生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)實踐PPT資料

第四部分生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)(jìshù)實踐第一頁，共58頁。2.方法(fāngfǎ)及原理（1）凝膠色譜法原理蛋白質(zhì)比較相對分子質(zhì)量大相對分子質(zhì)量小凝膠內(nèi)部不能進(jìn)入能進(jìn)入運(yùn)動方式垂直向下垂直向下和無規(guī)則擴(kuò)散運(yùn)動經(jīng)過路程較短較長洗脫次序先流出后流出提醒凝膠色譜柱的直徑大小不影響分離效果，但直徑過大造成洗脫液體積大，樣品稀釋度大；凝膠色譜柱的高度(gāodù)與分離度有關(guān)。第二頁，共58頁。（2）凝膠電泳法原理凝膠電泳法的原理是不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運(yùn)動方向和運(yùn)動速度(sùdù)不同。如下表：決定運(yùn)動方向形成庫侖力形成阻力決定運(yùn)動速率電荷性質(zhì)√電荷量√√分子形狀√√分子大小√√第三頁，共58頁。3.實驗操作(cāozuò)流程紅細(xì)胞洗滌——離心去除血清樣品的處理釋放血紅蛋白——蒸餾水漲破分離血紅蛋白——離心處理粗分離——透析（去除小分子雜質(zhì)）純化——凝膠色譜法進(jìn)行分離和純化純度鑒定——SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定相對分子量第四頁，共58頁。提醒①紅細(xì)胞洗滌過程中，洗滌三次后，上清液仍有黃色，可增加洗滌次數(shù)，否則無法除去血漿蛋白；離心時轉(zhuǎn)速要低，時間要短，否則白細(xì)胞等會一同沉淀，達(dá)不到分離效果。②血紅蛋白釋放過程中，蒸餾水的作用是漲破紅細(xì)胞，甲苯的作用主要是溶解細(xì)胞膜。③為了加快干凝膠的膨脹，可將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，通常只需1～2h。這種方法不但節(jié)約時間，而且可以除去凝膠中可能帶有的微生物，排除(páichú)膠粒內(nèi)的空氣。④滴加樣品時，吸管管口要貼著管壁環(huán)繞移動，防止破壞凝膠面。第五頁，共58頁。對位訓(xùn)練1.為了提取血紅蛋白，從學(xué)校附近的屠宰場索取新鮮的豬血，對豬血處理的正確操作是（）A.要在采血容器中預(yù)先加入抗凝血劑檸檬酸鈉B.取血回來(huílái)后，馬上進(jìn)行高速長時間離心C.將離心后的血細(xì)胞加入清水緩慢攪拌D.重復(fù)洗滌直到上清液呈紅色為止A第六頁，共58頁。2.洗滌紅細(xì)胞時，離心(líxīn)所用方法為（）A.低速長時間離心(líxīn)B.低速短時間離心(líxīn)C.高速長時間離心(líxīn)D.高速短時間離心(líxīn)B第七頁，共58頁。考點(diǎn)二植物芳香油的提取1.植物芳香油的基本知識（1）成分：組成較復(fù)雜，主要包括萜類化合物及其衍生物。（2）特點(diǎn)：具有很強(qiáng)的揮發(fā)性，易溶于有機(jī)溶劑。（3）應(yīng)用：玫瑰精油是制作高級香水的主要成分，能使人產(chǎn)生愉悅感；橘皮精油的主要成分是檸檬烯，具誘人的橘香味(xiānɡwèi)，是食品、化妝品和香水配料的優(yōu)質(zhì)原料。第八頁，共58頁。2.玫瑰精油(jīnɡyóu)的提取流程鮮玫瑰花+清水→水蒸氣蒸餾→油水混合物分離油層除水玫瑰油3.玫瑰精油(jīnɡyóu)提取操作的關(guān)鍵（1）安裝裝置順序：從左到右，自下而上。（2）溫度計位置：溫度計水銀球的上限與蒸餾瓶側(cè)管的下限處在同一水平線上。（3）冷凝管中的水流向：從下方進(jìn)水，上方出水，與蒸氣流向相反。加入(jiārù)NaCl加入(jiārù)無水Na2SO4過濾第九頁，共58頁。（4）加熱時防暴沸：墊石棉網(wǎng)，向液體中加入幾粒沸石或瓷片。（5）燒瓶內(nèi)液體量：燒瓶容積的1/3～2/3。（6）除水：加入無水Na2SO4后，放置時間(shíjiān)可適當(dāng)延長些。（7）溫度及時間(shíjiān)：為提高產(chǎn)品質(zhì)量，要嚴(yán)格控制蒸餾溫度，可適當(dāng)延長蒸餾時間(shíjiān)。