G 試驗(yàn)常見問題分析和解決

G試驗(yàn)常見問題分析和解決這些問題是在使用、操作當(dāng)中發(fā)現(xiàn)的。或者是和臨床溝通反應(yīng)的問題，當(dāng)然我們只是列出一些問題，可能還有一些問題我們沒有涉及到。希望大家在以后的工作當(dāng)中發(fā)現(xiàn)，多和臨床溝通，多和試劑的研發(fā)單位溝通，把G實(shí)驗(yàn)的問題更好的解決。G實(shí)驗(yàn)和GM實(shí)驗(yàn)都是新的技術(shù)，新技術(shù)需要在實(shí)踐中不斷地完善、優(yōu)化、提高。第一，為什麼同一份標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果不一致？指在不同的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果不一致。這與檢測(cè)系統(tǒng)有關(guān)。目前G試驗(yàn)沒有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，只有企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。而不同廠家設(shè)計(jì)生產(chǎn)的檢測(cè)系統(tǒng)（包括試劑和儀器）的性能不同，這里涉及到不同廠家使用的標(biāo)準(zhǔn)品、試劑來源、前處理等，所以同一份標(biāo)本在同的實(shí)驗(yàn)室，使用不同廠家的加成結(jié)果是不同的。檢測(cè)結(jié)果不具有可比性。G實(shí)驗(yàn)?zāi)壳斑€不能作為不同醫(yī)院間通用的指標(biāo)。我們醫(yī)院的檢測(cè)結(jié)果，只能說明這套系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果，不能說那套的。第二，G試驗(yàn)結(jié)果為陽性，提示病人有真菌感染，而真菌培養(yǎng)結(jié)果為陰性，如何解釋？解答：這主要與培養(yǎng)法和非培養(yǎng)法檢測(cè)的原理不同和對(duì)疾病診斷的時(shí)間窗不同有關(guān)。真菌進(jìn)入人體后，會(huì)在較短的時(shí)間內(nèi)釋放出1，3-8-D-葡聚糖，因此，在感染早期就可能呈現(xiàn)陽性結(jié)果。而培養(yǎng)則需要細(xì)菌在體內(nèi)有一定的增殖過程，因此在感染的高峰期培養(yǎng)陽性率高。所以有文獻(xiàn)報(bào)告血漿1，3-8-D-葡聚糖在侵襲性真菌感染癥狀出現(xiàn)前5天就可呈檢出。此外，從方法學(xué)上講，內(nèi)毒素和1，3-8-D-葡聚糖檢查多采用鱟試驗(yàn)方法，方法簡便、快速，而培養(yǎng)則需要時(shí)間，細(xì)菌和真菌的體外生長需要一定的條件，如果條件（例如培養(yǎng)基、溫度、時(shí)間等）掌握不好，則難于培養(yǎng)成功。有文獻(xiàn)報(bào)告，對(duì)侵襲性真菌感染的診斷，血漿1，3-8-D-葡聚糖的診斷特異度和敏感度均高于培養(yǎng)，其ROC曲線表示的話，G實(shí)驗(yàn)的roc曲線面積要大于培養(yǎng)方法。所以一些文獻(xiàn)講，G實(shí)驗(yàn)優(yōu)于培養(yǎng)，更易于真菌的早期感染診斷。第三，就是血培養(yǎng)為陽性，但G實(shí)驗(yàn)是陰性。這從三個(gè)方面考慮。就是病人存在吞噬細(xì)胞功能缺陷，如粒細(xì)胞缺乏癥，真菌進(jìn)入血液但是沒有被吞噬細(xì)胞處理，那么1，3-8-D-葡聚糖沒有釋放出來，或釋放的很少，故G試驗(yàn)陰性。但血里有細(xì)菌，經(jīng)過增值，可能就會(huì)培養(yǎng)出陽性。第二，進(jìn)入血液內(nèi)的真菌數(shù)量很少，但血液是很好的培養(yǎng)基，可以在短期內(nèi)生長，在體外又一個(gè)催養(yǎng)條件，又可以大量生長，所以培養(yǎng)可能是陽性。