由于葡萄糖分解產(chǎn)酸使血清酸化，從而導(dǎo)致溶血的發(fā)生。樣品要求

靜脈血3ml（分成兩管）編輯課件（四）熱溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件105操作程序取靜脈血3ml，注入兩支小試管中（各加入1.5ml），傾斜放置，一管置于室溫，另一管放37℃溫箱中，4h，6h，12h，24h，觀察有無(wú)溶血現(xiàn)象（可離心觀察）。

編輯課件操作程序編輯課件106參考值陰性

臨床意義

陽(yáng)性見于PNH。遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥和自身免疫性溶血性貧血亦可陽(yáng)性，但陽(yáng)性率比PNH為低。本試驗(yàn)用于PNH篩選試驗(yàn)。編輯課件參考值編輯課件107（五）蔗糖溶血試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理

在離子狀態(tài)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生某些變化，RBC與血清免疫球蛋白之間發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，被補(bǔ)體包圍，PNH患者RBC由于膜結(jié)構(gòu)異常，在有補(bǔ)體情況下，容易破壞，發(fā)生溶血。編輯課件（五）蔗糖溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件108試劑

1.蔗糖

2.3.8%枸櫞酸鈉溶液樣本要求枸櫞酸鈉抗凝靜脈血2ml（3.8%枸櫞酸鈉與靜脈血比為1：9）編輯課件試劑編輯課件109

操作程序

將一份枸櫞酸鈉全血加入9份新鮮配制的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸餾水+0.5ml抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血），混合后，置37℃溫箱中孵育30分鐘，離心沉淀。結(jié)果分析

如有溶血蔗糖液為紅色，即為陽(yáng)性。參考值正常為陰性編輯課件操作程序編輯課件110

臨床意義PNH患者蔗糖溶血試驗(yàn)為陽(yáng)性或溶血率增加，可作為PNH的篩選試驗(yàn)。自身免疫性溶血性貧血有的可為陽(yáng)性，白血病、骨髓硬化時(shí)可出現(xiàn)假陽(yáng)性。編輯課件

臨床意義編輯課件111（六）尿含鐵血黃素試驗(yàn)

（Rous試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)原理

當(dāng)血紅蛋白通過腎濾過時(shí)，部分鐵離子以含鐵血黃素的形式沉積于上皮細(xì)胞，并隨尿排出。尿中含鐵血黃素是不穩(wěn)定的鐵蛋白的聚合體，其中的高鐵離子與亞鐵氰化鉀作用，在酸性環(huán)境下產(chǎn)生普魯士藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀。尿沉渣腎小管細(xì)胞內(nèi)外可見直徑1-3μm的蘭色顆粒。

編輯課件（六）尿含鐵血黃素試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)原理編輯課件112試劑1.2%亞鐵氰化鉀水溶液：用時(shí)新鮮配制。

2.3%鹽酸樣品要求新鮮晨尿10ml

編輯課件試劑編輯課件113

操作程序

1.

取新鮮尿離心沉淀，去掉上清液。2.

取等量的2%的低鐵氰化鉀和1/5NHCL混合。3.

將管（2）之酸性低鐵氰化鉀注入尿的沉渣試管中混合，在室溫中靜置10-20分鐘，離心沉淀取沉渣鏡檢。編輯課件操作程序編輯課件114

結(jié)果分析如有蘭色顆粒則為陽(yáng)性。參考值正常人為陰性

臨床意義Rous試驗(yàn)陽(yáng)性提示慢性血管內(nèi)溶血，尿中有鐵排除出。無(wú)論有無(wú)血紅蛋白尿，只要存在慢性血管內(nèi)溶血如PNH，本試驗(yàn)結(jié)果即呈陽(yáng)性，并可持續(xù)數(shù)周。但在溶血初期，雖然有血紅蛋白尿，上皮細(xì)胞內(nèi)尚未形成可檢出的含鐵血黃素，此時(shí)本試驗(yàn)可呈陰性反應(yīng)。編輯課件結(jié)果分析編輯課件115（七）紅細(xì)胞形態(tài)觀察（涂片、染色、鏡檢）

