免疫學質(zhì)量控制流程

免疫學質(zhì)量控制流程【目的】保證ELISA檢測結果準確可*,充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點.【該SOP變動程序】本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任?！痉椒ā俊痉治銮百|(zhì)控】1。人員培訓實驗是人操作的，因此檢驗人員需經(jīng)過培訓，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術知識:［1]檢驗項目的基本原理（ELISA原理)；[2］臨床意義;［3]熟悉檢測技巧,了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點；［4]熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；[5］熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。[6]某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關部門組織的專門培訓班，考試合格后持證上崗.【試劑盒選擇】衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑,丙肝試劑，必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產(chǎn)品?！驹噭┖性u價】試劑評價需要有權威的血清考核盤(Panel）進行檢測，價格昂貴，操作繁瑣，一般實驗室不易開展，可以通過以下信息,了解試劑質(zhì)量。1。根據(jù)該試劑生物制品鑒定所的批批檢定報告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；2（基因工程或合成多肽（比例混合或化學合成3。參考室間質(zhì)評報告中對試劑的評價結果,了解不同試劑的質(zhì)控成績。4.根據(jù)權威部門發(fā)布的試劑評價結果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣.【儀器質(zhì)控】為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應建立維護和校正儀器的標準操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱）,洗板機和酶標儀。1。移液器：ELISA加樣量?。?—100ｕl），其準確性直接影響實驗結果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確,一般應在±10％以內(nèi)；2。水浴箱：經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中（允許有±1℃的誤差；32ul,人工扣板時，4。酶標儀：經(jīng)常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的0.001,準確性為5％.酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同.普通的酶標儀在。000~2。000，新型號的酶標儀上限拓寬達900，甚至更高。超出可測上限的A值常以”*”"over"或其它符0.000～20000~2000ELISA時應予注意?！久笜藘x校正程序】1.UV-2201差為濾光片波長精度。一般酶標儀無585nm550nm630nm.450nm濾光片的檢定選用普魯蘭溶液（校正波長為630nm）。2。通道差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標板小孔杯（污染以酶標板架作載體，將其（內(nèi)含200ul0500A8490nm2板條（8條共96200ul（100A）先后置于同一通道，蒸溜水490nm±1.96s）：88200ul490nm3043200ul3490nm（上下午各一次20CV55490nm8±1.96s3（測定波長為490nm,校正波長為585nm），先后于8個通道檢測，每個通道測3次，比較各組之間是否具有統(tǒng)計學差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果?！緲吮镜牟杉捅４妗糠椒ǖ慕Y果,以HRP為標記的ELISA長菌的標本同樣的道理也易產(chǎn)生假陽性，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會產(chǎn)生假陽性反應。不使用用肝素抗凝劑。4IgG4℃5—20℃冰存.5.ELISA1ng/ml【分析中質(zhì)控】ELISA實驗的結果受操作影響很大,每個步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標儀讀數(shù)均應認真負責才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏,強特異的優(yōu)點。因此,應建立實驗項目的標準操作程序（SOP)。1。加樣[1］（加樣槍不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30加二種以上試劑時均需振蕩混勻。[4］如用滴瓶滴加試劑應先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。溫育［1]抗原抗體反應需要在一定溫度下（37°C)，經(jīng)過一定的時間才能達到反應的平衡點［2]ELISA1/3[3]洗滌［1］手工洗滌一般采用浸泡方法：)甩去孔內(nèi)反應液；2)用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去2-35［2］24。顯色[1]HRP催化底物的一步呈色反應,同樣需要一定的時間和溫度，［2］一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度（一般為37°C，10-15分鐘）恒定反應后終止［3］或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達0。2左右使的時間而恒定反應時間.5。酶標儀判讀結果(302。常見的顯色系統(tǒng)有OPDTMBTMBOPD490nm；TMB終止后顯黃色，測定450nm630nm。3。使用雙波長的優(yōu)點可以消除反應板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反應板應用紙吸干后才能置酶標儀中比色,否則吸光度易出現(xiàn)負值或損壞濾光片?！痉治龊筚|(zhì)控】【報告方式】1。定性試驗：國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計算，一律按S/COV方式報告，S為標本A值，COV即CutOff值(或COV)[1]夾心法和間接法以S/COV≥1為陽性；競爭法與中和法以S/COV﹤1為陽性［2］COV的計算公式以試劑盒說明書的為準常見的有：COV=2.1×N(當N0.05。05計)，此公式由P/N>2。1于夾心法。COV=0.5×N，從抑止率公式換算而來，常用于競爭，中和法。COV=N+C（C），用于間接法。COV=C×P+N（C為常數(shù)），性對照測定值要基本恒定。[1]ELISA曲線每次都要和待測標本做在同一塊板上。［2］現(xiàn)有的ELISA確的結果實屬不易?！居涗洝浚?］所有實驗的原始資料均應存檔；所有的記錄均應規(guī)范登記在冊；原始登記表應姓名。[2］如試驗結果對臨床診斷有決定意義,其樣本應保留,至少與病歷保存期一致【定性試驗】ELISAQC，高值質(zhì)控血清人血清A0.05~0.07（"HOOK"效應監(jiān)果，作為QC【定量試驗】ELISA定量試驗常見于腫瘤因子(如），的質(zhì)控方法可參考生化方式?！?即刻性”質(zhì)控】3次有效值時就可以計算RCVX,s