中藥化學(xué)成分的研究的一般方法課件

中藥化學(xué)成分的研究的一般方法石河子大學(xué)藥學(xué)院中藥一班宋宗強

2017.03.05中藥化學(xué)成分的研究的一般方法石河子大學(xué)中藥化學(xué)成分研究概況及發(fā)展趨勢歷史中國：公元12世紀，使用大麥發(fā)芽制造飴糖；明代李時珍《本草綱目》中記述五倍子“看藥上長起長霜，藥則已成”，長霜即為沒食子酸結(jié)晶，另外還記述了升華法制備純化樟腦的過程。古代我國處于世界領(lǐng)先地位。近代至新中國成立之前，我國中醫(yī)藥發(fā)展幾乎停滯，直到20世紀70年代以后才有較大發(fā)展。中藥化學(xué)成分研究概況及發(fā)展趨勢日本：近幾十年發(fā)展迅速，對眾多常用中藥的化學(xué)成分進行了較深入的研究，取得了一大批領(lǐng)先成果。如人參、黃芪、葛根、芍藥、柴胡等。中藥化學(xué)研究概況：建國以來我國從中藥或天然藥物中研制開發(fā)的新藥有40余種，例如青蒿素、川芎嗪、靛玉紅等。我國作過比較深入的化學(xué)成分或藥學(xué)研究的中藥有200余種日本：

有200余種有效成分被制成500余種制劑已用于臨床。分離出的有效成分種類以生物堿、二萜、三萜、黃酮類居多。

20年代，我國開始研究麻黃堿（左旋麻黃堿），使麻黃堿成為世界性常用藥物。麻黃堿具有興奮中樞、收縮血管、增強汗腺、唾液腺分泌、緩解平滑肌痙攣等作用，是麻黃平喘的主要成分。

30年代發(fā)現(xiàn)了延胡索乙素（消旋四氫巴馬?。?、漢防己甲素（粉防己堿）、漢防己乙素（防己諾林堿），均有鎮(zhèn)痛作用。

40年代陸續(xù)生產(chǎn)了麻黃堿、蘆丁、洋地黃毒苷、咖啡因、小檗堿、山道年、狄戈辛、西地蘭、阿托品、長春新堿等。有200余種有效成分被制成500余種制70年代以后羥基喜樹堿—抗癌高三尖杉酯堿—抗白血病天花粉蛋白—引產(chǎn)青蒿素、蒿甲醚、雙氫青蒿素—抗瘧70年代以后中藥化學(xué)研究的發(fā)展趨勢更注重以活性為指標追蹤有效成分的分離，我國尤為重視建立符合中醫(yī)藥理論的活性指標，更能體現(xiàn)中醫(yī)藥特色。更注重多學(xué)科的密切配合（如藥理學(xué)、藥代動力學(xué)、分子生物學(xué)等），吸收新技術(shù)、新方法并結(jié)合中醫(yī)藥理論和傳統(tǒng)經(jīng)驗。中藥化學(xué)研究的發(fā)展趨勢更注重以活性為指標追蹤有效成分的分目前，對中藥復(fù)方有效成分的研究方法有兩種，一是將化學(xué)成分分離和藥理活性測試分階段交替進行。另一是以簡單、靈敏、可靠的活性測試方法為向?qū)?，緊密結(jié)合已建立的能夠確切反映復(fù)方療效的動物模型，對分離的每一個部位進行活性定量評估，追蹤活性部位，從而分離鑒定出活性成分。目前，對中藥復(fù)方有效成分的研究方法有兩中藥化學(xué)成分的研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型：（一）從物質(zhì)基本類型分：有機物、無機物。（二）按元素組成、結(jié)構(gòu)母核分：生物堿、黃酮、苷、醌、甾、萜、苯丙素等。（三）按酸堿性分：酸性、堿性、中性。（四）按溶解性分：非極性（親脂性）、中極性、極性（親水性）中藥化學(xué)成分的研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型：（五）按活性分：有效成分、無效成分有效成分：具有生物活性，能用分子式和結(jié)構(gòu)式表示，并具有一定的物理常數(shù)的單體化合物。無效成分：與有效成分共存的無生物活性的成分稱為無效成分。（六）按生合成途徑分：一級代謝產(chǎn)物（如糖、蛋白質(zhì)，脂肪）、二級代謝產(chǎn)物（如生物堿、黃酮、皂苷）。（五）按活性分：有效成分、無效成分中藥化學(xué)成分提取分離方法的基本

原理及應(yīng)用一、基本概念1、提?。豪眠m當(dāng)?shù)娜軇┗蚍椒?，將所要成分盡可能從原料中完全提出的過程。2、分離：將提取物中所含的各種成分一一分開，并將得到的單體加以精制的過程。中藥化學(xué)成分提取分離方法的基本

原理及應(yīng)用一、基本概念二、提取方法

水溶劑提取法：溶劑親水性有機溶親脂性有機溶水蒸氣蒸餾法超臨界流體萃取法（SFE）升華法壓榨法二、提取方法（一）溶劑提取法1、原理根據(jù)中藥中各種成分的溶解性不同，選用對所需成分溶解度大而對其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從藥材組織中溶解出來的一種提取方法。選擇溶劑依據(jù)相似相溶原理。（一）溶劑提取法2、選擇溶劑的要點

對所要成分溶解度大沸點適中容易回收低毒安全中藥化學(xué)成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因存在狀態(tài)不同溶解性不同（有點相似相容的感覺）。最常用的溶劑為乙醇。2、選擇溶劑的要點3、溶劑的分類

強極性溶劑：水親水性有機溶劑：能與水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）親脂性有機溶劑：不與水任意混溶，可分層（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚）常用溶劑的極性大小順序：石油醚<四氯化碳<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇（甲醇）<水3、溶劑的分類