成熟紅細(xì)胞的形態(tài)觀察對(duì)診斷溶血性貧血具有重要意義，它可為本病的診斷提供重要的線索和根據(jù)；如遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥時(shí)可達(dá)20-30%以上，嚴(yán)重者可達(dá)100%；遺傳性橢圓形紅細(xì)胞高達(dá)50-90%；靶形紅細(xì)胞主要見于地中海貧血和其他血紅蛋白病。某些獲得性貧血如自身免疫、感染、理化和機(jī)械因素所致的溶血性貧血，亦可因紅細(xì)胞損害而出現(xiàn)紅細(xì)胞形態(tài)改變，其中最主要的為出現(xiàn)球形紅細(xì)胞和紅細(xì)胞的碎裂現(xiàn)象。編輯課件（七）紅細(xì)胞形態(tài)觀察（涂片、染色、鏡檢）成熟116（八）網(wǎng)織紅細(xì)胞檢驗(yàn)

概述

網(wǎng)織紅細(xì)胞是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間，尚未完全成熟的紅細(xì)胞，因網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘留有多少不等的核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，用堿性染料（如煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)）進(jìn)行染色后呈綠色網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故稱為網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞較成熟紅細(xì)胞體積稍大，直徑為8-9.5μm，在瑞氏染色后的血涂中為嗜多色紅細(xì)胞。新鮮血液中的紅細(xì)胞用核酸熒光染料染色后，在流式細(xì)胞儀或某些以流式細(xì)胞術(shù)為原理的血細(xì)胞分析儀上計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分比和每升血液中的絕對(duì)值。

在一些全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上，還可直接測(cè)量網(wǎng)織紅細(xì)胞的體積，體積分布寬度，血紅蛋白含量等參數(shù)。

編輯課件（八）網(wǎng)織紅細(xì)胞檢驗(yàn)概述編輯課件117參考值

1.

RC百分比：手工法0.5-1.5%

儀量法0.5-2.0%2.

RC絕對(duì)值：手工法

（24-84）×109/L儀量法

（29-75）×109/L3.

RC成熟指數(shù)：10-344.

RC血紅蛋白含量：30.4-35.8Pg（成人）

編輯課件參考值編輯課件118臨床意義網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是反映紅細(xì)胞系統(tǒng)造血旺盛的可靠指標(biāo)，臨床常用相對(duì)百分比反映網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量變化，但易受紅細(xì)胞比容的影響。網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)技術(shù)較相對(duì)百分比更為準(zhǔn)確。網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）能反映骨髓紅系細(xì)胞造血活性，并可用于貧血的進(jìn)一步分類。網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）可以更早期、靈敏的反映紅細(xì)胞血紅蛋白的合成，對(duì)缺鐵性貧血的早期診斷、療效觀察及功能性缺鐵的鑒別有重要意義。編輯課件臨床意義編輯課件1191.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

（1）溶血性貧血時(shí)，骨髓紅系因受到缺氧及大量紅細(xì)胞破壞產(chǎn)物的刺激而增生，未完全成熟的紅細(xì)胞提前釋放到外周血，使網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，常在5%以上。急性溶血性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可高達(dá)50%以上。（2）急性失血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增多，其增高的幅度依賴于出血量的多少，一般在出血后的第2-3天達(dá)峰值，可達(dá)5-15%，出血停止后網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸恢復(fù)正常，臨床上可據(jù)此判斷出血是否停止。編輯課件1.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（1）溶血性貧血時(shí)，骨髓紅系因受到缺氧120（3）缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可正常、輕度升高或減低，當(dāng)給予足夠的鐵劑或VB12及葉酸治療，用藥一周內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞開始上升，在24周后達(dá)高峰，一般增至5%以上，可達(dá)10-20%。隨后網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量逐漸下降，紅細(xì)胞及血紅蛋白則逐漸增高，這一現(xiàn)象稱為網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)，可以作為貧血治療有效的判斷指標(biāo)。編輯課件（3）缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞可正常、輕度升高121（4）再生障礙性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞減少，一般網(wǎng)織紅細(xì)胞常低于0.5%，部分慢性再障患者網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比可為1%左右，但其絕對(duì)值計(jì)數(shù)明顯減低。臨床將網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值低于15×109/L，作為急性再障的診斷指標(biāo)。（5）骨髓病性貧血如急性白血病、淋巴瘤、骨髓瘤患者，骨髓中腫瘤細(xì)胞大量浸潤(rùn)，使紅系細(xì)胞增生受到抑制，網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量明顯減少。編輯課件（4）再生障礙性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞減少，一般網(wǎng)織紅細(xì)胞常低于1222.網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）

