溶血性貧血的試驗檢測課件

臨床醫(yī)學五年制

實驗診斷學續(xù)薇教授博士生導師

1臨床醫(yī)學五年制

實驗診斷學1第二節(jié)溶血性貧血的實驗室檢測22概述定義:是由于各種原因使紅細胞生存時間縮短、紅細胞破壞加快、紅細胞破壞增多，超過骨髓的代償造血能力時所發(fā)生的一類貧血。溶血性疾?。汗撬柙煅δ苣軌虼鷥敿t細胞破壞。3概述3按部位分類：

血管內(nèi)溶血-紅細胞破壞在血液中

血管外溶血-紅細胞破壞在單核巨噬細胞系統(tǒng)

原位溶血-紅細胞破壞在骨髓中4按部位分類：4按原因分類：

膜缺陷酶缺陷血紅蛋白缺陷免疫因素物理因素化學因素感染因素脾功能亢進內(nèi)在因素

外在因素5按原因分類：內(nèi)在因素外在因素5一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測（二）血清結(jié)合珠蛋白檢測（三）血漿高鐵血紅素清蛋白檢測（四）含鐵血黃素尿試驗(Rous試驗)（五）紅細胞壽命測定6一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測6原理

大量Hb游離在血漿中大量Hb小分子>腎閾值與珠蛋白結(jié)合后被運輸?shù)礁闻K分解一部分Hb轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞FHb＋白蛋白Hb被腎小管上皮細胞重吸收Hb在血漿中游離紅細胞破壞2、血紅蛋白尿高Hb血癥4、高鐵血紅素白蛋白（+）3、血漿中結(jié)合珠蛋白（減低）1、血漿游離Hb測定(增高）在細胞內(nèi)代謝成含鐵血黃素6、血結(jié)素減低結(jié)合珠蛋白耗盡時剩余的Hb與血結(jié)素結(jié)合5、尿含鐵血黃素試驗(+)隨細胞脫落至尿中，鐵染色（＋）7原理二、紅細胞膜缺陷的檢測（一）紅細胞滲透脆性試驗（EOFT）—初篩試驗原理：紅細胞置于等滲鹽水中，膜不破壞。紅細胞置于不同濃度NaCl溶液中，水分通過細胞膜進入細胞內(nèi),紅細胞膨脹至破裂而溶血。不同濃度時，紅細胞膜對低滲溶液的抵抗力不同，破壞程度不同。8二、紅細胞膜缺陷的檢測（一）紅細胞滲透脆性試驗（EOFT）—試管號濃度差0.540.520.500.480.460.440.420.400.380.360.340.320.300.280.260.240.221234567891011121314151617開始溶血完全溶血

意義：紅細胞對低滲鹽水的抵抗力降低

→滲透脆性增高，如遺傳球。紅細胞對低滲鹽水的抵抗力增強

→滲透脆性減低，如HS、IDA。9試管號濃度差0.540.520.500.480.46（二）自身溶血試驗及糾正試驗參考值：正常人紅細胞孵育48h，輕微溶血、溶血度＜3.5%。加葡萄糖和加ATP孵育，溶血糾正，溶血度＜1%。臨床意義：作為遺傳球和先天性非球形細胞性溶貧的鑒別診斷。糾正試驗：加葡萄糖和ATP糾正：1型加葡萄糖不糾正、加ATP糾正：2型10（二）自身溶血試驗及糾正試驗10三、紅細胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗（MRT）—篩選試驗原理：在足量的NADPH存在下，高鐵血紅蛋白能被還原成亞鐵血紅蛋白。當G6PD含量正常時，由磷酸戊糖途徑生成的NADPH的數(shù)量足以完成上述還原反應。如果G6PD缺乏，則高鐵血紅蛋白還原速度較正常人減慢。參考值：正常人試驗結(jié)果呈陰性（紅色）G-6-PD缺陷癥呈陽性（棕色）11三、紅細胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗（MRT）—（二）氰化物-抗壞血酸試驗臨床意義：正常血液要在幾小時后才變成暗色。純合子G6PD缺乏的血液變成棕色，在2h內(nèi)即變色，雜合子要3-4h變色。12（二）氰化物-抗壞血酸試驗12（三）變性珠蛋白小體生成試驗臨床意義：G6PD缺乏癥，不穩(wěn)定Hb、HbH病等＞45%。13（三）變性珠蛋白小體生成試驗13