第十頁，共58頁。4.橘皮精油的提取流程石灰水浸泡→漂洗→壓榨→過濾→靜置→再次過濾→橘皮油5.橘皮精油提取操作的關(guān)鍵（1）橘皮的處理：干燥后一定要用石灰水浸透，時間至少10h以上。（2）壓榨液的處理：可以先用普通布袋過濾除去(chúqù)固體物和殘渣，然后離心進(jìn)一步除去(chúqù)質(zhì)量較小的殘留固體物，再用分液漏斗或吸管將上層的橘皮油分離出來。第十一頁，共58頁。對位訓(xùn)練3.植物芳香油易溶于（）A.水B.鹽酸(yánsuān)C.碳酸D.酒精D第十二頁，共58頁。4.橘皮在壓榨前，應(yīng)用下列哪種液體(yètǐ)浸泡（）A.石灰水B.水C.酒精D.鹽酸A第十三頁，共58頁?？键c(diǎn)三蒸餾(zhēngliú)、壓榨和萃取三種方法的比較提取方法水蒸氣蒸餾壓榨法有機(jī)溶劑萃取實驗原理利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來通過機(jī)械加壓，壓榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油方法步驟（1）水蒸氣蒸餾（2）分離油層（3）除水過濾（1）石灰水浸泡、漂洗（2）壓榨、過濾、靜置（3）再次過濾（1）粉碎、干燥（2）萃取、過濾（3）濃縮適用范圍適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性強(qiáng)的芳香油適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料的提取適用范圍廣，要求原料的顆粒要盡可能細(xì)小，能充分浸泡在有機(jī)溶液中優(yōu)點(diǎn)簡單易行，便于分離生產(chǎn)成本低，易保持原料原有的結(jié)構(gòu)和功能出油率高，易分離局限性水中蒸餾會導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解等問題分離較為困難，出油率相對較低使用的有機(jī)溶劑處理不當(dāng)會影響芳香油的質(zhì)量第十四頁，共58頁。原因是。油與水分離，應(yīng)加入相當(dāng)于橘皮質(zhì)量0.水中蒸餾會導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解等問題石灰水B.板鏈上發(fā)生堿基錯配，則擴(kuò)增若干次后檢測所用①透析的目的是。第四十五頁，共58頁。（2）C過程為PCR技術(shù)的延伸階，屬于提取樣品的樣點(diǎn)是。。（2）①防止血液凝固②紅細(xì)胞的洗滌血紅蛋分離油層除水玫瑰油經(jīng)過三次循環(huán)，共產(chǎn)生23個DNA分子，其中有2第五十一頁，共58頁。而在“綠葉中色素(sèsù)的提取和分離”的實驗中層析的（5）胡蘿卜素粗品的鑒定提取并分離葉綠體中的提醒①水蒸氣蒸餾要適當(dāng)延長蒸餾時間，溫度不能太高。②用于萃取的有機(jī)溶劑必須事先精制，除去雜質(zhì)。③壓榨時原料必須要浸透，這樣壓榨時不會滑脫，出油率高，不堵塞篩眼；使用石灰水充分浸泡原料，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)(jiégòu)，分解果膠，防止橘皮壓榨時滑脫，提高出油率。第十五頁，共58頁。對位(duìwèi)訓(xùn)練5.我們選擇提取玫瑰精油的方法是（）A.水氣蒸餾B.壓榨法C.水中蒸餾D.萃取法C第十六頁，共58頁。6.橘皮精油提取時一般采用(cǎiyòng)（）A.水中蒸餾B.壓榨法C.水上蒸餾D.萃取法B第十七頁，共58頁?？键c(diǎn)(kǎodiǎn)四PCR擴(kuò)增技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制的反應(yīng)過程（1）變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解旋為單鏈，如下圖：（2）復(fù)性：溫度下降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合，如下圖：第十八頁，共58頁。