大鼠MCAO模型的制作說(shuō)課講解課件

大鼠MCAO模型的制作大鼠MCAO模型的制作原理MCAO即大腦中動(dòng)脈閉塞，該模型阻斷頸外動(dòng)脈及其分支，且阻斷翼腭動(dòng)脈，以切斷顱外來(lái)源的側(cè)副循環(huán)血流。從頸外動(dòng)脈插入栓線，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈到大腦前動(dòng)脈，機(jī)械性阻斷大腦中動(dòng)脈發(fā)出處的血供來(lái)建立大腦中動(dòng)脈缺血模型。如果需要再灌注，只需拔出栓線結(jié)扎傷口，即可恢復(fù)大腦血供原理MCAO即大腦中動(dòng)脈閉塞，該模型阻斷頸外動(dòng)脈及其分支，且大鼠MCAO模型的制作說(shuō)課講解課件實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（1）手術(shù)器械+取腦器械：清洗干凈，簡(jiǎn)單消毒其他：干棉球，酒精棉球，大鼠板，固定線，自制拉鉤，培養(yǎng)皿麻醉藥：NS配制的10%水合氯醛，用法為0.35ml/100gIP，手術(shù)過(guò)程中可用1/4～1/3倍液追麻TTC染液：NS配制的1%紅四氮唑溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，2℃～4℃避光保存實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（1）手術(shù)器械+取腦器械：清洗干凈，簡(jiǎn)單消毒實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（2）栓線選擇：準(zhǔn)備直徑0.205mm、0.235mm、0.26mm三種粗細(xì)的魚線，實(shí)驗(yàn)中根據(jù)大鼠體重以及大鼠個(gè)體差異調(diào)整栓線處理：取一段5cm長(zhǎng)的魚線，在一端以及2cm、2.2cm處分別用記號(hào)筆作一個(gè)標(biāo)記，垂直在熔化的石蠟中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄層石蠟可牢固地粘附在魚線一端的表面實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（2）栓線選擇：準(zhǔn)備直徑0.205mm、0.2實(shí)驗(yàn)方法（1）動(dòng)物麻醉后仰臥位固定在鼠板上，剪毛后用75%乙醇簡(jiǎn)單消毒，頸正中線開(kāi)口實(shí)驗(yàn)方法（1）動(dòng)物麻醉后仰臥位固定在鼠板上，剪毛后用75%乙實(shí)驗(yàn)方法（2）沿正中鈍性分離兩側(cè)鼓泡腺體，暴露頸前肌群沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉和筋膜，暴露頸總動(dòng)脈及分支這兩步均用彎頭止血鉗進(jìn)行鈍性分離實(shí)驗(yàn)方法（2）沿正中鈍性分離兩側(cè)鼓泡腺體，暴露頸前肌群實(shí)驗(yàn)方法（3）首先分離頸總動(dòng)脈并穿單線備用沿頸總動(dòng)脈向遠(yuǎn)心端依次分離出頸外動(dòng)脈、甲狀腺上動(dòng)脈、枕下動(dòng)脈以及頸內(nèi)動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈及枕下動(dòng)脈穿雙線備用實(shí)驗(yàn)方法（3）首先分離頸總動(dòng)脈并穿單線備用實(shí)驗(yàn)方法（4）雙線結(jié)扎頸外動(dòng)脈和枕下動(dòng)脈后剪斷血管，在頸外動(dòng)脈殘端上用單線打一個(gè)松結(jié)動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈近心端以及頸內(nèi)動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈殘端上45度剪一小口，向頸內(nèi)方向插入栓線，扎緊固定線，松開(kāi)動(dòng)脈夾實(shí)驗(yàn)方法（4）雙線結(jié)扎頸外動(dòng)脈和枕下動(dòng)脈后剪斷血管，在頸外動(dòng)實(shí)驗(yàn)方法（5）用眼科鑷向?yàn)閮?nèi)上方輕推栓線，從血管分叉處開(kāi)始算距離，當(dāng)插入深度到達(dá)魚線的標(biāo)記處時(shí)，扎緊固定線若魚線堵在在1cm處，是誤進(jìn)翼顎動(dòng)脈，若在1.6cm堵住，則是卡在了入顱處。