但是真菌數(shù)量少，1，3-8-D-葡聚糖釋放的少，沒有達(dá)到G試驗(yàn)檢測(cè)最低限。沒達(dá)到G實(shí)驗(yàn)的靈敏度，也可能是個(gè)原因。第三，使用了抑制1，3-8-D-葡聚糖釋放的抗真菌藥物，如棘白菌素類。這個(gè)藥本身就抑制1，3-8-D-葡聚糖釋放?？赡懿椴怀鰜砹?，但真菌還是存在的。第四，病人甲的臨床表現(xiàn)比病人乙的輕，可病人甲的檢測(cè)值比病人乙的檢測(cè)值高。這里有幾方面的問題。第一，病人免疫功能有差異。真菌進(jìn)入人體后，需要在巨噬細(xì)胞作用下，才能將細(xì)胞壁上的1，3-8-D葡聚糖釋放到血液或其他體液中，被檢測(cè)出來。如果病人巨噬細(xì)胞功能減低，真菌不能被吞噬破壞，細(xì)胞壁上的1，3-8-D葡聚糖不能釋放出來，也就無法檢測(cè)出來。這時(shí)病人病情可能更為嚴(yán)重。第二，疾病的不同階段，1，3-8-D葡聚糖水平是有化的。一般來說，隨著抗真菌藥物的治療，感染的控制，1，3-8-D葡聚糖水平也會(huì)相應(yīng)下降。因此，如果兩個(gè)病人處于疾病的不同階段，其檢測(cè)結(jié)果是不可比較的。此外，不同的真菌，G水平也不同。如念珠菌感染者血清平均G值為755pg/mL，曲霉感染者平均G值為1103pg/mL，鐮刀霉感染者平均G值為1652pg/mL，接合菌（包括毛霉、根霉）細(xì)胞壁不產(chǎn)G，感染接合菌的患者血清G值為0，隱球菌細(xì)胞壁外有莢膜包裹，因此不易檢測(cè)到細(xì)胞壁上的抗原，但是在一定條件下莢膜自身可釋放出極微量的G到血清中，所以檢測(cè)值可大于0，但仍小于陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于口腔和其他器官的真菌定植者，G值也較低，一般不超過20pg/mL（或者其他陽性診斷值）。第五，為什么強(qiáng)調(diào)G實(shí)驗(yàn)要連續(xù)檢測(cè)。因?yàn)?，3-8-D葡聚糖水平是隨著疾病過程而變化的。因此，在感染的最早期，細(xì)菌或真菌剛剛進(jìn)入人體，數(shù)量較少，因此檢測(cè)不出來?；蛘哂捎诓∪藱C(jī)體免疫功能的變化，1，3-8-D葡聚糖的產(chǎn)生速度和量也有變化，或者由于某些干擾因素存在造成假陽性或假陰性結(jié)果。因此，不能只靠一次檢測(cè)結(jié)果就判定有無感染，我國許多有關(guān)侵襲性真菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn)中都要求2次檢測(cè)結(jié)果均大于診斷值才有診斷意義。所以檢測(cè)應(yīng)覆蓋整個(gè)疾病過程，特別是在疾病早期更應(yīng)重視連續(xù)檢測(cè)，以免出現(xiàn)漏診或誤診。第六，為什麼G試驗(yàn)的重復(fù)性不理想？G試驗(yàn)的重復(fù)性不理想是一個(gè)普遍的問題。從最初的反應(yīng)機(jī)理上來考慮。G實(shí)驗(yàn)的結(jié)果取決于1，3-8-D葡聚糖。這個(gè)反應(yīng)易受葡聚糖的分子量、分支度，特別受到三維結(jié)構(gòu)的影響。研究發(fā)現(xiàn)平均分子量在6.8-216.0kDa之間的1，3-8-D葡聚糖，隨其分子量增加和分支度減少，激活G因子的能力越強(qiáng)；分子量越高或分支度越低，激活G因子的能力越強(qiáng)。結(jié)果陽性越高。分子量在6.75-27.50kDa之間的1，3-8-D葡聚糖對(duì)G因子有抑制作用。國外有人發(fā)現(xiàn)單股螺旋的1，3-8-D葡聚糖在G因子反應(yīng)中起著決定性作用；他們發(fā)現(xiàn)三股螺旋的1，3-8-D葡聚糖不與G因子反應(yīng)。故該法測(cè)定之前常用NaOH對(duì)1，3-8-D葡聚糖進(jìn)行處理，使其轉(zhuǎn)化為單股螺旋的1，3-8-D葡聚糖，已減少實(shí)驗(yàn)誤差。所以前處理是很重要的。另外會(huì)不會(huì)真菌釋放的1，3-8-D葡聚糖發(fā)生上述變化，尚不清楚。