（3）延伸(yánshēn)：溫度上升到72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈，如下圖：第十九頁，共58頁。擴(kuò)增技術(shù)(jìshù)和DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制PCR擴(kuò)增技術(shù)場所細(xì)胞核內(nèi)生物體外原理堿基互補(bǔ)配對堿基互補(bǔ)配對酶DNA聚合酶、解旋酶耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）條件模板、ATP、引物鏈（RNA）、常溫模板、ATP、引物鏈（DNA及RNA片段）、溫度變化（90～95℃→55～60℃→70～75℃）原料四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸特點(diǎn)形成的是整個DNA分子，一個細(xì)胞周期只復(fù)制一次短時間內(nèi)形成大量目的基因DNA片段，呈指數(shù)增長——2n第二十頁，共58頁。對位訓(xùn)練7.標(biāo)準(zhǔn)(biāozhǔn)的PCR過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，這三大步需要的溫度依次是（）A.92℃、50℃、72℃B.72℃、50℃、92℃C.50℃、92℃、72℃D.80℃、50℃、72℃A第二十一頁，共58頁。8.引物的作用是（）A.打開DNA雙鏈B.催化(cuīhuà)合成DNA子鏈C.使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始復(fù)制D.提供模板C第二十二頁，共58頁。思維方法探究思維誤區(qū)警示易錯分析(fēnxī)蛋白質(zhì)提取與分離的原理不清楚方法原理凝膠色譜法根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)電泳法根據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小、形狀的不同進(jìn)行分離第二十三頁，共58頁。糾正訓(xùn)練(xùnliàn)使用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)實驗中，相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的行進(jìn)過程，可表示為圖中（）B第二十四頁，共58頁。知識綜合應(yīng)用重點(diǎn)提示通過“胡蘿卜素的提取與鑒定實驗”的考查，提升“用文字、圖表以及數(shù)學(xué)的方式(fāngshì)等多種形式準(zhǔn)確地描述生物學(xué)方面的內(nèi)容”的能力。第二十五頁，共58頁。典例分析如圖為提取胡蘿卜素(húluóbosù)的裝置圖，請據(jù)圖回答下列問題：（1）⑤的作用是。（2）④內(nèi)加入的萃取液一般是，原料在加入前，一般要進(jìn)行、處理。（3）該萃取過程采用的是水浴加熱，其目的是。（4）為了取得最佳萃取效果，萃取的時間應(yīng)該。第二十六頁，共58頁。解析圖示裝置為萃取裝置，其中⑤為冷凝管，其作用在于降溫，以防止加熱時有機(jī)溶劑揮發(fā)，④是燒瓶，其內(nèi)裝有萃取劑，胡蘿卜素的適宜萃取劑是石油醚，為防止有機(jī)溶劑明火加熱時引起燃燒、爆炸，萃取時有必要采用水浴加熱，而不用明火加熱。答案（1）冷凝管降溫，防止加熱時有機(jī)溶劑揮發(fā)（2）燒瓶石油醚粉碎干燥(gānzào)（3）避免使用明火加熱引起燃燒、爆炸（4）長第二十七頁，共58頁。拓展提升比較萃取裝置與水中蒸餾裝置（1）兩種裝置中均具冷凝裝置，但放置的方式和作用不同。蒸餾裝置比萃取裝置多了接收瓶及牛角(niújiǎo)管，且設(shè)有溫度計以檢測蒸氣溫度。（2）蒸餾裝置中，燒瓶中裝的蒸餾水可直接加熱，而萃取裝置中裝的是有機(jī)溶劑（萃取劑），故不可直接加熱（需水浴加熱）。第二十八頁，共58頁。變式訓(xùn)練右圖為胡蘿卜素的紙層析結(jié)果示意圖，請據(jù)圖回答問題：（1）該圖所示的鑒定方法稱為。（2）基線一般距底邊cm。（3）A、B、C、D四點(diǎn)中，屬于標(biāo)準(zhǔn)樣品的樣點(diǎn)是，屬于提取樣品的樣點(diǎn)是。