強極性溶劑：水

4、化合物的結(jié)構(gòu)與親水性、親脂性的關(guān)系

（1）分子結(jié)構(gòu)中親水性基團（羧基、羥基、氨基）越多，極性越大，親水性越強，反之則親脂性越強。（2）分子中非極性部分越大，碳鏈越長或結(jié)構(gòu)越大，則親脂性越強。（3）結(jié)構(gòu)母核相同的成分，分子中功能基的極性越大，或極性功能基數(shù)量越多，則整個分子的極性越大，親水性越強，親脂性越弱?？磳ΨQ性來判斷極性

4、化合物的結(jié)構(gòu)與親水性、親脂性的關(guān)系

（1）分子結(jié)構(gòu)中親5、溶劑的選擇

(1)水：為價廉、易得、使用安全的強極性溶劑。適于提取無機鹽、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機酸鹽、生物堿鹽、苷類等。清水的

(2)親水性有機溶劑：以乙醇最常用。高濃度提取親脂性成分，低濃度提取親水性成分。(3)親脂性有機溶劑：具有較強的選擇性，對揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹脂、內(nèi)酯、某些生物堿及一些苷元均可提取出來。優(yōu)缺點：沸點低，濃縮回收方便，但易燃、有毒、價貴，穿透力差。5、溶劑的選擇

(1)水：為價廉、易得、使用安全的強極（二）水蒸氣蒸餾法適于具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的有效成分的提取。揮發(fā)油、小分子生物堿、酚類、游離醌類等。（三）超臨界流體萃取法最常用的是二氧化碳超臨界萃取法，環(huán)保、成本低、提取分離一步完成。分子的極性、沸點和分子量的大小與其在二氧化碳超臨界流體中的溶解性密切相關(guān)。（四）升華法（五）壓榨法（二）水蒸氣蒸餾法三、分離精制方法（一）溶劑法（二）沉淀法（三）分餾法（四）膜分離法（五）結(jié)晶法（六）色譜分離法三、分離精制方法（一）溶劑法（一）溶劑法

1、酸堿溶劑法（1）酸溶：有機堿性成分可與無機酸成鹽而溶于水。（2）堿溶：具有羧基，用碳酸氫鈉；具有酚羥基，用氫氧化鈉；具有內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的成分可被皂化而溶于水。

酸沉堿提法堿沉酸分法（一）溶劑法

1、酸堿溶劑法堿沉酸分法2、溶劑分配法原理：利用混合物中各成分在互不相溶的兩相溶劑中分配系數(shù)不同而達到分離的方法。各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。一般采用全量多次分配提高萃取效率。需要注意的是防止乳化。溶劑的選擇：對于分離極性較大的成分，用正丁醇-水；分離中等極性成分，用乙酸乙酯-水；分離低極性成分，用氯仿（或乙醚、石油醚等）-水。所用裝置：分液漏斗、連續(xù)液-液萃取裝置、液滴逆流層析裝置。2、溶劑分配法（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：常用來粗分，是將總提物分散于水中，依次用石油醚（或環(huán)己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓回收溶劑得到相應(yīng)極性的成分。（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：中藥化學(xué)成分的研究的一般方法課件（2）逆流連續(xù)萃取法

利用兩相溶劑比重不同可自然分層和分散液滴穿過連續(xù)相溶劑時發(fā)生傳質(zhì)的原理，用一根或數(shù)根萃取管制成逆流連續(xù)萃取裝置。管內(nèi)的瓷環(huán)，增加液滴上升的路程和在連續(xù)相中停留的時間，更重要的是上升的液滴因撞擊填充物而被分散，擴大了兩相溶劑萃取的接觸面積，使更萃取完全。優(yōu)點：克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻煩。（2）逆流連續(xù)萃取法

利用兩相溶劑比重不同可自然分層和分散（3）逆流分布法（CCD）對性質(zhì)相似的異構(gòu)體或同系物分離效果好?；驹砣允抢没旌衔镏谐煞衷趦煞N不相混溶的溶劑中分配系數(shù)的不同，經(jīng)過在兩相溶劑中多次轉(zhuǎn)移，而使它們達到分離的目的。（4）液滴逆流層析法（DCCC）是在逆流分布法基礎(chǔ)上發(fā)展的高分離效能的逆流分布法，分離管有100~1000根，互相串聯(lián)，上行法時，分離管內(nèi)充滿重相作為固定液相，利用泵將輕相（移動相）帶著樣品液進入分離管，形成液滴通過分離管，流出的移動相通過檢測，分部收集。（3）逆流分布法（CCD）溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：兩相溶劑不相混溶，混合物中各單一成分在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)差別越大越好。分離酸堿兩性化合物時，緩沖液是很好的溶劑。操作注意：（1）先將兩相溶劑相互充分飽和。（2）采用等體積兩相溶劑的方式。（3）欲分離混合物的濃度不宜過高。溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：（二）沉淀法

1、酸堿沉淀法：例如：生物堿、黃酮、蒽醌

2、專屬試劑沉淀法：例如：雷氏銨鹽沉淀季銨堿、膽甾醇沉淀甾體皂苷；明膠沉淀鞣質(zhì)。3、分級沉淀法：改變加入溶劑的極性或數(shù)量使沉淀逐步析出的方法。例如：多糖、蛋白質(zhì)的水溶液，分次加乙醇，使含醇量逐步提高，則可得到分子量由大到小的多糖、蛋白質(zhì)；皂苷的乙醇液，分次加入乙醚或乙醚-丙酮，可按極性從小到大逐步沉淀。（二）沉淀法

1、酸堿沉淀法：4、鉛鹽沉淀法中性醋酸鉛：與酸性或酚性物質(zhì)沉淀堿性醋酸鉛：除以上物質(zhì)外，還可沉淀具有醇羥基、酮基、醛基結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。脫鉛：通入硫化氫法；中性硫酸鹽法；陽離子交換法。5、鹽析法在混合物的水溶液中，加入無機鹽（常用的是NaCL，其它還有Na2S、MgSO4、NH4SO4）至一定濃度或達到飽和，使某些成分沉淀析出或用有機溶劑萃取出而達到分離的目的。4、鉛鹽沉淀法（三）分餾法利用混合組分中各成分的沸點不同而分離的一種方法。用于液體混合物的分離。（四）膜分離法利用天然或人工合成的高分子膜，以外加壓力或化學(xué)位差為推動力，對混合物溶液進行分離、分級、提純和富集的方法。反滲透、超濾、微濾、電滲析及傳統(tǒng)的透析法均為膜分離技術(shù)。原理是大分子不能透過膜而被截留，小分子能透過膜，使分子大小不同的物質(zhì)得到分離。關(guān)鍵是選擇適宜的膜。（三）分餾法（五）結(jié)晶法

