生物大分子相互作用分析技術(shù)(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù))

第六章

生物大分子相互作用分析技術(shù)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院劉蕓第一節(jié)生物大分子相互作用分析的意義第二節(jié)常見的生物大分子相互作用分析方法第三節(jié)生物大分子相互作用分析新進(jìn)展（FRET、SPR）主要內(nèi)容真核生物細(xì)胞

eukaryoticcell原核生物細(xì)胞prokaryoticcell細(xì)胞結(jié)構(gòu)cell引言原核生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)肽聚糖被膜質(zhì)膜引言動(dòng)物細(xì)胞植物細(xì)胞細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核真核生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)引言細(xì)胞中的大分子

MacromoleculesinCellsTheapproximatecompositionofabacterialcell.引言分子水平DNAsequenceProteinsStructureFunction?AllCell第一節(jié)生物大分子相互作用分析的意義DNAPrimarytranscriptmRNAmRNAInactivemRNAproteinnucleuscytoplasmTranscriptionalcontrolPost-transcriptionalcontrolmRNAdegradationcontroltranslationcontrolactiveproteinPost-translationcontrol基因表達(dá)的調(diào)控層次ProteincomplexSignalingnetwork生命機(jī)制蛋白質(zhì)組學(xué)的分類

表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)Quantitativestudyofproteinexpressionbetweensamplesthatdifferbysomevariable

結(jié)構(gòu)基因組學(xué)Goalistomapoutthe3-Dstructureofproteinsandproteincomplexes

功能蛋白質(zhì)組學(xué)Tostudyprotein-proteininteraction,3-Dstructures,cellularlocalizationandPTMsinordertounderstandthephysiologicalfunctionofthewholesetofproteome.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和序列特點(diǎn)蛋白質(zhì)進(jìn)化過程和保守序列蛋白質(zhì)表達(dá)譜蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位及其相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞器或結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)翻譯后修飾情況了解與其相關(guān)聯(lián)的其他細(xì)胞蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)信息的不同層次蛋白質(zhì)同源二聚體(homodimer)蛋白質(zhì)異源二聚體(heterodimer)蛋白質(zhì)多聚體(polymer)蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物(protein-DNAcomplex)蛋白質(zhì)-脂質(zhì)復(fù)合物(protein-lipidcomplex)蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物(protein-RNAcomplex)DNA-DNA復(fù)合物(DNA-DNAcomplex)……生物大分子復(fù)合物的類型第二節(jié)生物大分子相互作用分析技術(shù)

1.研究思路2.分類3.技術(shù)介紹生物大分子相互作用分析研究思路鑒定與目標(biāo)分子相互作用的所有可能大分子詳細(xì)描述其生物功能及相互作用對(duì)其功能的影響鑒定出相互作用且在生理狀態(tài)下得到了驗(yàn)證和合理的解釋GST融合蛋白技術(shù)(GSTpull-down)免疫共沉淀(Immunoprecipitation,Co-IP

)串聯(lián)親和純化(TandemAffinityPurification，TAP)酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeasttwo-hybrid)噬菌體展示(Phagedisplay)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)共定位(Co-localization)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescenceresonanceenergytransfer，F(xiàn)RET)表面等離子共振(surfaceplasmonresonance，SPR)……生物大分子相互作用分析技術(shù)1.GST融合蛋白技術(shù)（GSTpull-downassay）——基于重組蛋白表達(dá)純化技術(shù)的體外分析系統(tǒng)基本原理：是將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過SDS電泳分析,從而證實(shí)兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白,“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。GST：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase)GSTpull-downassayPurificationofproteinGlutathionecolumnGlutathionebeadGSTfusionproteinTagsPull-Down

方法的組成RtagbaitpreyResin——樹脂Bait——誘餌蛋白Prey——捕獲蛋白Tags——標(biāo)簽（GST,His,Flag,HA,MBP）RPull-downexperimentRWashRRAddpreyWashElutionAnalysisBaitPreyControlsRAddpreyWashRRElutionAnalysisSCSDSgel實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路GSTXY谷胱甘肽-瓊脂糖微珠細(xì)胞裂解物

tube4℃下孵育2h

GST融合蛋白GSTXY+實(shí)驗(yàn)流程GSTpull-down應(yīng)用鑒定未知相互作用的蛋白鑒定預(yù)測(cè)的或已知的相互作用GSTpulldown驗(yàn)證兩種已知蛋白質(zhì)（X-Y）的相互作用舉例inputGSTY-GFP+++X-GSTY-GFP105kDAnti-GFPX-GFP+++GSTinputAnti-GFPY-GSTX-GFP2.免疫共沉淀（immunoprecipitation，Co-IP）——非常有效地用于鑒定細(xì)胞內(nèi)生理上的蛋白質(zhì)相互作用的分析技術(shù)