點(diǎn)樣的要求是。（4）在圖中的層析譜中，①代表的物質(zhì)是，②代表的物質(zhì)是。（5）該層析的目的是，而在“綠葉中色素(sèsù)的提取和分離”的實驗中層析的目的是。第二十九頁，共58頁。解析該圖為胡蘿卜素的紙層析結(jié)果示意圖，所示的鑒定方法為紙層析鑒定法?；€一般(yībān)在濾紙下端距底邊2cm處，在基線上取A、B、C、D四點(diǎn)，用最細(xì)的注射器針頭分別吸取標(biāo)準(zhǔn)樣品和提取樣品，在A、D和B、C點(diǎn)上點(diǎn)樣，點(diǎn)樣應(yīng)快速細(xì)致，在基線上形成直徑為2mm左右的圓點(diǎn)，每次點(diǎn)完后可以用吹風(fēng)機(jī)吹干，注意保持濾紙干燥。圖中①和②分別是標(biāo)準(zhǔn)樣品β-胡蘿卜素和分離出的其他色素及雜質(zhì)。答案（1）紙層析鑒定法（2）2（3）A和DB和C點(diǎn)樣應(yīng)該快速細(xì)致，圓點(diǎn)細(xì)小，每次點(diǎn)樣時濾紙都要干燥（4）β-胡蘿卜素其他色素和雜質(zhì)（5）胡蘿卜素粗品的鑒定提取并分離葉綠體中的色素，探究色素的種類和顏色第三十頁，共58頁。定時檢測年5月20日民政部等制訂汶川大地震遇難人員遺體處理意見指出，無法確認(rèn)遇難者身份的，由公安部門提取可供DNA檢驗的檢材以便事后身份辨認(rèn)。事后的遺體辨認(rèn)可借助于DNA雜交技術(shù)，即從遺體細(xì)胞與死者家屬提供的死者生前生活用品中分別(fēnbié)提取DNA，然后借助DNA雜交技術(shù)對遺體進(jìn)行確認(rèn)。據(jù)此回答：（1）為了確保辨認(rèn)的準(zhǔn)確性，需要克隆出較多的DNA樣品。這需借助PCR技術(shù)。使用PCR技術(shù)的具體實驗操作順序是：第三十一頁，共58頁。按配方(pèifāng)準(zhǔn)備好各組分→→離心使反應(yīng)液集中在離心管底部→設(shè)計好PCR儀的循環(huán)程序→進(jìn)行PCR反應(yīng)。請寫出圖中方框的步驟：，該步操作應(yīng)特別注意的問題是。A組B組C組遺體中的DNA堿基序列ACTGACGGTTGGCTTATCGAGCAATCGTGC家屬提供的DNA堿基序列TGACTGCCAACCGAATAGCACGGTAAGACG第三十二頁，共58頁。（2）上表所示為分別從死者遺體和死者生前的生活用品中提取的三條相同染色體上的同一區(qū)段DNA單鏈的堿基序列，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對情況進(jìn)行判斷，A、B、C三組DNA中不是同一人的是。（3）為什么從死者體細(xì)胞與死者家屬提供(tígōng)的其生前生活用品中分別提取的DNA可以完全互補(bǔ)配對？。第三十三頁，共58頁。解析PCR技術(shù)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，它能以極少量的DNA為模板，在幾小時內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA拷貝。這項技術(shù)有效地解決了因為樣品中DNA含量太低而難以對樣品進(jìn)行分析研究的問題，被廣泛地應(yīng)用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學(xué)、基因克隆和DNA序列測定等領(lǐng)域。DNA雜交技術(shù)方法是從遺體細(xì)胞和死者家屬提供的死者生前的生活用品中分別提取DNA，在一定溫度下，水浴共熱，使DNA氫鍵斷裂(duànliè)，雙鏈打開。若兩份DNA樣本來自同一個體，在溫度降低時，兩份樣本中的DNA單鏈通過氫鍵連接在一起，若不是來自同一個體，則兩份樣本中的DNA單鏈在一定程度上不能互補(bǔ)，DNA雜交技術(shù)就是通過這一過程對面目全非的死者進(jìn)行辨認(rèn)的。第三十四頁，共58頁。答案（1）用微量移液器在微量離心管中依次加入各組分PCR實驗使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須(bìxū)進(jìn)行高壓滅菌（2）B、C（3）人體所有體細(xì)胞均由一個受精卵有絲分裂產(chǎn)生，其細(xì)胞核中均含有相同的遺傳物質(zhì)第三十五頁，共58頁。