1、結(jié)晶的條件（1）溶劑：選擇合適的溶劑對結(jié)晶的形成是關(guān)鍵。合適的溶劑應(yīng)對欲分離的成分熱時溶解度大，冷時溶解度小，而對雜質(zhì)則冷熱溶解度一致；沸點要適中；不與被分離成分產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。選擇溶劑依據(jù)“相似相溶”原理。（五）結(jié)晶法

1、結(jié)晶的條件（2）溫度通常在加溫的情況下，溶解過濾，除雜，濃縮，放冷。最合適的結(jié)晶溫度5~10度。（3）時間一般3~5天或更長時間。（4）濃度一般是多一些溶劑，放置使其慢慢揮發(fā)到合適的濃度。（5）雜質(zhì)（6）有效成分的含量越高，越易結(jié)晶。（2）溫度2、結(jié)晶溶劑的選擇對所需成分的溶解度隨溫度不同而有顯著差別，同時不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；查閱相關(guān)文件，參考“相似相溶”規(guī)律；選擇混合溶劑，低沸點溶劑對物質(zhì)溶解度大，高沸點溶劑對物質(zhì)的溶解度??；常用溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等。2、結(jié)晶溶劑的選擇（六）色譜分離法1、吸附色譜利用同一吸附劑對混合物中各種成分吸附能力的差異，而使各成分達到分離目的的色譜方法。吸附能力的強弱是由吸附劑和被吸附物質(zhì)的性質(zhì)決定的。吸附色譜法的分離效果，完全由吸附劑，溶劑和被分離物質(zhì)的性質(zhì)決定。（六）色譜分離法（1）常用吸附劑：硅膠：多孔，微酸性，其吸附能力稍弱于氧化鋁。吸附作用是由于顆粒表面有很多硅醇基，它可以和許多化合物形成氫鍵而具有一定的吸附作用，所以硅膠吸附作用的強弱與硅醇基的含量有關(guān)。硅醇基還易吸附水分，吸附的水分越多，吸附其他化合物的能力越弱。吸水量超過12%就不能做為吸附劑了。（1）常用吸附劑：當(dāng)加熱到了100-110℃時即可除去絕大多數(shù)硅醇基吸附的水分，恢復(fù)吸附活力，這一過程稱為活化。當(dāng)溫度上升到500℃時，硅膠表面的硅醇基則脫水縮合轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩醐h(huán)結(jié)構(gòu)，從而喪失吸附活性。硅膠適于分離的化合物范圍很廣泛，但不宜分離堿性化合物。當(dāng)加熱到了100-110℃時即可除去絕大多數(shù)硅醇基吸附的水分*氧化鋁由氫氧化鋁直接在高溫下脫水制得，帶微堿性，適于分離堿性成分。聚酰胺適于分離黃酮、酚、醌類、有機酸及鞣質(zhì)，可使性質(zhì)極相近的化合物得到分離。原理：聚酰胺中的酰胺基可與酚羥基、羧基、羰基、硝基等形成氫鍵吸附。聚酰胺的吸附容量大。*氧化鋁被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：1）可形成氫鍵的基團數(shù)目越多，則吸附能力越強，越難被洗脫。2）形成分子內(nèi)氫鍵的吸附能力會減弱。3）分子中芳香化程度越高，吸附能力越強。4）對聚酰胺柱的洗脫能力，與溶劑的種類有關(guān)：甲酰胺，丙酮，甲、乙醇，水依次減弱。被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：（2）溶劑對于極性吸附劑，溶劑極性越大，洗脫能力越強。對于非極性吸附劑，則相反。（3）被分離物質(zhì)對于極性吸附劑，被分離物質(zhì)的極性越強，吸附力越大，越難洗脫。（2）溶劑（4）操作方式（1）薄層色譜：制板點樣展開顯色（2）柱色譜：裝柱上樣洗脫收集濃縮檢識合并結(jié)晶（4）操作方式（二）分配色譜1、基本原理利用物質(zhì)在固定相和流動相之間分配系數(shù)不同而達到分離。2、分類正相色譜：固定相極性>流動相極性，用于分離極性和中等極性的成分。反相色譜：固定相極性<流動相極性，用于分離非極性和中等極性的成分（二）分配色譜3、洗脫規(guī)律：正相色譜中，極性小的化合物先被洗脫，極性大的化合物后被洗脫；反相色譜正好相反。4、常用的固定相和流動相固定相：正相色譜中常用氰基或氨基鍵合相；反相色譜中常用C18或C8鍵合相。流動相：正相色譜中主要用有機溶劑；反相色譜中常用甲醇-水或乙腈-水系統(tǒng)。3、洗脫規(guī)律：（三）離子交換色譜法1、基本原理基于各成分解離度的不同而分離。

