核酸類藥物的生產(chǎn)課件

第五節(jié)核酸類藥物的生產(chǎn)內(nèi)容提要五、核酸類結(jié)構(gòu)改造藥物的制備二、核酸類藥物的生產(chǎn)方法一、核酸類藥物的分類三、DNA和RNA的制備四、肌苷的制備2堿基：腺嘌呤A核苷：腺苷核苷酸：腺苷酸AMP(腺苷一磷酸)ADP(腺苷二磷酸)ATP(腺苷三磷酸)DNARNA3（二）核酸類藥物的分類具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)

核酸類藥物的分類自然結(jié)構(gòu)核酸類物質(zhì)的類似物和聚合物51、具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)

ATP、GTP、CTP、UTP、肌苷。ATP：用于心肌炎、心肌梗死、心力衰竭及動脈或冠狀動脈硬化的治療或輔助治療。肌苷：用于急慢性肝炎、肝硬化、白細胞減少、血小板減少等。62、自然結(jié)構(gòu)核酸類物質(zhì)的類似物和聚合物疊氮胸苷、阿糖腺苷、阿糖胞苷等。治療病毒、腫瘤、艾滋病的重要藥物。7二、核酸類藥物的生產(chǎn)方法直接提取法1水解法（酶水解、堿水解、酸水解）2化學合成法3酶合成法4微生物發(fā)酵法58堿水解用堿水解RNA可產(chǎn)生2’、3’-混合核苷酸

2’、3’-混合核苷酸在醫(yī)藥上有它的特殊用途，對血小板減少，白血球減少癥和癌癥化療后升白血球均有較好療效。10利用補救合成途徑為人體提供脫氧核苷酸，參與人體核酸代謝，從而具有促進細胞生長、修復受損細胞及改變機體代謝的作用。用于急﹑慢性肝炎白細胞減少癥，血小板減少癥及再生障礙性貧血等的輔助治療。12DNA的粗提取1、準備材料將新鮮菜花和體積分數(shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24h。2、取材稱取30g菜花，去梗取花,切碎。3、研磨將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。4、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液倒入塑料離心管中進行離心,用1000r/min的旋轉(zhuǎn)頻率，離心25min，取上清液放入燒杯中，取上清液。5、加冷酒精將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數(shù)為95%的冷酒精溶液中，并用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。14DNA的鑒定1、配制二苯胺試劑取0.1mLB液，滴入到10mLA液中，混勻。2、鑒定取4mLDNA提取液放入試管中，加入4mL二苯胺試劑，混勻后觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100℃)加熱10min。在加熱過程中，隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現(xiàn)淺藍色)。15農(nóng)業(yè)生產(chǎn)化妝品抗癌、抗病毒關(guān)節(jié)炎肝炎、心臟病RNA的作用（二）RNA的制備16BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)

【性

狀】

本品為白色或類白色凍干塊狀物或粉末，易溶于水。【藥理毒理】

本品具有提高機體細胞免疫功能和抑瘤作用?！具m

應(yīng)

癥】適用于胰腺癌、肝癌、胃癌的輔助治療，對乙型肝炎的輔助治療有較好的效果。本品亦可用于其他免疫機能低下引起的各種疾病。BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)

BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)

BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)

171、制備RNA的材料來源

主要采用酵母、面包酵母等。183、RNA的提取實例啤酒酵母是提取RNA的很好的資源。取100g壓榨啤酒酵母，加入230mL0.33mol/L的Na0H溶液，20℃以下緩慢攪拌30min。用6mol/LHCl調(diào)至pH7，攪拌15min，離心得清液255mL。冷至10℃以下6mol/LHCl調(diào)pH2.5，置冷過夜，離心得RNA1.8g。20肌苷的背景知識【質(zhì)量標準】：收載于《中華人民共和國藥典》2005年版二部205頁21洋地黃肌苷的背景知識23肌苷是由次黃嘌呤與核糖結(jié)合而成。次黃嘌呤可由腺嘌呤(A)脫氨形成，是嘌呤衍生物。肌苷的背景知識24精制菌種菌種擴大培養(yǎng)發(fā)酵提取吸附洗脫肌苷控制要點2、肌苷生產(chǎn)的控制要點26菌種變異芽孢桿菌

2、肌苷生產(chǎn)的控制要點27(2)種子擴大培養(yǎng)流程28發(fā)酵50L發(fā)酵罐，(32±1)℃,

93h500L發(fā)酵罐,(32±1)℃,75h20000L發(fā)酵罐，(35±1)℃,83h發(fā)酵培養(yǎng)基：淀粉水解糖、干酵母水解液、豆餅水解液、尿素、硫酸銨、硫酸鎂、氯化鉀、磷酸氫二鈉、有機硅油303溶解氧和CO2的影響1溫度的影響4泡沫的影響2pH的影響發(fā)酵過程要注意31(4)提取、吸附、洗脫(5)精制32（一）三氮唑核苷的制備

[別名]

利巴韋林，病毒唑，為廣譜抗病毒藥物。

[抗病毒機制]

抑制多種DNA和RNA病毒的復制，但對病毒無直接的滅活作用。[抗病毒譜]如甲型和乙型流感病毒、單純皰疹病毒、麻疹病毒、乙型腦炎病毒、流行性出血熱病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。

331、化學合成法

1972年，美國一家公司首次化學合成法研制成功。

鳥苷核糖-1-磷酸核糖-1-磷酸+三疊氮羧基酰胺(TCA)三氮唑核苷

乙酸酐，冰醋酸雙-對硝基苯酚-磷酸酯氨解342、發(fā)酵法(1)35(2)培養(yǎng)基斜面活化培養(yǎng)基：葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏.，氯化鈉、瓊脂，pH7.0-7.2種子培養(yǎng)基：葡萄糖、味精、尿素、蛋白胨、酵母膏、玉米漿，pH7.0-7.2發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖、硫酸銨、酵母粉、味精、豆餅水解液、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、硫酸錳、碳酸鈣，pH7.0-7.236 TCA添加量為10g/L(3)發(fā)酵最適條件37MnSO4的最佳添加量為10mg/L38KH2PO24的最佳添加量為6mg/L39胞二磷膽堿，為卵磷脂生物合成必需的輔酶。主要用于急性顱腦外傷和腦手術(shù)后的意識障礙1954年，Kennedy博士等人發(fā)現(xiàn)了胞二磷膽堿1963年，日本武田公司首次開發(fā)，用于治療意識障礙獲得成功，商品名Nicholin，譯名尼可林。1973年，國內(nèi)試制成功。（二）胞二磷膽堿的制備401、發(fā)酵法菌種