2.對血紅蛋白（Hb）的研究結(jié)果表明，血紅蛋白實際上是由珠蛋白、原卟琳和二價(èrjià)鐵離子（Fe2+）所組成的結(jié)合蛋白質(zhì)，由4條肽鏈各結(jié)合一個輔基即血紅素，O2結(jié)合于Fe2+上，血紅蛋白與氧疏松結(jié)合形成氧合血紅蛋白（HbO2），這種氧合作用在氧分壓高時容易進(jìn)行，在氧分壓低時易于解離。紅細(xì)胞結(jié)合和攜帶O2的過程并不影響Fe2+，也就是說不會使之氧化為Fe3+。Fe3+無攜帶O2的能力。CO與Hb的親和力大于O2，結(jié)合成HbCO后不能分離，致使Hb喪失運(yùn)輸O2和CO2的機(jī)能，這稱為一氧化碳中毒即煤氣中毒。第三十六頁，共58頁。（1）用凝膠色譜法分離血紅蛋白時，待接近色譜柱底端時，才用試管收集。血紅蛋白因含而呈現(xiàn)紅色。（2）要使血紅蛋白從紅細(xì)胞中釋放出來，可選用的方法是。（3）紅細(xì)胞具有運(yùn)輸氧的功能，是因為。（4）亞硝酸鹽為強(qiáng)氧化劑，進(jìn)入人體后，可使血紅蛋白失去運(yùn)輸氧的功能，導(dǎo)致人體組織(zǔzhī)缺氧，其可能的原因是。第三十七頁，共58頁。解析用凝膠色譜法分離(fēnlí)血紅蛋白時，血紅蛋白因含血紅素而呈現(xiàn)紅色，待紅色區(qū)帶接近色譜柱底端時，才用試管收集。將紅細(xì)胞置于蒸餾水中，加40%體積的甲苯，攪拌使紅細(xì)胞破裂并釋放出血紅蛋白。紅細(xì)胞中的血紅蛋白與氧在氧分壓高時容易結(jié)合，在氧分壓低時又容易分離(fēnlí)。亞硝酸鹽可將血細(xì)胞中低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，從而使其失去與氧結(jié)合的能力。答案（1）紅色區(qū)帶血紅素（2）將紅細(xì)胞置于蒸餾水中，加40%體積的甲苯，攪拌使之破裂并釋放血紅蛋白（3）紅細(xì)胞中的血紅蛋白與氧在氧分壓高時容易結(jié)合，在氧分壓低時又容易分離(fēnlí)（4）亞硝酸鹽可使血細(xì)胞中低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白第三十八頁，共58頁。（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是一項在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù)，下圖表示合成過程，請據(jù)圖分析回答：（1）A過程高溫使DNA變性解旋，對該過程的原理敘述(xùshù)，正確的是。A.該過程用到耐高溫的解旋酶破壞氫鍵B.該過程用到限制性核酸內(nèi)切酶破壞磷酸二酯鍵C.該過程不需要解旋酶的作用D.該過程與人體細(xì)胞的過程完全相同第三十九頁，共58頁。（2）C過程要用到的酶是。這種酶在高溫下仍保持活性，因此在PCR擴(kuò)增時可以加入，（需要/不需要）再添加。PCR反應(yīng)除提供酶外，還需要滿足的基本條件有：。（3）如果把模板DNA的兩條鏈用15N標(biāo)記，游離的脫氧核苷酸不做標(biāo)記，控制“94℃-55℃-72℃”溫度循環(huán)3次，則在形成的子代DNA中含有15N標(biāo)記的DNA占。（4）如果模板DNA分子(fēnzǐ)共有a個堿基對，其中含有胞嘧啶m個，則該DNA復(fù)制10次，需要加入胸腺嘧啶脫氧核苷酸個。第四十頁，共58頁。（5）PCR中由堿基錯配引起的變異屬于。假設(shè)對一個DNA進(jìn)行擴(kuò)增，第一次循環(huán)時某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯配，則擴(kuò)增若干次后檢測所用DNA的擴(kuò)增片段，與原DNA相應(yīng)片段相同的占。解析（1）高溫所起的作用類似于解旋酶，使雙鏈DNA變?yōu)閱捂湣＃?）C過程為PCR技術(shù)的延伸階段，當(dāng)系統(tǒng)溫度上升至72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下合成新的DNA鏈。