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）：是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

基本原理：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。

GagaroseGagaroseXYGagarose實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路實(shí)驗(yàn)流程SDSProteinA/GSepharose＋＋誘餌蛋白質(zhì)抗體離心誘餌蛋白質(zhì)ProteinA/GSepharose離心傳統(tǒng)方法交聯(lián)方法基礎(chǔ)：細(xì)胞在非變性條件下裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)之間的結(jié)合保持下來。要求：在一系列操作過程中保持蛋白質(zhì)復(fù)合體不變?nèi)秉c(diǎn)：可能檢測(cè)不到細(xì)胞內(nèi)處于動(dòng)態(tài)平衡中的低親和與瞬間的相互作用,存在著免疫球蛋白的污染，需要培養(yǎng)大量的細(xì)胞局限：僅應(yīng)用于從細(xì)胞中溶解出來仍存在于生理復(fù)合物中的蛋白質(zhì)Co-IP

應(yīng)用鑒定已知蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè)鑒定新蛋白質(zhì)間的相互作用免疫共沉淀驗(yàn)證兩種已知蛋白質(zhì)的相互作用Y-GFPY-GFP+X-HAIP:HAcontrolIgGAnti-GFPAnti-GFPAnti-HAY-GFPinput舉例3.串聯(lián)親和純化（TandemAffinityPurification，TAP）a.One-stepaffinitypurificationb.Two-stepaffinitypurification(tandemaffinitypurification)Affinitypurification(immunopurification)——融合了標(biāo)準(zhǔn)生化純化和免疫共沉淀策略的極為有效的快速純化蛋白質(zhì)復(fù)合物的方法串聯(lián)親和純化技術(shù)的優(yōu)勢(shì)與傳統(tǒng)的生化純化方法相比與免疫共沉淀方法相比使用恒定的標(biāo)簽和標(biāo)準(zhǔn)純化條件避免了每次都要設(shè)計(jì)新純化方案的問題多步驟純化降低了細(xì)胞高豐度蛋白質(zhì)以及免疫球蛋白的背景污染雙親和標(biāo)簽：

ProA（葡萄球菌蛋白A的兩個(gè)免疫球蛋白IgG結(jié)合單位）

CBP（鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路實(shí)驗(yàn)流程鈣調(diào)素結(jié)合肽TEV酶切位點(diǎn)在Ca2+離子下結(jié)合TEV酶切用EGTA洗脫靶蛋白結(jié)合于IgG珠子充分洗滌后，在TEV蛋白酶作用下洗脫結(jié)合物鈣離子存在下，將首次洗脫物中的蛋白質(zhì)結(jié)合于鈣調(diào)蛋白包被的珠子上充分洗滌后，加入EGTA洗脫結(jié)合物4.酵母雙雜交（yeasttwo-hybridsystem）——基于在轉(zhuǎn)錄水平上的直接在酵母細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)蛋白質(zhì)之間相互作用的遺傳學(xué)方法基本原理：基于對(duì)真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認(rèn)識(shí)。前者可識(shí)別DNA上的特異序列，并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游，轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用，啟動(dòng)它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。二個(gè)結(jié)構(gòu)域不但可在其連接區(qū)適當(dāng)部位打開，仍具有各自的功能。而且不同兩結(jié)構(gòu)域可重建發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用。酵母雙雜交系統(tǒng)利用雜交基因通過激活報(bào)道基因的表達(dá)探測(cè)蛋白－蛋白的相互作用。典型的真核生長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄因子，如GAL4都含有二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-bindingdomain，BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（transcription-activatingdomain，AD）。酵母雙雜交（yeasttwo-hybridsystem）三個(gè)基本組成部分表達(dá)誘餌蛋白的載體，誘餌即我們感興趣的蛋白，它和DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合。2.表達(dá)靶蛋白的載體，靶蛋白可以是一個(gè)已知的蛋白，也可以是cDNA或基因組文庫(kù)編碼的蛋白。靶蛋白和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域融合。3.一個(gè)或多個(gè)報(bào)告基因（如控制氨基酸合成的基因、大腸桿菌的lacZ基因等），位于DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域識(shí)別的調(diào)控區(qū)的下游。ADDBDgene+reporterMeasurableproduct+DBDbaitADpreyDBDAD實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路Target:未知蛋白或?qū)⒀芯繉?duì)象+DNAbindingdomainBait:已知蛋白+activationdomainTarget與Bait可互換轉(zhuǎn)入同一個(gè)酵母菌中ConstructtargetplasmidandbaitplasmidTransformationScreeningDNAextractionDNAsequencingYeastTwo-HybridAssaynucleushis-leu-trp-MeasurableproductDBDbaittrpADfishleureporterDBDADhisHISlacZ優(yōu)勢(shì)：酵母雙雜交方法的優(yōu)勢(shì)及缺陷采用酵母菌株敏感度高蛋白折疊易于篩選應(yīng)用范圍廣缺陷：核內(nèi)作用假陽性假陰性轉(zhuǎn)化率酵母雙雜交方法的應(yīng)用高靈敏度地檢測(cè)蛋白－蛋白的相互作用確定蛋白相互作用的結(jié)構(gòu)域或重要活性位點(diǎn)尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白尋找具有藥物治療作用的小分子肽尋找控制蛋白相互作用的化合物蛋白相互作用圖譜的繪制舉例酵母雙雜交前準(zhǔn)備工作雙酶切驗(yàn)證21kb5kb3.5kb2kb1.5kbM1M:marker1:pGBKT7-BD-X構(gòu)建誘餌質(zhì)粒誘餌蛋白的表達(dá)X-BDGal4-BD檢測(cè)誘餌蛋白是否有毒性1