2、離子交換劑的種類離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠。3、應(yīng)用主要用于生物堿、有機酸及氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖等水溶性成分的分離純化。4、操作要點裝柱前要用水充分溶脹，并用酸、堿預(yù)處理。（三）離子交換色譜法（四）大孔吸附樹脂法1、性能及分離原理（1）性能：大孔樹脂是一種不含交換基團，具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑。一般為白色顆粒，20~60目。理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機溶劑。水溶液中吸附力較強，且有很好的選擇性。（2）原理既有吸附性，又有分子篩的篩選性。吸附性是范德華引力或氫鍵吸附的結(jié)果；篩選性則由其多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)引起的。（四）大孔吸附樹脂法2、影響分離的因素（1）分子極性的大小極性較大的化合物適宜于在中極性的樹脂上分離，而極性較小的化合物則適于在非極性樹脂上分離。對于中極性樹脂來說，被分離化合物分子上能形成氫鍵的基團越多，吸附力越強。（2）分子體積的影響對于非極性大孔吸附樹脂而言，化合物體積越大，吸附力越強，這與大體積分子疏水性強有關(guān)。2、影響分離的因素（3）PH一般酸性化合物在適當(dāng)酸性溶液中可被充分吸附，堿性化合物則在堿性條件下易被吸附，中性化合物在中性情況下吸附較好。3、樹脂柱的清冼和再生用乙醇、丙酮、異丙醇、2~5%鹽酸、2~5%氫氧化鈉滲漉法洗脫或回流。4、洗脫順序一般被分離物質(zhì)極性越小，越先被洗脫下來，極性越大，越后洗脫下來。（3）PH5、應(yīng)用（1）成分的類型與樹脂的選擇：（2）優(yōu)點：吸附容量大，選擇性好，成本低，收率較高，再生容易等優(yōu)點。5、應(yīng)用（2）優(yōu)點：吸附容量大，選擇性好，成本低，收率較高，（五）凝膠色譜法1、性能及分類葡聚糖凝膠是葡聚糖和甘油，通過醚橋鍵相交而成的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)。交鏈度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越大，可用于小分子量物質(zhì)的分離。反之，則用于大分子量物質(zhì)的分離。常用的有葡聚糖凝膠（SephadexG）、羥丙基葡聚糖凝膠（SephadexLH-20）、聚丙烯酰胺凝膠（Sephacrylose,商品名Bio-gelP）及瓊脂糖凝膠（Sepharose,商品名Bio-GelA）等。（五）凝膠色譜法2、分離原理葡聚糖凝膠吸水后，形成凝膠粒子，在交鏈鍵的骨架中存在著許多網(wǎng)眼，只能使小分子量的化合物進入，大分子量的化合物被排阻在凝膠顆粒的外部難以進入網(wǎng)眼內(nèi)部，因此大分子物質(zhì)首先被洗出。3、應(yīng)用主要用于分離水溶性大分子化合物。（六）高效液相色譜（七）氣相色譜2、分離原理中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)測定的一般程序和方法（一）純度測定外觀顏色形態(tài)是否均一；測定物理常數(shù)如：熔點、沸點、比旋度、折光率等；用薄層色譜或高效液相色譜鑒別；如為已知物，可用對照品進行對照。（二）化學(xué)方法顏色反應(yīng)；化學(xué)降解法；衍生物制備。中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)測定的一般程序和方法（一）純度測定（三）波譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用1、紅外光譜（IR)化合物用量只需5~10微克，測定范圍500~4000cm-1,有兩個區(qū)，一個是指紋區(qū)在1000cm-1以下，每個化合物有自己的特征指紋圖譜；另一個是特殊功能區(qū)，在1000~4000cm-1

，可以確定羰基、苯環(huán)、羥基等功能基。（三）波譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用2、紫外光譜（UV）只有在分子結(jié)構(gòu)中具有共軛體系，即在分子中具有產(chǎn)生π-π、n-π躍遷和某些n-σ躍遷的化合物才能在紫外光區(qū)產(chǎn)生紫外吸收光譜?？筛鶕?jù)紫外吸收光譜的位置及吸收峰的數(shù)目，可初步推測化合物的不飽和部分結(jié)構(gòu)。2、紫外光譜（UV）3、核磁共振(NMR)(1)1H-NMR:提供不同種類氫原子的情況。給出氫的數(shù)目、種類、相鄰基團的結(jié)構(gòu)。可提供的結(jié)構(gòu)信息參數(shù)，主要為化學(xué)位移(δ),偶合常數(shù)(J)及質(zhì)子數(shù)?；瘜W(xué)位移(δ)：因氫核周圍化學(xué)環(huán)境不同，其外圍電子云密度及繞核旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的磁屏蔽效應(yīng)不同，則不同的氫出現(xiàn)在不同區(qū)域。3、核磁共振(NMR)偶和常數(shù)(J)：磁不等同的兩個或兩組氫核，在一定距離內(nèi)因相互自旋偶合產(chǎn)生裂分，裂分峰間的距離為J。（2）13C-NMR:提供碳原子的情況?？商峁┑慕Y(jié)構(gòu)信息參數(shù)，主要為化學(xué)位移、異核偶合常數(shù)(JCH)及弛豫時間。測定技術(shù)也有各種去偶方法，最常用的是質(zhì)子寬帶去偶，13C信號在圖譜上為單峰。偶和常數(shù)(J)：磁不等同的兩個或兩4、質(zhì)譜(MS)測定有機分子的分子量。正確判斷離子峰，提供分子量。分析碎片離子，推斷結(jié)構(gòu)信息。常用的有：電子轟擊質(zhì)譜（提供分子離子峰和碎片離子峰）；場解析質(zhì)譜（可得到明顯的分子離子峰）等。4、質(zhì)譜(MS)糖類化合物一、概述糖（saccharides）是多羥基醛或酮及其衍生物、聚合物的總稱。通式為Cx(H2O)y，所有生物均含糖及其衍生物。二、結(jié)構(gòu)和分類按能否水解和分子量大小分為：單糖(monosaccharides)：不能再被水解，最小單位。低聚糖(oligosaccharides)：2~9個單糖聚合而成。多糖(polysaccharides)：10個以上單糖聚合而成。植物多糖、菌類多糖、動物多糖。糖類化合物一、概述1、植物多糖：（1）纖維素：直鏈葡聚糖。（2）淀粉：直鏈的糖淀粉：1α4連接的D-葡萄吡喃糖，聚合度300-350，可溶于熱水成透明溶液。支鏈的膠淀粉：1α4連接的D-葡萄吡喃糖，但有1α6的分支鏈，平均支鏈長25個單位，不溶于冷水，溶于熱水成粘膠狀。糖淀粉遇碘顯蘭色，膠淀粉顯紫色。淀粉在制劑中作賦形劑，工業(yè)上作生產(chǎn)葡萄糖的原料。（3）植物樹膠及粘液質(zhì)1、植物多糖：2、菌類多糖豬苓多糖、茯苓多糖、靈芝多糖——抗腫瘤3、動物多糖（1）肝素：含有硫酸酯的粘多糖，為天然抗凝血物質(zhì)，預(yù)防血栓。（2）甲殼素：是螃蟹、蝦等動物外殼的主要成分，可作藥物的載體，具有緩釋優(yōu)點，也可用于人造皮膚、血管、手術(shù)縫合線等。（3）透明質(zhì)酸：為天然保濕因子，用于化妝品。（4）硫酸軟骨素：硫酸軟骨素A能增強脂肪酶活性、抗凝、抗血栓形成。2、菌類多糖三、多糖的主要理化性質(zhì)1、性狀：非晶形，無甜味，難溶于冷水，可溶于熱水成膠體溶液，不溶于乙醇等有機溶劑。無還原性。2、主要化學(xué)反應(yīng)（1）molish（2）水解反應(yīng)1）乙酰解：多糖經(jīng)過乙酰解可以生成乙?；膯翁呛鸵阴；墓烟?。從而推斷多糖的結(jié)構(gòu)。方法：將多糖或乙?；嗵侨芙庥诖佐虼佐c冰醋酸的混合溶液里，并加入濃硫酸少許，于室溫放置1-10天，然后置冰水中，加碳酸氫鈉中和至PH3-4，氯仿提單糖和寡糖，柱色譜分離。三、多糖的主要理化性質(zhì)2）過碘酸及其鹽的氧化作用于1，2-鄰二醇或1，2，3-鄰三醇。通過反應(yīng)后測定過碘酸鹽的消耗，甲酸的生成和剩余糖的比例，可確定多糖中各種單糖的鍵型及其比例。3）Smith降解4）堿降解5）酶解6）酸水解2）過碘酸及其鹽的氧化四、多糖的提取分離