TaqDNA聚合酶是耐熱的，高溫下不變性，所以一次性加入即可。（3）PCR技術(shù)遵循半保留復(fù)制的特點(diǎn)。經(jīng)過三次循環(huán)，共產(chǎn)生23個DNA分子，其中有2個DNA分子含有15N標(biāo)記。（4）在一個雙鏈DNA分子中，C+T占堿基總數(shù)的一半(yībàn)，故T的數(shù)目為a-m，復(fù)第四十一頁，共58頁。制10次，相當(dāng)于新增加了210-1個DNA分子。故需補(bǔ)充T的數(shù)目為（210-1）（a-m）。（5）基因中的堿基對改變屬于基因突變。對一個DNA進(jìn)行擴(kuò)增，第一次循環(huán)時某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯配，以后(yǐhòu)按正常配對方式進(jìn)行擴(kuò)增，錯配鏈作模板擴(kuò)增的都是錯誤的DNA分子，原正常鏈擴(kuò)增得到的DNA分子都是正常的DNA分子，故若干次后檢測所用DNA的擴(kuò)增片段，與原DNA相應(yīng)片段相同的占3/4。答案（1）C（2）TaqDNA聚合酶一次不需要DNA模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物，四種脫氧核苷酸，同時通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行（3）25%（4）（210-1）（a-m）（5）基因突變75%第四十二頁，共58頁。4.紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成的，血紅蛋白的主要功能是攜帶O2或CO2，我們可以(kěyǐ)選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進(jìn)行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關(guān)問題：（1）血紅蛋白提取和分離的程序可分為四步：、、和。（2）實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。①加入檸檬酸鈉的目的是。②以上所述的過程即是樣品處理，它包括、、收集血紅蛋白溶液。第四十三頁，共58頁。（3）收集(shōují)的血紅蛋白溶液在透析袋中可以經(jīng)過透析，這就是樣品的粗分離。①透析的目的是。②透析的原理是。（4）然后通過凝膠色譜法將樣品進(jìn)一步純化，最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。①樣品純化的目的是。②血紅蛋白有什么特點(diǎn)？。這一特點(diǎn)對進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？。第四十四頁，共58頁。解析本題主要考查蛋白質(zhì)分離與鑒定的基本原理及實驗流程。分離、提取血紅蛋白的實驗流程大致是樣品處理→粗分離→純化→純度鑒定四個步驟。檸檬酸鈉屬于抗凝劑。血紅蛋白是紅色含鐵的蛋白質(zhì)。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)是依據(jù)蛋白質(zhì)的相對(xiāngduì)分子質(zhì)量大小來進(jìn)行的。第四十五頁，共58頁。答案（1）樣品(yàngpǐn)處理粗分離純化純度鑒定（2）①防止血液凝固②紅細(xì)胞的洗滌血紅蛋白的釋放（3）①去除相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)②透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而大分子則保留在袋內(nèi)（4）①通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去②血紅蛋白呈現(xiàn)紅色在用凝膠色譜法分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時期應(yīng)該收集洗脫液；這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作第四十六頁，共58頁。