Exp重組質(zhì)粒的酶切

上傳人：s*** IP屬地：上海上傳時(shí)間：2022-12-16 格式：PPTX 頁數(shù)：11 大?。?14.37KB 積分：20 舉報(bào) 版權(quán)申訴

已閱讀5頁，還剩6頁未讀，繼續(xù)免費(fèi)閱讀

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握重組質(zhì)粒的少量酶切、電泳及分析插入DNA片段的大小

二、實(shí)驗(yàn)原理EcoRI&PstI

BamHI單切器具和材料1.5mlEP管,移液器及槍頭(10、50l)恒溫水浴、電泳儀、電泳槽重組質(zhì)粒pMD18-T三、實(shí)驗(yàn)器具、藥品試劑限制酶:BamHI、EcoRI和PstI酶切buffer:10K、10HDNAmarker:-HindⅢ瓊脂糖,1TAE,

上樣buffer1.酶切反應(yīng)步驟

ddH2O于EP管→10buffer→質(zhì)粒DNA→限制酶→混勻,離心5s→37℃,50→65℃水浴10

四、實(shí)驗(yàn)步驟(1)單酶切反應(yīng)BamHI(15U/l)組/4人;30℃,50

成分ddH2O10KBufferDNABamHITotal需量(l)7.52100.520(2)雙酶切反應(yīng)成分ddH2O10HBufferDNAEcoRIPstI需量(l)7.52100.250.25EcoRI&PstI(15U/l)組/4人;37℃,50

2.凝膠電泳檢測

0.8%Aga,30mlTAE,煮沸冷卻至55℃,2lEtBr倒膠,插梳子,凝固202l上樣液+樣品100V電泳,觀察酶切失敗的可能原因

不全切或基本未切緩沖體系不合適酶量過多樣品雜質(zhì)含量高DNA被降解痕量DNase注意事項(xiàng)①吸量要準(zhǔn)確②最后加酶③冰

人人文庫> 全部分類> 教育資料 > 課件下載

1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。