(四)G-6-PD熒光斑點試驗和活性測定——確證試驗原理：紅細胞中的G6PD催化G-6-P轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖酸時，使氧化型輔酶（NADP）生成還原型NADPH，NADPH在340nm處有一吸收峰，在紫外線激發(fā)下可產(chǎn)生熒光。參考值：正常人有甚強熒光，酶活性4.97±1.43U/gHb。臨床意義:G6PD缺乏者熒光很弱或無熒光。14(四)G-6-PD熒光斑點試驗和活性測定14（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定原理：在ADP存在下，丙酮酸激酶催化烯醇式磷酸丙酮酸變?yōu)楸幔贜ADH存在下，丙酮酸被乳酸脫氫酶作用轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?，若熒光標記于NADH上此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD.參考值：正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失。酶活性15.1±4.99U/gHb。臨床意義：PK嚴重缺乏（純合子）熒光60min不消失；雜合子熒光在25-60min消失15（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定15四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白病：是由于血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)或珠蛋白肽鏈合成速率異常所引起的一組遺傳性血液病。16四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白?。菏怯捎谘t蛋白分子結(jié)構(gòu)或（一）血紅蛋白電泳原理：

各種Hb的等電點不同，在一定的pH緩沖條件下帶電荷數(shù)不同，電泳速率不同，出現(xiàn)不同的Hb區(qū)帶。如HbA、HbA2、HbF、HbH等。參考值：正常人電泳圖譜顯示4條區(qū)帶：從陽極開始依次為：HbA→HbA2→NH1→NH2且含量也依次減少。17（一）血紅蛋白電泳17臨床意義：HbA:96％－98％正常人HbA2:1％－3%

↑地中海貧血/巨幼貧/HbS病

↓缺鐵性貧血及鐵粒幼細胞貧血HbA2減低18臨床意義：18（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗（三）胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗（四）HbA2定量測定19（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗19五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(Coombs試驗)原理：患者RBC與多個不完全抗體的Fc段結(jié)合RBC凝集現(xiàn)象正常人RBC抗人球蛋白直接反應(+)抗人球蛋白間接反應(＋)

完全抗體(抗人球蛋白)致敏RBC血清中不完全抗體（IgG、IgM、IgA、C3）＋＋20五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(Coomb臨床意義：直接反應(+)：AIHA、SLE、類風濕(溫抗體、37℃反應強)間接反應(+)：Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病，母體血清中不完全抗體的檢測21臨床意義：21（二）冷凝集素試驗原理：冷凝集素（主要是IgM）在低溫時與自身RBC、O型RBC、同型RBC發(fā)生凝集（0-4℃），當溫度升高時凝集消失。參考值：效價<1:40意義：AIHA、傳單、支原體肺炎、MM22（二）冷凝集素試驗22(三)冷熱雙相溶血試驗原理：血清中雙相溶血素（主要是IgG）存在，0-20℃與RBC結(jié)合，并附合補體，但不溶血。30-37℃發(fā)生溶血參考值:陰性意義：PCH、病毒感染、傳單23(三)冷熱雙相溶血試驗23陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（paroxysmalnocturnalhemoglobinuria，PNH）為獲得性紅細胞膜缺陷引起的慢性血管內(nèi)溶血，常在睡眠時加重，可伴發(fā)作性血紅蛋白尿和全血細胞減少癥。六、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測24陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥六、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測24(一)酸溶血試驗（Ham試驗）原理：PNH病人異常RBC共同特點是細胞膜表面缺乏一組膜蛋白，這些膜蛋白通過GPI（糖肌醇磷脂）連接在膜上，統(tǒng)稱為GPI連接蛋白，屬于補體調(diào)節(jié)蛋白。RBC膜缺少這種蛋白，因此對補體敏感，是溶血的主要原因。病人RBC37℃1hpH6.6-6.8易破壞溶血25(一)酸溶血試驗（Ham試驗）病人RBC37℃1hpH6參考值：陰性臨床意義：PNH常為陽性26參考值：陰性26重點內(nèi)容溶血性貧血的實驗診斷程序紅細胞滲透脆性試驗抗人球蛋白試驗酸溶血試驗27重點內(nèi)容溶血性貧血的實驗診斷程序27第四節(jié)血型鑒定及交叉配血2828