RMI增高時(shí)紅系細(xì)胞造血應(yīng)激反應(yīng)的早期信號(hào)，此時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量可能仍處于參考范圍內(nèi)。急性大出血后，58h即可見成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，RMI增大，而網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量常在2天后才會(huì)出現(xiàn)有意義的增高。紅細(xì)胞生成素（EPO）治療后，紅系造血應(yīng)激反應(yīng)隨之而出現(xiàn)，RMI升高可作為骨髓移植后造血功能重建的一項(xiàng)早期觀察指標(biāo)。編輯課件2.網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）

RMI增高時(shí)1233.網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）

缺鐵性貧血的早期診斷：缺鐵性貧血時(shí)，CHr明顯減低。當(dāng)體內(nèi)貯存鐵減低但尚未出現(xiàn)貧血，即處于潛在性缺鐵期時(shí)，CHr先于血紅蛋白和血清鐵等減低。當(dāng)CHr的臨界值（cut-off)<26pg時(shí)，對(duì)缺鐵性貧血診斷的靈敏度可達(dá)100%、特異性為80%。若用足量鐵劑治療后，CHr上升早于其他紅細(xì)胞參數(shù)。EPO治療檢測(cè)：EPO治療后，紅細(xì)胞生成量增多，鐵消耗加劇，若體內(nèi)貯存鐵不足，CHr降低，呈功能性缺鐵狀態(tài)。當(dāng)及時(shí)補(bǔ)充鐵劑后，功能性缺鐵狀態(tài)消失，CHr逐漸恢復(fù)正常。編輯課件3.網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（CHr）缺鐵性貧血的早期診124（九）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)是在血液中加入亞硝酸鹽，人類紅細(xì)胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細(xì)胞的G-6-PD催化成糖旁路使NADP（氧化型輔酶Ⅱ）變成NADPH（還原型輔酶Ⅱ），其脫的氫通過亞甲藍(lán)試劑的遞氫作用而使高鐵血紅蛋白（Fe3+）還原成亞鐵血紅蛋白（Fe2+）,通過比色可知道還原的多少。當(dāng)G-6-PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白的還原率下降。編輯課件（九）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理編輯課件125參考值正常人高鐵血紅蛋白的還原率>75%臨床意義G-6-PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白的還原率下降。中間缺乏（雜合子）為31-74%，嚴(yán)重缺乏（半合子或純合子）<30%。編輯課件參考值編輯課件126（十）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒

光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測(cè)定

原理在G-6-PD和NADP

+存在下，G-6-PD能使NADP+還原成NADPH，后者在紫外線照射下會(huì)發(fā)出熒光。NADPH的吸收峰在波長(zhǎng)340nm處，可通過單位時(shí)間生成的NADPH的量來測(cè)定G-6-PD活性。

參考值及臨床意義正常人有很強(qiáng)熒光。G-6-PD缺乏者熒光很弱或無(wú)熒光。編輯課件（十）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒

光斑點(diǎn)試127（十一）丙酮酸激酶熒光斑點(diǎn)試

驗(yàn)和活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理在二磷酸腺苷（ADP)存在的條件下丙酮酸激酶催化磷酸烯醇丙酮酸轉(zhuǎn)化成丙酮酸，在輔酶Ⅰ還原型(NADH)存在的情況下，丙酮酸被LDH轉(zhuǎn)化為乳酸，若標(biāo)記熒光于NADH上，此時(shí)有熒光的NADH變?yōu)闊o(wú)熒光的NAD.參考值正常人丙