2

3Westernblot1.Yeast2.BD-yeast3.X-BD-yeast酵母生長(zhǎng)曲線1.未轉(zhuǎn)化酵母2.BD-酵母3.X-BD-酵母酵母雙雜交結(jié)果SD/-Trp/-Leu-Trp/-Leu/-His/-Ade+3-AT（20mM）舉例SD/-Trp/-LeuGal4-BD+Y-ADX-BD+Y-ADGal4-BD+Gal4-ADX-BD+Gal4-AD

X-β-半乳糖苷酶藍(lán)白斑顯色分析舉例X-BD+Y-ADX-BD+gal4-ADGal4-BD+Y-ADgal4-BD+gal4-AD酵母雙雜交測(cè)序結(jié)果酵母雙雜交得到的陽性克隆子質(zhì)粒經(jīng)過DNA測(cè)序，由NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的BLAST檢索cDNA編碼的蛋白質(zhì)舉例5.噬菌體展示技術(shù)（Phagedisplay）——基于將某個(gè)蛋白與其遺傳信息之間直接聯(lián)系的篩選方法

噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。到目前為止，人們已開發(fā)出了單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)、λ噬菌體展示系統(tǒng)、T4噬菌體展示系統(tǒng)等數(shù)種噬菌體展示系統(tǒng)。特點(diǎn)

該技術(shù)的主要特點(diǎn)是將特定分子的基因型和表型統(tǒng)一在同一病毒顆粒內(nèi)，即在噬菌體表面展示特定蛋白質(zhì)，而在噬菌體核心DNA中則含有該蛋白的結(jié)構(gòu)基因。另外，這項(xiàng)技術(shù)把基因表達(dá)產(chǎn)物與親和篩選結(jié)合起來，可以利用適當(dāng)?shù)陌械鞍讓⒛康牡鞍谆蚨嚯奶暨x出來。UsedforcloningforeigngenesamongotherapplicationsProteinsandpeptidesarefusedtotheCapsid(surface)ofthephageThecombinationofthephageandpeptideisknownasaFusionProtein實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路phagesFilamentousphagesM13FdF1OthersT4λFilamentousphagesInfectmanygram-negativebacteriaCircularsinglestrandedDNAgenomeAbout6.4kb.p.Long,flexibletubestructureabout1μmlongand6.5nmindiameterReproducedandsecretedfrominfectedbacteriawithoutcellkillingorlysis(lysogenicphage)(a)Adenovirus.(b)Rotavirus.(c)Influenzavirus(courtesyofGeorgeLeser).(d)Vesicularstomatitisvirus.(e)Tobaccomosaicvirus.(f)Alfalfamosaicvirus.(g)T4bacteriophage.(h)M13bacteriophage.M13噬菌體顆粒結(jié)構(gòu)M13噬菌體的生活史其裂解周期為：1)吸附(adsorption)2)侵入(entory)3)復(fù)制（生物合成biosynthesis）4)成熟(maturation)5)裝配(assembly)6)釋放(release)絲狀噬菌體的基因及蛋白結(jié)構(gòu)