一、血型

血型（bloodgroup）是人體血液的一種遺傳形狀，各種血液成分包括紅細胞、白細胞、血小板及某些血漿蛋白在個體之間均具有抗原成分的差別，受獨立的遺傳基因控制。29一、血型血型（bloodgroup）是人體血液的一種遺一、紅細胞血型系統(tǒng)（一）ABO血型系統(tǒng)ABO血型系統(tǒng)的抗原和抗體ABO血型的亞型ABO血型鑒定和交叉配血試驗ABO血型系統(tǒng)的臨床意義30一、紅細胞血型系統(tǒng)（一）ABO血型系統(tǒng)30（二）RH血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)的抗原和抗體Rh血型系統(tǒng)的鑒定Rh血型系統(tǒng)的臨床意義31（二）RH血型系統(tǒng)31二、其他血型系統(tǒng)

白細胞抗原系統(tǒng)血小板抗原及抗體血清蛋白成分的抗原特性32二、其他血型系統(tǒng)白細胞抗原系統(tǒng)32謝謝！33謝謝！33臨床醫(yī)學五年制

實驗診斷學續(xù)薇教授博士生導師

34臨床醫(yī)學五年制

實驗診斷學1第二節(jié)溶血性貧血的實驗室檢測352概述定義:是由于各種原因使紅細胞生存時間縮短、紅細胞破壞加快、紅細胞破壞增多，超過骨髓的代償造血能力時所發(fā)生的一類貧血。溶血性疾?。汗撬柙煅δ苣軌虼鷥敿t細胞破壞。36概述3按部位分類：

血管內(nèi)溶血-紅細胞破壞在血液中

血管外溶血-紅細胞破壞在單核巨噬細胞系統(tǒng)

原位溶血-紅細胞破壞在骨髓中37按部位分類：4按原因分類：

膜缺陷酶缺陷血紅蛋白缺陷免疫因素物理因素化學因素感染因素脾功能亢進內(nèi)在因素

外在因素38按原因分類：內(nèi)在因素外在因素5一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測（二）血清結(jié)合珠蛋白檢測（三）血漿高鐵血紅素清蛋白檢測（四）含鐵血黃素尿試驗(Rous試驗)（五）紅細胞壽命測定39一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測6原理

大量Hb游離在血漿中大量Hb小分子>腎閾值與珠蛋白結(jié)合后被運輸?shù)礁闻K分解一部分Hb轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞FHb＋白蛋白Hb被腎小管上皮細胞重吸收Hb在血漿中游離紅細胞破壞2、血紅蛋白尿高Hb血癥4、高鐵血紅素白蛋白（+）3、血漿中結(jié)合珠蛋白（減低）1、血漿游離Hb測定(增高）在細胞內(nèi)代謝成含鐵血黃素6、血結(jié)素減低結(jié)合珠蛋白耗盡時剩余的Hb與血結(jié)素結(jié)合5、尿含鐵血黃素試驗(+)隨細胞脫落至尿中，鐵染色（＋）40原理二、紅細胞膜缺陷的檢測（一）紅細胞滲透脆性試驗（EOFT）—初篩試驗原理：紅細胞置于等滲鹽水中，膜不破壞。紅細胞置于不同濃度NaCl溶液中，水分通過細胞膜進入細胞內(nèi),紅細胞膨脹至破裂而溶血。不同濃度時，紅細胞膜對低滲溶液的抵抗力不同，破壞程度不同。41二、紅細胞膜缺陷的檢測（一）紅細胞滲透脆性試驗（EOFT）—試管號濃度差0.540.520.500.480.460.440.420.400.380.360.340.320.300.280.260.240.221234567891011121314151617開始溶血完全溶血

