康敏元專利唾液乳酸桿菌PM-A0006治療兒童過敏性疾病的臨床試驗

唾液乳酸桿菌加低聚果糖治療兒童中重度特異性皮炎濕疹的有效性和安全性優(yōu)于單純低聚果糖：雙盲隨機臨床試驗臺北榮軍醫(yī)院兒科花蓮三軍總醫(yī)院兒科H.-J.Peng_國立陽明大學醫(yī)學研究與教育部摘要背景：部分益生菌和益生元可改善兒童特異性皮炎，如果兩者協(xié)同作用效果可能增強。目的：比較唾液乳酸桿菌低聚果糖和低聚果糖在中重度特異性皮炎兒童中的作用。方法：共納入0歲中重度特異性皮炎兒童（>25）隨機分為組，每組0J,均給予膠囊顆次，次天，共周。實驗組予唾液乳酸桿菌低聚果糖（合生元組）；對照組予低聚果糖（益生元組）。治療前及治療后周、周、周分別記錄評分。同時監(jiān)測實驗室結(jié)果及治療方法。結(jié)果：兩組年齡、性別、病程等及臨床特點、評分無顯著性差異，治療周時治療組評分（27.4±12.7）明顯低于對照組（36.3±14.9）（P=0.022）。10周時組亦有顯著性差異。周時治療組嚴重度明顯低于對照組（P=0.013）,52%治療組兒童為輕度，而對照組為=治療組兒童藥物治療頻率和嗜酸細胞陽離子蛋白水平在周時明顯低于周時。結(jié)論：唾液乳酸桿菌低聚果糖在治療中重度時效果好于單獨使用低聚果糖。但需要隨訪確定長期效果。兒童發(fā)病率近十余年來明顯增加，尤其在西方國家，在亞洲如臺灣隨著經(jīng)濟水平的增長和都市化進程，這種趨勢也愈來愈明顯。根據(jù)衛(wèi)生學說，隨著環(huán)境和生活條件的改變，免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)機制和或反應受到影響，尤其在生命早期，免疫系統(tǒng)變化可導致對抗原刺激的免疫反應異常，從而導致特應性疾?。òǎ┑脑黾?。進來的研究顯示腸道微生態(tài)的變化導致免疫系統(tǒng)發(fā)育異常及出現(xiàn)特應性疾病的傾向。已有研究調(diào)查是否能通過改善腸道微生態(tài)，預防或改善。兩種途徑：（）益生元經(jīng)食物攝入；（）攝入腸道正常細菌如益生菌。益生元如乳果糖、長鏈低聚果糖是不能被消化的飲食成分，可選擇性刺激一種或多種腸道菌群的生長和或活性。在飲食中添加益生元對抑制特應性疾病有部分效果，但無肯定的結(jié)果。根據(jù)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織意見，益生菌是活菌，如果攝入適當?shù)牧繉λ拗鹘】涤幸妗Ｒ嫔绕涫侨闂U菌可預防或治療兒童。但存在爭議，因這一作用受菌種的影響。最近提出第三種方案即聯(lián)合使用益生元與益生菌，即所謂合生元。雖然僅有數(shù)個研究報道，但在治療時合生元較單用益生元更好，在改善特應性疾病時較安慰劑更好。而在一項隨機、對照研究中，嬰兒接受含混有短雙歧桿菌M-16V和乳果糖低聚果糖的深度水解配方奶或不含合生元的深度水解配方奶共周，合生元未改變嬰兒腸道菌群，亦未改變嚴重程度（與對照組相比較）。所以益生菌與益生元可能有協(xié)同作用但需要特異性菌株。該特異性菌株有免疫刺激特性，該特性可見于唾液乳桿菌，但既往未用于兒童的研究。因此本研究的目的在于了解唾液乳桿菌和低聚果糖聯(lián)合使用較單用低聚果糖是否對中重度兒童更有效。方法：研究對象及方法納入0歲在臺北榮軍醫(yī)院就診兒童，符合關于的診斷標準，有中重度（評分）5且癥狀持續(xù)至少天。應用計算機產(chǎn)生的隨機序列（ProMDBiotechCo.,Ltd）將納入對象隨機分成組，治療組（合生元組）和對照組（益生元組）各0L首先根據(jù)性別、年齡和中重度診斷進行分成層。為確保一致性，同一個調(diào)查者（并不清楚分組）納入病人，并在進行實驗的周（納入時）、周、周、周進行評分。對于合生元組，每一個膠囊包括低聚果糖活益生菌2唾液乳桿菌,對照組每個膠囊中含有低聚果糖玉米淀粉，每個納入者口服包含合生元或益生元的膠囊顆次，次天，共周。兩種膠囊在外形、氣味、口感上一致，將膠囊分裝后根據(jù)隨機分類表直接下發(fā)給病人。當所有數(shù)據(jù)分析完成后解密分組。