也就是一個(gè)真菌進(jìn)入體內(nèi)感染，從細(xì)胞壁釋放1，3-8-D葡聚糖的分子量和分支度在釋放當(dāng)中有什么變化，是不是單股螺旋等等，并不清楚。1，3-8-D葡聚糖的分子量和分支度變化對(duì)這個(gè)實(shí)驗(yàn)可能是有影響的。第七，哪些抗菌藥物對(duì)G試驗(yàn)有正干擾現(xiàn)象。文獻(xiàn)報(bào)告有磺胺類、阿莫西林/克拉維酸、頭抱類藥物藥物。頭抱菌素類中可能涉及頭抱哌酮鈉、頭抱美唑鈉、頭抱米諾、頭抱西丁、頭抱噻肟鈉、頭抱噻肟和頭抱哌酮/舒巴坦鈉。此外厄他培南也可能造成假陽性。如果一個(gè)病人在檢測(cè)的時(shí)候正在使用上述藥物，可能出現(xiàn)假陽性。而上述藥物是廣泛使用的藥物。具體哌拉西林/他唑巴坦是否會(huì)影響G實(shí)驗(yàn)假陽性，尚不清楚，但對(duì)GM試驗(yàn)有正干擾。第八、患者使用可引起假陽性的血液制品，含真菌成分的抗腫瘤藥物或者透析治療及手術(shù)后，多長時(shí)間檢查G試驗(yàn)可避免假陽性？上面都是引起假陽性的原因，如使用可引起假陽性的血液制品，含真菌成分的抗腫瘤藥物或者透析治療、手術(shù)。具體情況要具體分析。血液制品中白蛋白和免疫球蛋白對(duì)G試驗(yàn)影響很大。文獻(xiàn)報(bào)告，靜脈輸入IgG10g可使血漿G濃度升高達(dá)300pg/ml以上，這足以誤診為真菌感染。血漿G的平均半衰期為20h，推斷由血漿引起的G水平增高，在1周后復(fù)查G濃度應(yīng)明顯下降或轉(zhuǎn)陰。這與上述物質(zhì)的代謝有關(guān)，抗菌素一般48小時(shí)后代謝完成或排出體外，但是血漿制品可能需要一周或更長的時(shí)間。第九、某些細(xì)菌的敗血癥也可引起G試驗(yàn)出現(xiàn)假陽性。原來文獻(xiàn)只籠統(tǒng)的說，細(xì)菌引起的敗血癥可引起G試驗(yàn)出現(xiàn)陽性。尤其是鏈球菌敗血癥。敗血癥患者，特別合并全身炎癥反應(yīng)綜合征的病人，由于機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生許多炎癥因子，如IL-6和IL-8，這些炎癥因子可參與試驗(yàn)過程，引起假陽性結(jié)果?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，包括金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌感染以及凝固酶陰性的葡萄球菌時(shí)可能出現(xiàn)G試驗(yàn)假陽性結(jié)果。甚至部分支原體、EB病毒亦出現(xiàn)假陽性。文獻(xiàn)報(bào)道，在重癥監(jiān)護(hù)病房住院時(shí)間超過14d的患者多伴有不同程度血漿G濃度升高，而這些患者并不一定為IFI。在ICU住院的時(shí)候會(huì)感染一些其他的細(xì)菌，其他的細(xì)菌造成了G實(shí)驗(yàn)的增高。第十、對(duì)于送檢時(shí)間，說明書要2小時(shí)送檢。是不是一定要嚴(yán)格的送檢時(shí)間呢？實(shí)驗(yàn)證明，標(biāo)本中的1，3-8-D葡聚糖在常溫情況下會(huì)降解，甚至消失，所以規(guī)定標(biāo)本采集后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)開始檢測(cè)，否則1,3-8-D葡聚糖降解，會(huì)造成假陰性結(jié)果。2小時(shí)以后，3小時(shí)行不行，到底1，3-8-D葡聚糖降解到什么程度，要需做實(shí)驗(yàn)。十一、抗真菌藥物對(duì)G試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果有什麼影響？影響是明確的，但不同的抗真菌藥物對(duì)G試驗(yàn)的影響是不同的。如兩性霉素B脂質(zhì)體能夠作用于真菌細(xì)胞壁成分甘露聚糖和甘露聚糖蛋白質(zhì)復(fù)合體使之結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定以致胞壁破壞，胞壁破壞可能造成G值一過性增高。