pIII(406aa,5~8copies)pVIII(50aa,~2700copies)pVI(112aa,5~8copies)載體的插入位點(diǎn)

pIII和pVIII噬菌體展示系統(tǒng)pIII系統(tǒng)pVIII系統(tǒng)拷貝數(shù)少多多肽片段大小大<10個(gè)氨基酸親和力高低適用范圍常用于展示由cDNA和基因組序列編碼的多肽，范圍較廣展示小肽，范圍較窄T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)測(cè)序分析插入序列將噬菌體文庫(kù)鋪在固定的靶蛋白上洗脫未結(jié)合的噬菌體加入大腸桿菌，擴(kuò)增和富集洗脫的噬菌體鋪富集文庫(kù)鋪盤分離單個(gè)克隆3~4輪篩選驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：結(jié)合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程

優(yōu)點(diǎn)：

A.高通量的淘選：將靶標(biāo)分子（抗體）固定在固相載體上，加入噬菌體展示肽庫(kù)（噬菌體的數(shù)量可達(dá)1011PFU），利用抗原-抗體的特異性親和力將與抗體結(jié)合的噬菌體吸附在固相載體上，不能結(jié)合的噬菌體仍在溶液中，可以通過洗滌去除，再將特異結(jié)合的噬菌體洗脫下來，如此反復(fù)數(shù)輪擴(kuò)增、淘選，即可將有用的基因從多達(dá)百萬以上的噬菌體克隆中分離出來。

B.可用于模擬表位的篩選：利用噬菌體展示技術(shù)得到模擬表位的報(bào)道較多模擬表位同樣可誘發(fā)與天然表位相似的特異性免疫反應(yīng)，例如利用乙肝病毒的模擬表位免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的乙肝病毒抗體。

C.易于純化重組噬菌體的純化步驟簡(jiǎn)單、不要求昂貴的試劑與設(shè)備，在一般的實(shí)驗(yàn)室條件下就可以完成。缺點(diǎn)：首先，目前所建的肽庫(kù)容量只能達(dá)到109，要想構(gòu)建大片段的肽庫(kù)很困難。其次，需要解決肽庫(kù)的多樣性問題。第三，少數(shù)多肽由于疏水性過強(qiáng)，或由于影響外膜蛋白的折疊而不能展示在噬菌體表面。噬菌體展示系統(tǒng)的應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)6、細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)共定位（cellularco-localization）——基于細(xì)胞內(nèi)綠色蛋白示蹤技術(shù)的蛋白質(zhì)間相互的研究方法綠色熒光羅丹明染色重疊相差舉例細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)共定位研究?jī)煞N已知蛋白質(zhì)時(shí)空表達(dá)關(guān)系舉例第三節(jié)

生物大分子相互作用分析新技術(shù)

1、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（fluorescenceresonanceenergytransfer，F(xiàn)RET）——能夠?qū)τ诩?xì)胞中的蛋白質(zhì)間相互作用或?qū)ψ饔眠M(jìn)行實(shí)時(shí)原位分析的檢測(cè)方法供體熒光素受體熒光素FRET現(xiàn)象

Binding

NOBindingFRET:TheSize

當(dāng)一個(gè)熒光分子(又稱為供體分子)的熒光光譜與另一個(gè)熒光分子(又稱為受體分子)的激發(fā)光譜相重疊時(shí)，供體熒光分子的激發(fā)能誘發(fā)受體分子發(fā)出熒光，同時(shí)供體熒光分子自身的熒光強(qiáng)度衰減。FRET程度與供、受體分子的空間距離緊密相關(guān)，一般為7～10nm時(shí)即可發(fā)生FRET；隨著距離延長(zhǎng)，F(xiàn)RET呈顯著減弱.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)InteractionXCFPYYFPUVlaserFRETYellowlightemissionYYFPXCFPUVlaserCyanlightemissionDonorAcceptorFRET的能量供體和受體滿足條件：

供體受體的激發(fā)光譜要分得足夠開；供體的發(fā)射光譜與受體的激發(fā)光譜要重疊；供受體的發(fā)射光譜要足夠分開。CFPYFPWavelength(nm)Normalizedintensity(%)GFP綠色熒光蛋白CFP(青色熒光蛋白)(第66位Tyr→Trp)(第203位Thr→Tyr)YFP(黃色熒光蛋白)CFP(λ433nm

/λ476nm)YFP(λ513nm/λ527nm)FRET的能量供體和受體

均相檢測(cè)（無分離和洗滌步驟）實(shí)時(shí)連續(xù)地觀察活細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化FRET技術(shù)的優(yōu)勢(shì)FluorescenceIntensityTime