供應商定期檢查膠囊內(nèi)細菌活力，告知父母將剩余的膠囊交予研究小組，同時實驗期間不給孩子服用其他益生菌。孩子未預選，在研究的前周中，給每個納入者抽血并提取血清，發(fā)現(xiàn)所有納入者對六種常見過敏原中至少一種敏感/在實驗過程中，維持患兒常規(guī)治療，包括局部使用糖皮質(zhì)激素和神經(jīng)鈣蛋白抑制劑。戊酸二氟米松軟膏每含二氟米松戊酸鹽,神經(jīng)鈣蛋白抑制劑（吡美莫司軟膏）用于面部和腹股溝區(qū)域皮損。兩組研究期間使用糖皮質(zhì)激素量差異無統(tǒng)計學意義。接受全身使用糖皮質(zhì)激素（如口服激素）或評分<者推出實驗。本實驗經(jīng)臺灣榮軍醫(yī)院倫理學委員會批準，了解患兒病史的家長或監(jiān)護人簽署書面同意書。乳酸桿菌和安慰劑膠囊的準備我們使用唾液乳桿菌，其可調(diào)節(jié)免疫反應，由臺灣BioresourseCollection食品工業(yè)研究發(fā)展協(xié)會提供（.tw/index.do）。唾液乳桿菌經(jīng)IHTD系統(tǒng)[interferon（IFN）HighThroughputDetectingSystem;ProMDBiotechCo.,Ltd]由正常健康人群腸道中分離出來，具有益生菌特性，高密度培養(yǎng)系統(tǒng)用于產(chǎn)生包含1011cfu/g唾液乳桿菌PM-A0006凍干粉，每一個膠囊包含x唾液乳桿菌低聚果糖。益生元膠囊僅有低聚果糖。所有膠囊由ProMDBiotechCo.儲存于<4℃環(huán)境中，該公司為臺南CurrentGoodManufactur-ingPractices（cGMP）facilities。穩(wěn)定性實驗顯示細菌活力在室溫下可保持至少個月。小鼠（FR-AC00235）的急性口服毒性實驗由臺北DevelopmentCenterforBiotechnology進行，使用唾液乳桿菌最大劑量5000mg/kg喂養(yǎng)小鼠天未顯示副作用。效果評估在試驗前周收集納入者一般資料。本研究的主要結(jié)論為臨床有效性，并以試驗周、周、周及周（即試驗結(jié)束后周）的評分進行評判。評分為體表受累面積（）,將紅斑、水腫丘疹、滲出結(jié)痂、表皮脫落、苔蘚化、皮膚干燥分別評分，計算總數(shù)每項總分。主觀癥狀包括瘙癢和睡眠障礙（病人自身通過直觀模擬標度尺進行評分，每項分，總分）。評分為分，嚴重度則根據(jù)評分分為輕（＜25）、中（2550）、重度（＞50）。生活質(zhì)量作為繼發(fā)變化以項指標進行評估，包括皮膚癥狀（瘙癢或水腫，特定時間或季節(jié)出現(xiàn)的皮膚瘙癢，顏面部及肘窩、■窩處濕疹樣表現(xiàn)，進食某種食物后瘙癢及不適）；活動受限（不能進行一般運動、活動）；睡眠障礙（因瘙癢難以入睡，因瘙癢夜間醒來，難以維持睡眠）；白天活動障礙（影響日常工作、學習，不能集中精力工作或?qū)W習，影響社會活動，日常生活受累）；局部藥物使用（局部使用糖皮質(zhì)激素和神經(jīng)鈣蛋白抑制劑）。上述每一項均進行評分：。不存在；1極少出現(xiàn)（次月）；2有時出現(xiàn)；,經(jīng)常出現(xiàn)；4每天出現(xiàn)。每一項由父母在日記中每日記錄，在實驗的周、周和周由調(diào)查者檢查。為確定治療結(jié)束是否復發(fā)，治療結(jié)束后周即第周患兒復診進行評分及實驗室檢查。實驗室檢查實驗前抽血，應用PharmaciaCAP系統(tǒng)（PharmaciaDiagnosticsAB,Uppsala,Sweden）評估種常見過敏原：房塵螨（屋塵螨和粉塵螨）、貓毛、狗毛、牛奶、雞蛋白。在周、周應用UniCAPFEIA（PharmaciaDiagnosticsAB評估嗜酸細胞陽離子蛋白和IgE。在周、周、周檢測血常規(guī)（FBCDC）,應用血液分析儀（BeckmanCoulter,Fullerton,CA,U.S.A.檢測血嗜酸性粒細胞。實驗室檢測結(jié)果也作為繼發(fā)的結(jié)果?？赡艿母弊饔糜涗泴嶒炂陂g任何副作用如腹瀉、腹痛、皮疹等。