所以使用兩性霉素B脂質(zhì)體可能造成G值增高。但同樣的抗真菌藥物，如卡泊芬丁為葡聚糖合成酶抑制劑，非競(jìng)爭(zhēng)性地抑制真菌細(xì)胞壁的（1,3）-8-D-葡聚糖的合成，可以造成假陰性結(jié)果。第十二、在實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，能看到標(biāo)本的反應(yīng)曲線，這是手工繪制的。左邊是陰性的結(jié)果，右邊是陽性的結(jié)果。這條線是他的測(cè)光率，降到百分之90的。陰性的結(jié)果沒有濁度變化，處在一個(gè)水平的線上。陽性標(biāo)本有濁度，測(cè)光率從100%降到90%。這個(gè)時(shí)間點(diǎn)，就是我們判斷的標(biāo)準(zhǔn)。所以從曲線上能判斷陰性、陽性的情況。這就是反應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)，時(shí)間點(diǎn)從標(biāo)本曲線上查出它的反應(yīng)度是多少。這是一個(gè)實(shí)際的反應(yīng)，曝光率從100%降到90%的時(shí)候。第十三、我們看這個(gè)曲線，它陡然下降。正常的情況下出現(xiàn)s性或水平型的下降。這說明這個(gè)地方大量的葡萄糖進(jìn)入，陡然下降，說明實(shí)驗(yàn)過程污染。第十四、這個(gè)曲線，有一段升值，100%的曝光率，有升值是不對(duì)的，然后再下降。有兩個(gè)原因。一、干粉反應(yīng)主劑沒有完全溶解，儀器默認(rèn)插入反應(yīng)管時(shí)所掃描到的透光率為100%，大顆粒沉淀使檢測(cè)標(biāo)本上部變澄清，有一個(gè)過程，透光率增加，出現(xiàn)曲線上揚(yáng)?；蛞毫课⒉蛔?，或者平底試管內(nèi)有氣泡。曲線會(huì)有一段時(shí)間上揚(yáng)，最終恢復(fù)正常形態(tài)。第十五、這個(gè)曲線往上走，不往下。由于加樣量嚴(yán)重不足。加量不夠時(shí)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，液面降低，儀器采集不到反應(yīng)進(jìn)行中透光率的變化。已經(jīng)下降到光線穿透以外了，所以掃描不到曝光線。第十六、這也是一直往上走?？赡苁亲陨頋岫?，如黃疸標(biāo)本、血紅蛋白等造成的。第十七、總的走勢(shì)是對(duì)的，但在這里出現(xiàn)一個(gè)小的波動(dòng)，可能是由于開關(guān)儀器蓋子過程中，自然光照進(jìn)反應(yīng)孔內(nèi)引起。所以在這個(gè)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，盡量不要讓光線直接照射到儀器上。還有一點(diǎn)，做標(biāo)本的時(shí)候，要一個(gè)一個(gè)加，一個(gè)標(biāo)本正在反應(yīng)當(dāng)中，你再加第三個(gè)標(biāo)本的時(shí)候，前面的標(biāo)本在反應(yīng)當(dāng)中，加管的時(shí)候，如果放的很用力，儀器震動(dòng)可能影響曝光率。所以操作要謹(jǐn)慎。上面我們是對(duì)反應(yīng)曲線走勢(shì)的分析，從曲線走勢(shì)上就可以發(fā)現(xiàn)污染、加樣不足啊等問題。所以認(rèn)真觀察反應(yīng)曲線對(duì)及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題、解決問題是有幫助的。不看熒光屏，等做完后發(fā)現(xiàn)問題再找原因是很難得。不如在實(shí)驗(yàn)時(shí)，看著曲線是否正常走勢(shì)。第十八、哌拉西林/他唑巴坦對(duì)GM試驗(yàn)干擾程度有多大？哌拉西林-他唑巴坦是一種半合成青霉素，青霉菌類含有GM。？？文獻(xiàn)報(bào)道使用哌拉西林/他佐巴坦導(dǎo)致假陽性達(dá)21.7%。