意義：紅細胞對低滲鹽水的抵抗力降低

→滲透脆性增高，如遺傳球。紅細胞對低滲鹽水的抵抗力增強

→滲透脆性減低，如HS、IDA。42試管號濃度差0.540.520.500.480.46（二）自身溶血試驗及糾正試驗參考值：正常人紅細胞孵育48h，輕微溶血、溶血度＜3.5%。加葡萄糖和加ATP孵育，溶血糾正，溶血度＜1%。臨床意義：作為遺傳球和先天性非球形細胞性溶貧的鑒別診斷。糾正試驗：加葡萄糖和ATP糾正：1型加葡萄糖不糾正、加ATP糾正：2型43（二）自身溶血試驗及糾正試驗10三、紅細胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗（MRT）—篩選試驗原理：在足量的NADPH存在下，高鐵血紅蛋白能被還原成亞鐵血紅蛋白。當G6PD含量正常時，由磷酸戊糖途徑生成的NADPH的數(shù)量足以完成上述還原反應。如果G6PD缺乏，則高鐵血紅蛋白還原速度較正常人減慢。參考值：正常人試驗結(jié)果呈陰性（紅色）G-6-PD缺陷癥呈陽性（棕色）44三、紅細胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗（MRT）—（二）氰化物-抗壞血酸試驗臨床意義：正常血液要在幾小時后才變成暗色。純合子G6PD缺乏的血液變成棕色，在2h內(nèi)即變色，雜合子要3-4h變色。45（二）氰化物-抗壞血酸試驗12（三）變性珠蛋白小體生成試驗臨床意義：G6PD缺乏癥，不穩(wěn)定Hb、HbH病等＞45%。46（三）變性珠蛋白小體生成試驗13

(四)G-6-PD熒光斑點試驗和活性測定——確證試驗原理：紅細胞中的G6PD催化G-6-P轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖酸時，使氧化型輔酶（NADP）生成還原型NADPH，NADPH在340nm處有一吸收峰，在紫外線激發(fā)下可產(chǎn)生熒光。參考值：正常人有甚強熒光，酶活性4.97±1.43U/gHb。臨床意義:G6PD缺乏者熒光很弱或無熒光。47(四)G-6-PD熒光斑點試驗和活性測定14（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定原理：在ADP存在下，丙酮酸激酶催化烯醇式磷酸丙酮酸變?yōu)楸?，在NADH存在下，丙酮酸被乳酸脫氫酶作用轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?，若熒光標記于NADH上此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD.參考值：正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失。酶活性15.1±4.99U/gHb。臨床意義：PK嚴重缺乏（純合子）熒光60min不消失；雜合子熒光在25-60min消失48（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定15四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白?。菏怯捎谘t蛋白分子結(jié)構(gòu)或珠蛋白肽鏈合成速率異常所引起的一組遺傳性血液病。49四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白病：是由于血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)或（一）血紅蛋白電泳原理：

各種Hb的等電點不同，在一定的pH緩沖條件下帶電荷數(shù)不同，電泳速率不同，出現(xiàn)不同的Hb區(qū)帶。如HbA、HbA2、HbF、HbH等。參考值：正常人電泳圖譜顯示4條區(qū)帶：從陽極開始依次為：HbA→HbA2→NH1→NH2且含量也依次減少。50（一）血紅蛋白電泳17臨床意義：HbA:96％－98％正常人HbA2:1％－3%

↑地中海貧血/巨幼貧/HbS病

↓缺鐵性貧血及鐵粒幼細胞貧血HbA2減低51臨床意義：18（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗（三）胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗（四）HbA2定量測定52（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗19五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(Coombs試驗)原理：患者RBC與多個不完全抗體的Fc段結(jié)合RBC凝集現(xiàn)象正常人RBC抗人球蛋白直接反應(+)抗人球蛋白間接反應(＋)

完全抗體(抗人球蛋白)致敏RBC血清中不完全抗體（IgG、IgM、IgA、C3）＋＋53五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(Coomb臨床意義：直接反應(+)：AIHA、SLE、類風濕(溫抗體、37℃反應強)間接反應(+)：Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病，母體血清中不完全抗體的檢測54臨床意義：21（二）冷凝集素試驗原理：冷凝集素（主要是IgM）在低溫時與自身RBC、O型RBC、同型RBC發(fā)生凝集（0-4℃），當溫度升高時凝集消失。參考值：效價<1:40意義：AIHA、傳單、支原體肺炎、MM55（二）冷凝集素試驗22(三)冷熱雙相溶血試驗原理：血清中雙相溶血素（主要是IgG）存在，0-20℃與RBC結(jié)合，并附合補體，但不溶血。30-37℃發(fā)生溶血參考值:陰性意義：