統(tǒng)計學分析本研究為隨機、雙盲研究，實驗前不存在相應數(shù)據(jù)，我們納入例患兒后不再添加新的研究對象，僅以此例患兒為研究對象。本研究基礎在于假設治療組周時評分下降患兒的百分數(shù)高于對照組。治療組和對照組觀察到的百分率分別為和6結(jié)果以平均數(shù)土標準差或用中位數(shù)并可信區(qū)間表示，絕對變量以和表示。組間比較應用兩樣本檢驗、MannWhitneyU檢驗、Pearsonv2檢驗，組內(nèi)變化采用配對檢驗。兩組評分變化以平均數(shù)表示并以線性模型區(qū)別兩組及時間效應。所有統(tǒng)計學評估采用雙向檢驗，以a為差異有統(tǒng)計學意義。使用軟件（SPSSInc.,Chicago,IL,U.S.A.）進行統(tǒng)計學分析。患兒一般情況歲兒童例被納入，隨機分為組，例為治療組（合生元組），例為對照組（益生元組），所有納入者血漿標本中至少有一項IgE＞0.35kU/L。治療組有例患兒因急性發(fā)作使用糖皮質(zhì)激素，對照組中例不符合評分標準（評分＜25）,例拒絕繼續(xù)試驗，例因急性發(fā)作使用糖皮質(zhì)激素，這些病人的退出在試驗開始前。因此每組有例參與試驗。表為組患兒一般特征、納入前的臨床及實驗室結(jié)果，提示周時兩組患兒一般特征、臨床表現(xiàn)差異無統(tǒng)計學意義。治療組有例男性，例女性，對照組有例男性，例女性，平均年齡（士）歲和（士）歲。嚴重度評分評分周時治療組和對照組分別為（士）0（士）5治療組中人（）中度和人（）重度。對照組中人（）中度,6（）重度。表患兒一般特征及基礎情況

VuiiblsTreim血赳力叩,:17)C'iaErd即加「(二二17)P-ralufiAgefv￡ars}/心皿±5E加士消&9+必『3隨Sei川陰」」I7/LCli/15C'I72Alhgir產(chǎn)父,r1時U(85)11(73)C4S4AsMuhislurv.將人口阿4115}H19)國時Toficil,卻ercidu動群】'n1Z+189}K網(wǎng)的即融；xio3|1L'median時17t-l(l'1)?■1(73網(wǎng)C43IRBCcW，I^|1L-1),radian]QR}+51也口47)4^,t(4+-S-0)0'2DC曲[dLir.tdian^QR)13(124-13-5)R'9(12-6-1;?；『的5Hateletf(x103pL*^mediangR)iS41305-365；口，湖icelkpL-1):ir.￡dhn5可720BOO-liM)611(4G3-516；—4(jigr1),mdian丘5{13WTZ/，356(frl-534)(WJITotal[gE1|'RJieL'),median(IQR)網(wǎng)(51%弗1)□M(30M9B)0-841SOK加mean其KjExltnl"lit(112*484)15'1四血easily1"151112-16)14(10-15)C'074l嗜,酸性粒細胞計數(shù)，嗜酸細胞陽離子蛋白電生活質(zhì)量，兩樣本檢驗，-bpe檢驗，Ma檢驗。tn『如5CQR如stile,1mean+SD607+12-054-i二1+5C'134D螫篇‘臉如7(It)11(41)一疆」；一1^W」,…、一一一，10,174}、一、__、LE田）_表1顯示小組患兒士臨床嚴重度（通過1卜,評分表示）。圖1顯示周、周、周時的。圖顯示評分從納入時（周）到周、周、_0的變化趨勢。治療組評分在周、周時變化較大。治療組周時評分明顯低于對照組（P<0.05）。圖顯示周、周、周輕中重度患兒的百分率。治療組與對照組比較，臨床嚴重性明顯降低，而且，雖然納入時兩組均有中重度周時輕度的百分率兩組明顯不同，治療組（％/27），對照組（8/27）（數(shù)據(jù)未提供）。Tmtwni職叼ACeca斕.呻Tmtwni職叼ACeca斕.呻—L'tratitl@唧|c)□Mm□.BkU|c)□Mm□.BkUIW-本檢驗，未見顯著性差異。"—"2()研究期間兩組患兒評分的變化，以平均數(shù)士標準差表示，以線圖評估不同時段和組間評分變化，提示組間有顯著性差異，提示不同時段有顯著變化。