因此有研究建議，為避免GM假陽性導(dǎo)致對(duì)侵襲性真菌感染的錯(cuò)誤判斷，對(duì)骨髓抑制導(dǎo)致的發(fā)熱性中性粒細(xì)胞減少癥患者，應(yīng)限制應(yīng)用他唑巴坦藥物。當(dāng)然這是不可能的，藥物影響實(shí)驗(yàn)就不去用，是不對(duì)的。這是從檢驗(yàn)的角度來說。臨床上用不用，取決于臨床是否需要。但要明確，這藥物肯定會(huì)影響實(shí)驗(yàn)，出現(xiàn)假陽性。要排除藥物的影響。有文獻(xiàn)報(bào)道在停止使用哌拉西林-他唑巴坦6小時(shí)后在檢測(cè)血清中GM可轉(zhuǎn)為陰性。這提出了使用藥后多長時(shí)間再去做GM實(shí)驗(yàn)，起碼要6小時(shí)的意見。十九、現(xiàn)在有些單位在進(jìn)行G試驗(yàn)質(zhì)控時(shí)，直接使用廠家提供的均值和標(biāo)準(zhǔn)差是否合適？這個(gè)在第三講，我就說過了。這是不能的。因?yàn)閺S家和你使用的試驗(yàn)條件不同。要重新測(cè)定。第二十、為什麼質(zhì)控品必須和試劑同一批號(hào)？上一講我們也說過了。這是G試驗(yàn)的一個(gè)特點(diǎn)。因?yàn)槊颗a(chǎn)的試劑敏感度不同，每次實(shí)驗(yàn)的G因子不同。取決于G因子的活性?；钚圆煌?,3-8-D葡聚糖對(duì)它的反應(yīng)結(jié)果不同。而質(zhì)控定值是建立在具體反應(yīng)體系上的，不同批號(hào)間的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)是有差異的。所以每批試劑一換，標(biāo)準(zhǔn)曲線要換，質(zhì)控品也要換。二十一、標(biāo)準(zhǔn)曲線能不能代替質(zhì)控品？當(dāng)然可以。國外做G實(shí)驗(yàn)不做實(shí)驗(yàn)質(zhì)控。他們就做標(biāo)準(zhǔn)曲線。每天都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以確保當(dāng)天檢測(cè)結(jié)果正確可靠。標(biāo)準(zhǔn)品肯定要比質(zhì)控品貴，質(zhì)控品曲線要一條。標(biāo)準(zhǔn)品起碼要3條。第二十二、為什麼質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)在控，而病人的測(cè)定結(jié)果仍有問題？這要看你在建立最初質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)時(shí)是否先做了標(biāo)準(zhǔn)曲線（也就是定標(biāo)）。如果你沒有定標(biāo)，就進(jìn)行20個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的測(cè)定，那這些數(shù)據(jù)很可能不正確。無論是標(biāo)準(zhǔn)曲線，還是質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，還是病人樣本的檢測(cè)都與試劑有關(guān)。試劑一變，其他結(jié)果會(huì)跟著變。所以，試劑更換批號(hào)，標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)都要重新建立。二十三、當(dāng)日一批試驗(yàn)結(jié)果中出現(xiàn)數(shù)個(gè)結(jié)果與臨床診斷不符合，如何解決？這很好解決。（1）先看當(dāng)日質(zhì)控結(jié)果是否有失控？如果質(zhì)控失控了，那整個(gè)實(shí)驗(yàn)就失敗了，要重做。（2）檢查操作過程有無差錯(cuò)？特別要看標(biāo)本的反應(yīng)曲線是不是正常的走勢(shì)。（3）檢查試劑有無過期或變質(zhì)？是否使用不同批號(hào)的試劑？