LigandCy3Cy5ABCIntermolecularDirectIndirectKinaseStep2Step1FRET應(yīng)用的類型FRET應(yīng)用范圍酵母雙雜交系統(tǒng)、噬菌體展示系統(tǒng)所篩選克隆的復(fù)證蛋白質(zhì)—核酸相互作用酶活性分析 蛋白酶、磷酸激酶鈣流檢測(cè)、離子通道研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)研究FRET應(yīng)用的局限性信噪比經(jīng)常不佳，通常為1：1

背景主要來自受體被直接激發(fā)的信號(hào)檢測(cè)儀器的靈敏度、分辨率以及計(jì)算機(jī)影像采集和分析軟件的能力2、表面等離子共振技術(shù)（surfaceplasmonresonance，SPR）——適合于多種類型分子并且無需借助標(biāo)記物可以實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)合物直接實(shí)時(shí)測(cè)定的方法

SPRimager?II

基本原理：基于表面等離子共振（SPR）技術(shù)來實(shí)時(shí)跟蹤生物分子間的相互作用，而不用任何標(biāo)記物。實(shí)驗(yàn)時(shí)先將一種生物分子固定在傳感器芯片表面，將與之相互作用的分子溶于溶液流過芯片表面。檢測(cè)器能跟蹤檢測(cè)溶液中的分子與芯片表面的分子結(jié)合、解離整個(gè)過程的變化。

SPR現(xiàn)象SPRangle450?goldlayerp-Polarized

Light表面等離子共振（SPR）是一種物理現(xiàn)象，當(dāng)入射光以臨界角入射到兩種不同折射率的介質(zhì)界面（比如玻璃表面的金或銀鍍層）時(shí)，可引起金屬自由電子的共振，由于電子吸收了光能量，從而使反射光在一定角度內(nèi)大大減弱。其中，使反射光在一定角度內(nèi)完全消失的入射角稱為SPR角。SPR隨表面折射率的變化而變化，而折射率的變化又和結(jié)合在金屬表面的生物分子質(zhì)量成正比。因此可以通過獲取生物反應(yīng)過程中SPR角的動(dòng)態(tài)變化，得到生物分子之間相互作用的特異性信號(hào)。

SPR角度——掃描曲線SPRangle傳統(tǒng)檢測(cè)原理SPRangleshiftasbasisofmeasurementSPRimaging檢測(cè)原理Fixedangle,fixedwavelengthD%RReflectivitychangeasbasisofmeasurementSPRimager系統(tǒng)RotatingStage流動(dòng)相（含待分析物）Gold-coatedglassSPRchip?p-pollight棱鏡分子探針陣列GWC’s“SPRImaging”

技術(shù)BioarrayTerminologySPRchip?glassgoldattachmentchemistryBiosensorAnalyteProbeMonitoringChanges:DifferenceImages=SA+Bim-PEGn-PEGSASAProbeArrayProbeArray+BiotinT7DifferenceImage:signalduetobindingofBiotinT7toStreptavidinABAB-MonitoringChanges:Image+ChartValueofReal-TimeMonitoringProteinArray,

EndofExperimentAg

SA

ConAddBiotinylatedAntibodyD%RminEnd-pointmeasurementsmissalltheaction優(yōu)點(diǎn)：分子無需標(biāo)記；高通量（蛋白質(zhì)芯片）檢測(cè)對(duì)象類型廣泛可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)檢測(cè)可進(jìn)行相互作用動(dòng)力學(xué)分析SPRimager系統(tǒng)靈活的陣列形式

RapidmethodsdevelopmentManualspotting—nospotting

robotneededSmallprobevolumesSpotReady?,16or25spots SPRchip?1-400spotsHigherdensityarraysHigherthroughputSpottingrobotneeded樣品無需標(biāo)記—particularlyvaluableforproteinbiology1ProteinmoleculeProteinmolecule,labelled避免引入標(biāo)簽帶來的人為干擾Detectinrealtime,measuremolecularaffinitiesMultiplexanalysisfromafewtoafewhundredprobes檢測(cè)對(duì)象廣泛、實(shí)時(shí)并實(shí)現(xiàn)高通量Studyinteractionsinvolving

Proteins Peptides Antibodies DNA,RNA Ligands Cells Viruses etc.

usingthesamedetectionsystem小結(jié)第一節(jié)生物大分子相互作用分析的意義

第二節(jié)常見的生物大