()每種嚴重度百分比的直方圖，應用檢驗比較組間的嚴重度差別，治療期間每一時點兩組無顯著性差異，治療組輕度百分率明顯高于對照組()。臨床與實驗室結(jié)果表顯示兩組治療周后臨床評分，與周時情況比較，組均有改善，周時，評分指標之一即強度兩組間有顯著差異：治療組為()8對照組危()(P=0.013),且總的評分組間明顯不同：治療組為27.4±12.7,對照組為36.3±14.9(P=0.022)。表周時評分TMMetngt-otipb=用Ctnirt-lgit,iip,?17)F-Vdlu^SCOHAJjF訊阻逐'rtifliiJi([QP.；httnt#5(i-l-lI-2173(4J-B'7)C371hiensiivJS(Z-l?)C'91SSubje?'”puriiui11川2(2-S)0711Subjective二deepk^s11引1(1-1)—兩組'CO評分明顯下降(均P＜片001)。治療組周談SC評分組低幅度＞0%者明顯多于對照組(的==示示提0v6P=。示提-示)。8周時血清卜卜儂在實驗組為5.2(IQR3.414.1),對照組為12.4(IQR6.437.4),但差異無統(tǒng)計學意義。其他臨床結(jié)果如生活質(zhì)量評分和周時藥物使用情況兩組間差異無統(tǒng)計學意義(結(jié)論未顯示)。表顯示兩組周、周時藥物使用頻率、總評分和水平。治療組藥物使用頻率(P=0.007)和水平(P=0.002)治療末明顯降低，對照組藥物使用和總評分差異無統(tǒng)計學意義。水平在周時明顯降低(P=0.01)。表兩組患兒藥物使用頻率，生活質(zhì)量評分，血清嗜酸細胞陽離子蛋白變化TreaLmeilLCdllrol.VariablesWeek4W-eelc8Week4We?ek8FrequencyoEmedicine心€（Li_m啟s/moiiLh）Mean.+SD314士16名US±I9d34吆±1803b0±19。P-value"0007*0＜）85ScaleofqualilyoflifeMean.+SD\69±17414-2±1己4178±7917-9±108P-va]ufia0-0860^64-SerumECPMean.+SD39嗚±598172±26441?！?2424S±267P-valLBE1'0-002*00IQ*通過組內(nèi)配對檢驗或檢驗得出值，血清嗜酸細胞陽離子蛋白不正常，組內(nèi)顯著性差異（月和月比較）副作用合生元正例輕度腹瀉但能很好耐受治療。討論我們研究的主要發(fā)現(xiàn)是帶有益生菌如唾液乳桿菌益生元如低聚果糖的合生元較但用益生元明顯減少歲兒童嚴重性，此結(jié)論基于評分的變化，而非兒童的天然變異。Sistek等定義穩(wěn)定的正常范圍內(nèi)變異試驗前監(jiān)測評分變異w11分。Brouwer等認為評分僅有分變化考慮是在不同觀察者及同一觀察者的變異性。故此認為分為存在變化的臨界值，本研究中變化分，體外該菌群有免疫調(diào)節(jié)作用，本研究是首次將唾液乳桿菌用于治療兒童。同時提示益生元低聚果糖單獨使用亦可部分改善嚴重度。我們觀察到僅有適度的改變，同既往關于益生菌或益生元的研究結(jié)果。腸道菌群變化（尤其在生命早期）是特應性疾病的易感因素。固推測：加入非傳染性菌種（益生菌）或在食物中添加某些可選擇性刺激某些細菌的生長和活性的成分（益生元），可能改善微生態(tài)變化。問題是哪種菌體或食物成分可用？復習個使用益生菌治療的隨機對照研究（）t等發(fā)現(xiàn)某些益生菌如鼠李屬乳桿菌對預防有效，但未顯著改變多數(shù)炎癥指標。Boyle等系統(tǒng)回顧發(fā)現(xiàn)益生菌不推薦治療濕疹，因菌株不同使得各試驗結(jié)論有明顯異質(zhì)性，在益生菌治療兒童的分析中，Michail等認為益生菌治療僅有中等度作用，且對中重度作用好于輕度的另一項分析中Lee等認為益生菌預防作用好于治療。同樣的，F(xiàn)anaro等在一項關于益生元包括短鏈乳糖寡聚體和長鏈果糖寡聚體的回顧性分析發(fā)現(xiàn)該類食物添加劑可選擇性刺激腸道微環(huán)境中某類細菌如雙歧桿菌、乳桿菌的生長，抑制致病菌的生長。和綜n單獨應用益生元的臨床研究，認為沒有足夠的證據(jù)推薦作為食品添加