5.血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2和部分CO2的運(yùn)輸。請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。（1）將實驗流程補(bǔ)充完整：A為，B為。凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)而達(dá)到(dádào)蛋白質(zhì)分離的有效方法。第四十七頁，共58頁。（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除，洗滌次數(shù)過少，無法除去；離心速度過高和時間過長會使一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是。（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)(wùzhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（pH為）的目的是。如果紅色區(qū)帶，說明色譜柱制作成功。第四十八頁，共58頁。答案（1）血紅蛋白的釋放樣品的加入和洗脫相對分子質(zhì)量(zhìliàng)的大?。?）雜蛋白（血漿蛋白）血漿蛋白白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞離心后的上清液中沒有黃色蒸餾水和甲苯（3）準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致均勻一致的移動第四十九頁，共58頁。6.請回答下列與實驗室提取芳香油有關(guān)的問題：（1）植物芳香油的提取可采用的方法有壓榨法、和。（2）芳香油溶解性的特點(diǎn)是不溶于，易溶于，因此可用作為提取劑來提取芳香油。（3）橘子(júzi)果實含有芳香油，通?？捎米鳛椴牧咸崛》枷阌?，而且提取時往往選用新鮮的材料，理由是。（4）對材料壓榨后可得到糊狀液體，為除去其中的固體物獲得乳狀液可采用的方法是。第五十頁，共58頁。（5）得到的乳狀液加入氯化鈉并放置一段時間后，芳香油將分布于液體的層，原因是。加入氯化鈉的作用是。（6）從乳狀液中分離得到的芳香油中要加入無水硫酸鈉，此劑的作用是。答案（1）蒸餾法萃取法（2）水有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑（3）橘子皮芳香油含量較高（4）過濾（5）上油層的密度(mìdù)比水層小增加水層密度(mìdù)，使油和水分層（6）吸收芳香油中殘留的水分第五十一頁，共58頁。7.閱讀以下材料，回答相關(guān)問題：從玫瑰花中提取出的玫瑰精油被稱為“液體黃金”，是世界香料工業(yè)不可取代的原料，多用于制造高級香水、化妝品等。提取出的玫瑰精油不含有任何添加劑或化學(xué)原料，是純天然的護(hù)膚品，具有極好的抗衰老和止癢作用(zuòyòng)，能夠促進(jìn)細(xì)胞的再生、防止肌膚老化、撫平肌膚細(xì)紋，還具有使人放松、愉悅心情的功效。玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，揮發(fā)性較強(qiáng)。第五十二頁，共58頁。（1）根據(jù)材料中介紹的玫瑰精油的性質(zhì)，要提取玫瑰精油可以用水中蒸餾和法提取，但一般采用水中蒸餾的方法，其原因是該法具有的優(yōu)點(diǎn)。（2）某同學(xué)在實驗(shíyàn)中設(shè)計了如圖所示的裝置提取玫瑰精油，指出該裝置中的兩個錯誤，并予以改正。①錯誤1：；改正：。②錯誤2：；改正：。第五十三頁，共58頁。（3）對用上述裝置接收到的乳濁液進(jìn)行如下處理(chǔlǐ)：玫瑰油與水的混合物分層油層無水玫瑰精油較純凈的玫瑰精油。試劑A是，試劑C是，裝置B是，試劑C的作用是。（4）要在短期內(nèi)獲得大量的優(yōu)良玫瑰苗可采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，請回答下列問題：①要培養(yǎng)脫毒苗，應(yīng)選用部分作為培養(yǎng)材料。②利用無性繁殖技術(shù)繁殖植物的優(yōu)