此時(shí)都應(yīng)回抽魚線調(diào)整方向再進(jìn)線，反復(fù)試幾次還不行最好換根栓線，很可能前端已經(jīng)變形如果是再灌注模型，則在缺血一定時(shí)間后拔出魚線，結(jié)扎死頸外動(dòng)脈殘端就能恢復(fù)頸總到頸內(nèi)的動(dòng)脈血供實(shí)驗(yàn)方法（5）用眼科鑷向?yàn)閮?nèi)上方輕推栓線，從血管分叉處開(kāi)始算實(shí)驗(yàn)方法（6）待大鼠蘇醒后，觀察癥狀，模型成功可見(jiàn)大鼠向?qū)?cè)繞圈或追尾、傾倒神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分參考Longa5分制法，缺血24h后進(jìn)行評(píng)分。0分:無(wú)神經(jīng)損傷癥狀;1分:不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪;2分:向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈;3分:向?qū)?cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。分值越高,說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重實(shí)驗(yàn)方法（6）待大鼠蘇醒后，觀察癥狀，模型成功可見(jiàn)大鼠向?qū)?cè)實(shí)驗(yàn)方法（7）-取腦脫頸椎處死大鼠，剪開(kāi)皮膚暴露頭及頸段，從頸椎處剪斷頸髓，去除肌肉和顱骨上的膜，剪刀伸進(jìn)去0.8cm～1cm，沿正中以及兩側(cè)45度分別剪一刀，用大號(hào)彎頭止血鉗去除顱骨眼科鑷?yán)瓟嘤材X膜，取出腦組織實(shí)驗(yàn)方法（7）-取腦脫頸椎處死大鼠，剪開(kāi)皮膚暴露頭及頸段，從實(shí)驗(yàn)方法（8）-染色腦組織用NS沖洗凈表面的毛和血跡，-20℃速凍10min后切片5～6片：第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。實(shí)驗(yàn)方法（8）-染色腦組織用NS沖洗凈表面的毛和血跡，-20切片置1%TTC染液中，60℃烘箱中染色10min用imagepro-plus6.0軟件計(jì)算梗塞面積

切片置1%TTC染液中，60℃烘箱中染色10min討論優(yōu)點(diǎn)不開(kāi)顱、效果肯定、可準(zhǔn)確控制缺血及再灌注時(shí)間對(duì)全身影響小、動(dòng)物存活時(shí)間長(zhǎng)，適于慢性腦損傷的研究缺點(diǎn)非直視下的手術(shù)動(dòng)物品系、體重、批次會(huì)影響結(jié)果。操作者手術(shù)熟練度要求較高討論優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)注意保溫動(dòng)作輕柔熟練麻醉藥用量寧少勿多控制進(jìn)線深度線拴法有一定的死亡率，淘汰率也比較高，做好預(yù)試模型不成功的大鼠要記錄和總結(jié)注意保溫謝謝！謝謝！大鼠MCAO模型的制作大鼠MCAO模型的制作原理MCAO即大腦中動(dòng)脈閉塞，該模型阻斷頸外動(dòng)脈及其分支，且阻斷翼腭動(dòng)脈，以切斷顱外來(lái)源的側(cè)副循環(huán)血流。從頸外動(dòng)脈插入栓線，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈到大腦前動(dòng)脈，機(jī)械性阻斷大腦中動(dòng)脈發(fā)出處的血供來(lái)建立大腦中動(dòng)脈缺血模型。如果需要再灌注，只需拔出栓線結(jié)扎傷口，即可恢復(fù)大腦血供原理MCAO即大腦中動(dòng)脈閉塞，該模型阻斷頸外動(dòng)脈及其分支，且大鼠MCAO模型的制作說(shuō)課講解課件實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（1）手術(shù)器械+取腦器械：清洗干凈，簡(jiǎn)單消毒其他：干棉球，酒精棉球，大鼠板，固定線，自制拉鉤，培養(yǎng)皿麻醉藥：NS配制的10%水合氯醛，用法為0.35ml/100gIP，手術(shù)過(guò)程中可用1/4～1/3倍液追麻TTC染液：NS配制的1%紅四氮唑溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，2℃～4℃避光保存實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（1）手術(shù)器械+取腦器械：清洗干凈，簡(jiǎn)單消毒實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（2）栓線選擇：準(zhǔn)備直徑0.205mm、0.235mm、0.26mm三種粗細(xì)的魚線，實(shí)驗(yàn)中根據(jù)大鼠體重以及大鼠個(gè)體差異調(diào)整栓線處理：取一段5cm長(zhǎng)的魚線，在一端以及2cm、2.2cm處分別用記號(hào)筆作一個(gè)標(biāo)記，垂直在熔化的石蠟中