（4）檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線是否合格？判斷檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線是否合格，要看相關(guān)的系數(shù)。是否大于0.98。如果標(biāo)準(zhǔn)曲線不正確，但結(jié)果不可能正確。（5）了解病人的臨床背景，如病程、是否使用抗真菌藥物治療等。最后，找廠家工程師檢查是否是試劑、儀器的問題。二十四、G實(shí)驗(yàn)是檢查真菌1，3-8-D葡聚糖的嘴主要的方法。但G實(shí)驗(yàn)的確存在一些問題。那有沒有更好的方法客服G實(shí)驗(yàn)的先天不足呢？現(xiàn)在有一些研究在做。比如阿樂法-半乳糖神經(jīng)酰胺可高親和地與1，3-8-D葡聚糖結(jié)合。國外有人建立一種以阿樂法-半乳糖神經(jīng)酰胺包被物，鼠抗1，3-8-D葡聚糖單克隆抗體的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)系統(tǒng)，檢測(cè)生物體液中1，3-8-D葡聚糖。發(fā)現(xiàn)1，3-8-D葡聚糖含量低于0.8ng/ml時(shí)線性良好，并具有良好的回收率，相對(duì)于鱟試驗(yàn)來講，受干擾物質(zhì)影響更小。但本法還有一些問題。就是鼠抗1，3-8-D葡聚糖是否能廣譜識(shí)別各種真菌1，3-8-D葡聚糖還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。單抗有多高，能覆蓋多少真菌，1，3-8-D葡聚糖。1，3-8-D葡聚糖是多糖。三維構(gòu)型有不同的？這個(gè)單抗是針對(duì)哪一個(gè)的，是個(gè)窄的還是寬的單抗，還需要驗(yàn)證。二十五、無臨床癥狀，但GM的陽性結(jié)果，如何解釋？我們講過谷物制制品，如奶油、甜點(diǎn)、母乳都有高濃度的GM。另外，腸道屏障破壞后，腸道定植真菌或食物中的GM可以進(jìn)入血液。而許多非侵襲性真菌病人可能存在這一問題。還有藥物，哌拉西林/他唑巴坦，阿莫西林/克拉維酸可檢出GM。二十六、為什麼GM試驗(yàn)對(duì)新生兒和兒童檢測(cè)意義有限？主要因?yàn)樾律鷥耗c道內(nèi)有大量的雙歧桿菌有關(guān)，雙歧桿菌的脂膜酸可與GM發(fā)生交叉反應(yīng)；另外配方奶中含有較高濃度的GM，可能與通過尚未發(fā)育完整的腸黏膜進(jìn)入循環(huán)而造成假陽性結(jié)果。所以GM實(shí)驗(yàn)?zāi)壳安煌扑]在新生兒中使用。二十七、GM試驗(yàn)結(jié)果與檢測(cè)對(duì)象是否有關(guān)？這個(gè)實(shí)驗(yàn)問的很好。G實(shí)驗(yàn)雖然是一個(gè)曲美真菌的重要診斷試驗(yàn)。但與發(fā)病率有關(guān)系。對(duì)27個(gè)研究的薈萃分析，如果曲霉菌的流行率5%和20%的兩地區(qū)，陽性預(yù)測(cè)值分別為31%和69%。如果流行率5%的話，陽性預(yù)測(cè)值只有30%。如果流行率高的話，陽性預(yù)測(cè)值就有69%。所以對(duì)不同的病房，如血液科、骨髓移植的GM實(shí)驗(yàn)意義就很大。如果在icu的病人可能就差一點(diǎn)。現(xiàn)在GM實(shí)驗(yàn)注意用著血清里，當(dāng)然也可用于腦脊液、肺泡灌洗液和尿液，但cut-off值、敏感度和特異度尚未得到FDA批準(zhǔn)認(rèn)可。我們國家還沒有開展這方面的工作。二十八、還有哪些診斷真菌感染的非培養(yǎng)方法？現(xiàn)在除了G實(shí)驗(yàn)和GM實(shí)驗(yàn)外，還有念珠菌IgG、IgM抗體；曲霉菌IgG、IgM抗體；這些方法就是ELISA方法。正在推出?？赡芤院髸?huì)上市。最后我們談一下侵襲性真菌感染生化免疫學(xué)檢查的進(jìn)展。G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)和隱球菌抗原。