（一）提取多糖為大分子極性化合物，多數(shù)采用不同溫度的水提取，也可用稀醇、稀堿、稀鹽等，避免用酸提取?？稍谔崛∫褐屑右掖?、甲醇、丙酮，使多糖沉淀進行初步純化，得粗多糖。粗多糖除雜：蛋白質(zhì)、色素。1、除蛋白：1%鞣質(zhì)、酶解或用正丁醇：氯仿（4：1）處理使蛋白質(zhì)變性沉淀出來。2、除色素：活性炭或氧化脫色四、多糖的提取分離

（一）提?。ǘ┓蛛x純化1、分級沉淀法：不同濃度的低級醇梯度加入，使含醇量達到15%，30%，40%，50%，60%，使不同分子量的多糖分步沉淀。也可改變pH值、溫度或加入無機鹽。主要是除去非糖物質(zhì)。2、色譜法：葡聚糖凝膠色譜、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠。3、超速離心法：沉積速率不同。（二）分離純化中藥化學(xué)成分的研究的一般方法石河子大學(xué)藥學(xué)院中藥一班宋宗強

2017.03.05中藥化學(xué)成分的研究的一般方法石河子大學(xué)中藥化學(xué)成分研究概況及發(fā)展趨勢歷史中國：公元12世紀，使用大麥發(fā)芽制造飴糖；明代李時珍《本草綱目》中記述五倍子“看藥上長起長霜，藥則已成”，長霜即為沒食子酸結(jié)晶，另外還記述了升華法制備純化樟腦的過程。古代我國處于世界領(lǐng)先地位。近代至新中國成立之前，我國中醫(yī)藥發(fā)展幾乎停滯，直到20世紀70年代以后才有較大發(fā)展。中藥化學(xué)成分研究概況及發(fā)展趨勢日本：近幾十年發(fā)展迅速，對眾多常用中藥的化學(xué)成分進行了較深入的研究，取得了一大批領(lǐng)先成果。如人參、黃芪、葛根、芍藥、柴胡等。中藥化學(xué)研究概況：建國以來我國從中藥或天然藥物中研制開發(fā)的新藥有40余種，例如青蒿素、川芎嗪、靛玉紅等。我國作過比較深入的化學(xué)成分或藥學(xué)研究的中藥有200余種日本：

有200余種有效成分被制成500余種制劑已用于臨床。分離出的有效成分種類以生物堿、二萜、三萜、黃酮類居多。

20年代，我國開始研究麻黃堿（左旋麻黃堿），使麻黃堿成為世界性常用藥物。麻黃堿具有興奮中樞、收縮血管、增強汗腺、唾液腺分泌、緩解平滑肌痙攣等作用，是麻黃平喘的主要成分。