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄層石蠟可牢固地粘附在魚線一端的表面實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作（2）栓線選擇：準(zhǔn)備直徑0.205mm、0.2實(shí)驗(yàn)方法（1）動(dòng)物麻醉后仰臥位固定在鼠板上，剪毛后用75%乙醇簡(jiǎn)單消毒，頸正中線開(kāi)口實(shí)驗(yàn)方法（1）動(dòng)物麻醉后仰臥位固定在鼠板上，剪毛后用75%乙實(shí)驗(yàn)方法（2）沿正中鈍性分離兩側(cè)鼓泡腺體，暴露頸前肌群沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉和筋膜，暴露頸總動(dòng)脈及分支這兩步均用彎頭止血鉗進(jìn)行鈍性分離實(shí)驗(yàn)方法（2）沿正中鈍性分離兩側(cè)鼓泡腺體，暴露頸前肌群實(shí)驗(yàn)方法（3）首先分離頸總動(dòng)脈并穿單線備用沿頸總動(dòng)脈向遠(yuǎn)心端依次分離出頸外動(dòng)脈、甲狀腺上動(dòng)脈、枕下動(dòng)脈以及頸內(nèi)動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈及枕下動(dòng)脈穿雙線備用實(shí)驗(yàn)方法（3）首先分離頸總動(dòng)脈并穿單線備用實(shí)驗(yàn)方法（4）雙線結(jié)扎頸外動(dòng)脈和枕下動(dòng)脈后剪斷血管，在頸外動(dòng)脈殘端上用單線打一個(gè)松結(jié)動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈近心端以及頸內(nèi)動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈殘端上45度剪一小口，向頸內(nèi)方向插入栓線，扎緊固定線，松開(kāi)動(dòng)脈夾實(shí)驗(yàn)方法（4）雙線結(jié)扎頸外動(dòng)脈和枕下動(dòng)脈后剪斷血管，在頸外動(dòng)實(shí)驗(yàn)方法（5）用眼科鑷向?yàn)閮?nèi)上方輕推栓線，從血管分叉處開(kāi)始算距離，當(dāng)插入深度到達(dá)魚線的標(biāo)記處時(shí)，扎緊固定線若魚線堵在在1cm處，是誤進(jìn)翼顎動(dòng)脈，若在1.6cm堵住，則是卡在了入顱處。此時(shí)都應(yīng)回抽魚線調(diào)整方向再進(jìn)線，反復(fù)試幾次還不行最好換根栓線，很可能前端已經(jīng)變形如果是再灌注模型，則在缺血一定時(shí)間后拔出魚線，結(jié)扎死頸外動(dòng)脈殘端就能恢復(fù)頸總到頸內(nèi)的動(dòng)脈血供實(shí)驗(yàn)方法（5）用眼科鑷向?yàn)閮?nèi)上方輕推栓線，從血管分叉處開(kāi)始算實(shí)驗(yàn)方法（6）待大鼠蘇醒后，觀察癥狀，模型成功可見(jiàn)大鼠向?qū)?cè)繞圈或追尾、傾倒神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分參考Longa5分制法，缺血24h后進(jìn)行評(píng)分。0分:無(wú)神經(jīng)損傷癥狀;1分:不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪;2分:向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈;3分:向?qū)?cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。分值越高,說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重實(shí)驗(yàn)方法（6）待大鼠蘇醒后，觀察癥狀，模型成功可見(jiàn)大鼠向?qū)?cè)實(shí)驗(yàn)方法（7）-取腦脫頸椎處死大鼠，剪開(kāi)皮膚暴露頭及頸段，從頸椎處剪斷頸髓，去除肌肉和顱骨上的膜，剪刀伸進(jìn)去0.8cm～1cm，沿正中以及兩側(cè)45度分別剪一刀，用大號(hào)彎頭止血鉗去除顱骨眼科鑷?yán)瓟嘤材X膜，取出腦組織實(shí)驗(yàn)方法（7）-取腦脫頸椎處死大鼠，剪開(kāi)皮膚暴露頭及頸段，從實(shí)驗(yàn)方法（8）-染色腦組織用NS沖洗凈表面的毛和血跡，-20℃速凍10min后切片5～6片：第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。實(shí)驗(yàn)方法（8）-染色腦組織用NS沖洗凈表面的毛和血跡，-20切片置1%TTC染液中，60℃烘箱中染色10min用imagepro-plus6.0軟件計(jì)算梗塞面積

切片置1%TTC染液中，60℃烘箱中