這三個(gè)實(shí)驗(yàn)都列入到國際、國內(nèi)侵襲性真菌感染標(biāo)準(zhǔn)的診斷當(dāng)中。必須使用的依據(jù)。他們各有側(cè)重。G實(shí)驗(yàn)主要涵蓋了念珠菌或曲霉菌感染，對(duì)曲霉菌、隱球菌無效的。GM實(shí)驗(yàn)主要對(duì)曲霉菌。而隱球菌抗原主要對(duì)隱球菌。所以對(duì)一個(gè)臨床上不明確是哪種的真菌感染，要用聯(lián)合診斷。建議把這三項(xiàng)作為真菌三項(xiàng)聯(lián)合檢查。如果G實(shí)驗(yàn)陽性，GM實(shí)驗(yàn)陽性，隱球菌抗原陰性，那就念珠菌或曲霉菌。G實(shí)驗(yàn)陰性，GM實(shí)驗(yàn)陽性，隱球菌陰性，那就是曲霉菌。如果G實(shí)驗(yàn)陰性，GM實(shí)驗(yàn)陰性，隱球菌陽性，那就隱球菌。這三項(xiàng)聯(lián)合檢查對(duì)常見的念珠菌、曲霉菌、隱球菌感染做一個(gè)大致的了解。近年來，有關(guān)真菌抗體的檢查也引起人們的重視。對(duì)一個(gè)傳染病要做雙份血清等?；蛘咧苯硬閕gm抗體，這是在傳染病上我們都熟悉的實(shí)驗(yàn)。這張圖是反應(yīng)了真菌的感染，進(jìn)入體內(nèi)一些最初的igm情況，一般傳染病igm水平，感染后兩周左右達(dá)到高峰，以后隨著病情的好轉(zhuǎn)就下降了。Igg呢一般在一個(gè)月以后增高。再次感染的時(shí)候，igg的反應(yīng)比igm強(qiáng)烈。這是機(jī)體感染病原微生物抗體產(chǎn)生過程。真菌也是這樣的規(guī)律。長期以來，人們認(rèn)為抗體檢查真菌是不可能的或意義不大的，為什么呢？因?yàn)槿藗冋J(rèn)為真菌是健康人腔道粘膜的定植菌，因此，健康人會(huì)有抗體存在。檢查還有什么意義呢？2、抗體產(chǎn)生依賴于正常的免疫機(jī)能，而IFI患者多處于免疫缺陷狀態(tài)，如艾滋病。無法正常產(chǎn)生抗體，或產(chǎn)生遲緩。所以對(duì)IFI患者的檢測(cè)可能造成假陰性結(jié)果。沒有意義。3、按照微生物感染后抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律，至少需要2周才能產(chǎn)生IgM抗體，IgG抗體更晚。不適用于早期診斷。這三個(gè)方面的看法，對(duì)真菌抗體的試劑的研發(fā)和應(yīng)用受到人們理念上的抵觸。但是，最近10年的研究表明，上述觀點(diǎn)可能是錯(cuò)誤的。1、定植者抗體水平很低，而感染者抗體水平明顯增高，完全可以通過臨界值加以區(qū)分。什么水平是定值，什么水平是感染，完全可以通過一個(gè)調(diào)查來確定的。特別是選擇那些只有在侵襲性感染時(shí)才釋放出來的優(yōu)勢(shì)抗原，優(yōu)勢(shì)抗原在定值者、潛伏是不在的，就可以避免定植所引起的假陽性。目前已經(jīng)知這類抗原有多種，如烯醇化酶。2、免疫缺陷的患者仍可以產(chǎn)生達(dá)到診斷水平的抗體濃度。2006年西班牙Pitarch將白念珠菌細(xì)胞壁成分用二維電泳技術(shù)分離，進(jìn)行免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究，用侵襲性念珠菌病人血清和對(duì)照血清分別與之反應(yīng)，篩選出與患者血清發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)的免疫優(yōu)勢(shì)抗原。這些抗原主要有：烯醇化酶、磷酸甘油酸酯激酶、蛋氨酸合酶、0-1，3葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶和果糖二磷酸醛縮酶。IC患者可能針對(duì)這些抗原產(chǎn)生抗體。在嚴(yán)重的免疫抑制患者如肝移植、干細(xì)胞移植和HIV患者也可產(chǎn)生這些抗體。3、對(duì)真菌的感染過程不想對(duì)細(xì)菌和病菌那樣清楚。