30年代發(fā)現(xiàn)了延胡索乙素（消旋四氫巴馬丁）、漢防己甲素（粉防己堿）、漢防己乙素（防己諾林堿），均有鎮(zhèn)痛作用。

40年代陸續(xù)生產(chǎn)了麻黃堿、蘆丁、洋地黃毒苷、咖啡因、小檗堿、山道年、狄戈辛、西地蘭、阿托品、長春新堿等。有200余種有效成分被制成500余種制70年代以后羥基喜樹堿—抗癌高三尖杉酯堿—抗白血病天花粉蛋白—引產(chǎn)青蒿素、蒿甲醚、雙氫青蒿素—抗瘧70年代以后中藥化學(xué)研究的發(fā)展趨勢更注重以活性為指標追蹤有效成分的分離，我國尤為重視建立符合中醫(yī)藥理論的活性指標，更能體現(xiàn)中醫(yī)藥特色。更注重多學(xué)科的密切配合（如藥理學(xué)、藥代動力學(xué)、分子生物學(xué)等），吸收新技術(shù)、新方法并結(jié)合中醫(yī)藥理論和傳統(tǒng)經(jīng)驗。中藥化學(xué)研究的發(fā)展趨勢更注重以活性為指標追蹤有效成分的分目前，對中藥復(fù)方有效成分的研究方法有兩種，一是將化學(xué)成分分離和藥理活性測試分階段交替進行。另一是以簡單、靈敏、可靠的活性測試方法為向?qū)?，緊密結(jié)合已建立的能夠確切反映復(fù)方療效的動物模型，對分離的每一個部位進行活性定量評估，追蹤活性部位，從而分離鑒定出活性成分。目前，對中藥復(fù)方有效成分的研究方法有兩中藥化學(xué)成分的研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型：（一）從物質(zhì)基本類型分：有機物、無機物。（二）按元素組成、結(jié)構(gòu)母核分：生物堿、黃酮、苷、醌、甾、萜、苯丙素等。（三）按酸堿性分：酸性、堿性、中性。（四）按溶解性分：非極性（親脂性）、中極性、極性（親水性）中藥化學(xué)成分的研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型：（五）按活性分：有效成分、無效成分有效成分：具有生物活性，能用分子式和結(jié)構(gòu)式表示，并具有一定的物理常數(shù)的單體化合物。無效成分：與有效成分共存的無生物活性的成分稱為無效成分。（六）按生合成途徑分：一級代謝產(chǎn)物（如糖、蛋白質(zhì)，脂肪）、二級代謝產(chǎn)物（如生物堿、黃酮、皂苷）。（五）按活性分：有效成分、無效成分中藥化學(xué)成分提取分離方法的基本

原理及應(yīng)用一、基本概念1、提?。豪眠m當(dāng)?shù)娜軇┗蚍椒?，將所要成分盡可能從原料中完全提出的過程。2、分離：將提取物中所含的各種成分一一分開，并將得到的單體加以精制的過程。中藥化學(xué)成分提取分離方法的基本

原理及應(yīng)用一、基本概念二、提取方法

水溶劑提取法：溶劑親水性有機溶親脂性有機溶水蒸氣蒸餾法超臨界流體萃取法（SFE）升華法壓榨法二、提取方法（一）溶劑提取法1、原理根據(jù)中藥中各種成分的溶解性不同，選用對所需成分溶解度大而對其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從藥材組織中溶解出來的一種提取方法。選擇溶劑依據(jù)相似相溶原理。（一）溶劑提取法2、選擇溶劑的要點

對所要成分溶解度大沸點適中容易回收低毒安全中藥化學(xué)成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因存在狀態(tài)不同溶解性不同（有點相似相容的感覺）。最常用的溶劑為乙醇。2、選擇溶劑的要點3、溶劑的分類

強極性溶劑：水親水性有機溶劑：能與水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）親脂性有機溶劑：不與水任意混溶，可分層（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚）常用溶劑的極性大小順序：石油醚<四氯化碳<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇（甲醇）<水3、溶劑的分類

強極性溶劑：水

4、化合物的結(jié)構(gòu)與親水性、親脂性的關(guān)系

（1）分子結(jié)構(gòu)中親水性基團（羧基、羥基、氨基）越多，極性越大，親水性越強，反之則親脂性越強。（2）分子中非極性部分越大，碳鏈越長或結(jié)構(gòu)越大，則親脂性越強。（3）結(jié)構(gòu)母核相同的成分，分子中功能基的極性越大，或極性功能基數(shù)量越多，則整個分子的極性越大，親水性越強，親脂性越弱。看對稱性來判斷極性

4、化合物的結(jié)構(gòu)與親水性、親脂性的關(guān)系

（1）分子結(jié)構(gòu)中親5、溶劑的選擇

(1)水：為價廉、易得、使用安全的強極性溶劑。適于提取無機鹽、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機酸鹽、生物堿鹽、苷類等。清水的

(2)親水性有機溶劑：以乙醇最常用。高濃度提取親脂性成分，低濃度提取親水性成分。(3)親脂性有機溶劑：具有較強的選擇性，對揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹脂、內(nèi)酯、某些生物堿及一些苷元均可提取出來。優(yōu)缺點：沸點低，濃縮回收方便，但易燃、有毒、價貴，穿透力差。5、溶劑的選擇

(1)水：為價廉、易得、使用安全的強極（二）水蒸氣蒸餾法適于具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的有效成分的提取。揮發(fā)油、小分子生物堿、酚類、游離醌類等。（三）超臨界流體萃取法最常用的是二氧化碳超臨界萃取法，環(huán)保、成本低、提取分離一步完成。分子的極性、沸點和分子量的大小與其在二氧化碳超臨界流體中的溶解性密切相關(guān)。（四）升華法（五）壓榨法（二）水蒸氣蒸餾法三、分離精制方法（一）溶劑法（二）沉淀法（三）分餾法（四）膜分離法（五）結(jié)晶法（六）色譜分離法三、分離精制方法（一）溶劑法（一）溶劑法

1、酸堿溶劑法（1）酸溶：有機堿性成分可與無機酸成鹽而溶于水。（2）堿溶：具有羧基，用碳酸氫鈉；具有酚羥基，用氫氧化鈉；具有內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的成分可被皂化而溶于水。

酸沉堿提法堿沉酸分法（一）溶劑法

1、酸堿溶劑法堿沉酸分法2、溶劑分配法原理：利用混合物中各成分在互不相溶的兩相溶劑中分配系數(shù)不同而達到分離的方法。各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。一般采用全量多次分配提高萃取效率。需要注意的是防止乳化。溶劑的選擇：對于分離極性較大的成分，用正丁醇-水；分離中等極性成分，用乙酸乙酯-水；分離低極性成分，用氯仿（或乙醚、石油醚等）-水。所用裝置：分液漏斗、連續(xù)液-液萃取裝置、液滴逆流層析裝置。2、溶劑分配法（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：常用來粗分，是將總提物分散于水中，依次用石油醚（或環(huán)己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓回收溶劑得到相應(yīng)極性的成分。（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：中藥化學(xué)成分的研究的一般方法課件（2）逆流連續(xù)萃取法

