實(shí)驗(yàn)十葉綠素a和b含量的測定

實(shí)驗(yàn)十葉綠素a和b含量的測定（分光光度法）、目的學(xué)會(huì)Chia、b含量的測定方法，了解葉片中Chia、b的含量。二、原理根據(jù)朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值與其中溶質(zhì)濃度C以及光徑L成正比，即A二aCL（a為該物質(zhì)的吸光系數(shù)）。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光值可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下的吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。4()060()711)0nm4()060()711)0nm吸收光能的百分比葉綠體中葉綠索TKj吸收:光譜圖乙醇溶液中葉綠素a、b在長波光方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同時(shí)在該波長時(shí)葉綠素a、b的比吸收系數(shù)K（溶液厚度是1cm,溶液濃度為1g/L的吸光度）為已知，我們即可以根據(jù)LambertBeer定律，它們的濃度C與吸光度A之間有如下的關(guān)系：幾65幾65=833Ca+侶創(chuàng)Cb.(1)A49=24.54Ca+44.24Cb.(2)(1)(2)式中的金5、A49為葉綠素溶液在波長665nm和649nm時(shí)的光密度。G、Cb為葉綠素a、b的濃度、單位為每升克數(shù)83.31、18.60為葉綠素a、b在、在波長665nm時(shí)的比吸收系數(shù)。24.54、44.24為葉綠素a、b在、在波長649nm時(shí)的比吸收系數(shù)。解方程式(1)(2)，則得：TOC\o"1-5"\h\zCA=13.7A665-5.76A649(3)CB=25.8A649-7.6A665(4)G=CA+CB=6.10A665+20.04A649(5)此時(shí)，G為總?cè)~綠素濃度，G、CB為葉綠素a、b濃度，單位為每升毫克，利用上面(3)(4)(5)式，即可以計(jì)算葉綠素a、b及總?cè)~綠素的總含量。三、材料用具及儀器藥品菠菜葉片、分光光度計(jì)、天平、研缽、剪刀、容量瓶(25ml)、漏斗、濾紙、乙醇(95%四、方法步驟1.稱取0.2克新鮮去葉脈葉片，剪碎，放在研缽中，加少許CaCO3加入乙醇10ml共研磨成勻漿，再加5ml乙醇，過濾，最后將濾液用乙醇定容到25ml。2.取一光徑為1cm的比色杯，注入上述的葉綠素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同樣規(guī)格的比色杯中，作為對(duì)照，在分光光度計(jì)下分別以665nm和649nm波長測出該色素液的光密度。計(jì)算結(jié)果:葉綠索□含■屋臣人FVi)X25X1'10000.2葉綠索b含呈注.FWD=C.X25X1"10000.2251

葉綠素總量EW>葉綠索□含■屋臣人FVi)X25X1'10000.2葉綠素總量EW>=g*