利用兩相溶劑比重不同可自然分層和分散液滴穿過連續(xù)相溶劑時發(fā)生傳質(zhì)的原理，用一根或數(shù)根萃取管制成逆流連續(xù)萃取裝置。管內(nèi)的瓷環(huán)，增加液滴上升的路程和在連續(xù)相中停留的時間，更重要的是上升的液滴因撞擊填充物而被分散，擴大了兩相溶劑萃取的接觸面積，使更萃取完全。優(yōu)點：克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻煩。（2）逆流連續(xù)萃取法

利用兩相溶劑比重不同可自然分層和分散（3）逆流分布法（CCD）對性質(zhì)相似的異構(gòu)體或同系物分離效果好?；驹砣允抢没旌衔镏谐煞衷趦煞N不相混溶的溶劑中分配系數(shù)的不同，經(jīng)過在兩相溶劑中多次轉(zhuǎn)移，而使它們達到分離的目的。（4）液滴逆流層析法（DCCC）是在逆流分布法基礎(chǔ)上發(fā)展的高分離效能的逆流分布法，分離管有100~1000根，互相串聯(lián)，上行法時，分離管內(nèi)充滿重相作為固定液相，利用泵將輕相（移動相）帶著樣品液進入分離管，形成液滴通過分離管，流出的移動相通過檢測，分部收集。（3）逆流分布法（CCD）溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：兩相溶劑不相混溶，混合物中各單一成分在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)差別越大越好。分離酸堿兩性化合物時，緩沖液是很好的溶劑。操作注意：（1）先將兩相溶劑相互充分飽和。（2）采用等體積兩相溶劑的方式。（3）欲分離混合物的濃度不宜過高。溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：（二）沉淀法

1、酸堿沉淀法：例如：生物堿、黃酮、蒽醌

2、專屬試劑沉淀法：例如：雷氏銨鹽沉淀季銨堿、膽甾醇沉淀甾體皂苷；明膠沉淀鞣質(zhì)。3、分級沉淀法：改變加入溶劑的極性或數(shù)量使沉淀逐步析出的方法。例如：多糖、蛋白質(zhì)的水溶液，分次加乙醇，使含醇量逐步提高，則可得到分子量由大到小的多糖、蛋白質(zhì)；皂苷的乙醇液，分次加入乙醚或乙醚-丙酮，可按極性從小到大逐步沉淀。（二）沉淀法

1、酸堿沉淀法：4、鉛鹽沉淀法中性醋酸鉛：與酸性或酚性物質(zhì)沉淀堿性醋酸鉛：除以上物質(zhì)外，還可沉淀具有醇羥基、酮基、醛基結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。脫鉛：通入硫化氫法；中性硫酸鹽法；陽離子交換法。5、鹽析法在混合物的水溶液中，加入無機鹽（常用的是NaCL，其它還有Na2S、MgSO4、NH4SO4）至一定濃度或達到飽和，使某些成分沉淀析出或用有機溶劑萃取出而達到分離的目的。4、鉛鹽沉淀法（三）分餾法利用混合組分中各成分的沸點不同而分離的一種方法。用于液體混合物的分離。（四）膜分離法利用天然或人工合成的高分子膜，以外加壓力或化學(xué)位差為推動力，對混合物溶液進行分離、分級、提純和富集的方法。反滲透、超濾、微濾、電滲析及傳統(tǒng)的透析法均為膜分離技術(shù)。原理是大分子不能透過膜而被截留，小分子能透過膜，使分子大小不同的物質(zhì)得到分離。關(guān)鍵是選擇適宜的膜。（三）分餾法（五）結(jié)晶法

1、結(jié)晶的條件（1）溶劑：選擇合適的溶劑對結(jié)晶的形成是關(guān)鍵。合適的溶劑應(yīng)對欲分離的成分熱時溶解度大，冷時溶解度小，而對雜質(zhì)則冷熱溶解度一致；沸點要適中；不與被分離成分產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。選擇溶劑依據(jù)“相似相溶”原理。（五）結(jié)晶法

1、結(jié)晶的條件（2）溫度通常在加溫的情況下，溶解過濾，除雜，濃縮，放冷。最合適的結(jié)晶溫度5~10度。（3）時間一般3~5天或更長時間。（4）濃度一般是多一些溶劑，放置使其慢慢揮發(fā)到合適的濃度。（5）雜質(zhì)（6）有效成分的含量越高，越易結(jié)晶。（2）溫度2、結(jié)晶溶劑的選擇對所需成分的溶解度隨溫度不同而有顯著差別，同時不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；查閱相關(guān)文件，參考“相似相溶”規(guī)律；選擇混合溶劑，低沸點溶劑對物質(zhì)溶解度大，高沸點溶劑對物質(zhì)的溶解度??；常用溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等。2、結(jié)晶溶劑的選擇（六）色譜分離法1、吸附色譜利用同一吸附劑對混合物中各種成分吸附能力的差異，而使各成分達到分離目的的色譜方法。吸附能力的強弱是由吸附劑和被吸附物質(zhì)的性質(zhì)決定的。吸附色譜法的分離效果，完全由吸附劑，溶劑和被分離物質(zhì)的性質(zhì)決定。（六）色譜分離法（1）常用吸附劑：硅膠：多孔，微酸性，其吸附能力稍弱于氧化鋁。吸附作用是由于顆粒表面有很多硅醇基，它可以和許多化合物形成氫鍵而具有一定的吸附作用，所以硅膠吸附作用的強弱與硅醇基的含量有關(guān)。硅醇基還易吸附水分，吸附的水分越多，吸附其他化合物的能力越弱。吸水量超過12%就不能做為吸附劑了。（1）常用吸附劑：當(dāng)加熱到了100-110℃時即可除去絕大多數(shù)硅醇基吸附的水分，恢復(fù)吸附活力，這一過程稱為活化。當(dāng)溫度上升到500℃時，硅膠表面的硅醇基則脫水縮合轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩醐h(huán)結(jié)構(gòu)，從而喪失吸附活性。硅膠適于分離的化合物范圍很廣泛，但不宜分離堿性化合物。當(dāng)加熱到了100-110℃時即可除去絕大多數(shù)硅醇基吸附的水分*氧化鋁由氫氧化鋁直接在高溫下脫水制得，帶微堿性，適于分離堿性成分。聚酰胺適于分離黃酮、酚、醌類、有機酸及鞣質(zhì)，可使性質(zhì)極相近的化合物得到分離。原理：聚酰胺中的酰胺基可與酚羥基、羧基、羰基、硝基等形成氫鍵吸附。聚酰胺的吸附容量大。*氧化鋁被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：1）可形成氫鍵的基團數(shù)目越多，則吸附能力越強，越難被洗脫。2）形成分子內(nèi)氫鍵的吸附能力會減弱。3）分子中芳香化程度越高，吸附能力越強。4）對聚酰胺柱的洗脫能力，與溶劑的種類有關(guān)：甲酰胺，丙酮，甲、乙醇，水依次減弱。被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：（2）溶劑對于極性吸附劑，溶劑極性越大，洗脫能力越強。對于非極性吸附劑，則相反。（3）被分離物質(zhì)對于極性吸附劑，被分離物質(zhì)的極性越強，吸附力越大，越難洗脫。（2）溶劑（4）操作方式（1）薄層色譜：制板點樣展開顯色（2）柱色譜：裝柱上樣洗脫收集濃縮檢識合并結(jié)晶（4）操作方式（二）分配色譜1、基本原理利用物質(zhì)在固定相和流動相之間分配系數(shù)不同而達到分離。2、分類正相色譜：固定相極性>流動相極性，用于分離極性和中等極性的成分。反相色譜：固定相極性<流動相極性，用于分離非極性和中等極性的成分（二）分配色譜3、洗脫規(guī)律：正相色譜中，極性小的化合物先被洗脫，極性大的化合物后被洗脫；反相色譜正好相反。4、常用的固定相和流動相固定相：正相色譜中常用氰基或氨基鍵合相；反相色譜中常用C18或C8鍵合相。流動相：正相色譜中主要用有機溶劑；反相色譜中常用甲醇-水或乙腈-水系統(tǒng)。3、洗脫規(guī)律：（三）離子交換色譜法1、基本原理基于各成分解離度的不同而分離。

2、離子交換劑的種類離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠。3、應(yīng)用主要用于生物堿、有機酸及氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖等水溶性成分的分離純化。4、操作要點裝柱前要用水充分溶脹，并用酸、堿預(yù)處理。（三）離子交換色譜法（四）大孔吸附樹脂法1、性能及分離原理（1）性能：大孔樹脂是一種不含交換基團，具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑。一般為白色顆粒，20~60目。理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機溶劑。水溶液中吸附力較強，且有很好的選擇性。（2）原理既有吸附性，又有分子篩的篩選性。吸附性是范德華引力或氫鍵吸附的結(jié)果；篩選性則由其多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)引起的。（四）大孔吸附樹脂法2、影響分離的因素（1）分子極性的大小極性較大的化合物適宜于在中極性的樹脂上分離，而極性較小的化合物則適于在非極性樹脂上分離。對于中極性樹脂來說，被分離化合物分子上能形成氫鍵的基團越多，吸附力越強。（2）分子體積的影響對于非極性大孔吸附樹脂而言，化合物體積越大，吸附力越強，這與大體積分子疏水性強有關(guān)。2、影響分離的因素（3）PH一般酸性化合物在適當(dāng)酸性溶液中可被充分吸附，堿性化合物則在堿性條件下易被吸附，中性化合物在中性情況下吸附較好。3、樹脂柱的清冼和再生用乙醇、丙酮、異丙醇、2~5%鹽酸、2~5%氫氧化鈉滲漉法洗脫或回流。4、洗脫順序一般被分離物質(zhì)極性越小，越先被洗脫下來，極性越大，越后洗脫下來。（3）PH5、應(yīng)用（1）成分的類型與樹脂的選擇：（2）優(yōu)點：吸附容量大，選擇性好，成本低，收率較高，再生容易等優(yōu)點。5、應(yīng)用（2）優(yōu)點：吸附容量大，選擇性好，成本低，收率較高，（五）凝膠色譜法1、性能及分類葡聚糖凝膠是葡聚糖和甘油，通過醚橋鍵相交而成的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)。交鏈度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越大，可用于小分子量物質(zhì)的分離。反之，則用于大分子量物質(zhì)的分離。常用的有葡聚糖凝膠（SephadexG）、羥丙基葡聚糖凝膠（SephadexLH-20）、聚丙烯酰胺凝膠（Sephacrylose,商品名Bio-gelP）及瓊脂糖凝膠（Sepharose,商品名Bio-GelA）等。（五）凝膠色譜法2、分離原理葡聚糖凝膠吸水后，形成凝膠粒子，在交鏈鍵的骨架中存在著許多網(wǎng)眼，只能使小分子量的化合物進入，大分子量的化合物被排阻在凝膠顆粒的外部難以進入網(wǎng)眼內(nèi)部，因此大分子物質(zhì)首先被洗出。3、應(yīng)用主要用于分離水溶性大分子化合物。（六）高效液相色譜（七）氣相色譜2、分離原理中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)測定的一般程序和方法（一）純度測定外觀顏色形態(tài)是否均一；測定物理常數(shù)如：熔點、沸點、比旋度、折光率等；用薄層色譜或高效液相色譜鑒別；如為已知物，可用對照品進行對照。（二）化學(xué)方法顏色反應(yīng)；化學(xué)降解法；衍生物制備。中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)測定的一般程序和方法（一）純度測定（三）波譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用1、紅外光譜（IR)化合物用量只需5~10微克，測定范圍500~4000cm-1,有兩個區(qū)，一個是指紋區(qū)在1000cm-1以下，每個化合物有自己的特征指紋圖譜；另一個是特殊功能區(qū)，在1000~4000cm-1

，可以確定羰基、苯環(huán)、羥基等功能基。（三）波譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用2、