昆明地區(qū)新生兒化膿性腦膜炎分離菌分布及耐藥性分析

昆明地區(qū)新生兒化膿性腦膜炎別離菌分布及耐藥性分析〔〕:

摘要：目的討論新生兒化膿性腦膜炎血液及腦脊液病原菌的分布情況及其耐藥性分析，為臨床診治提供實(shí)驗(yàn)室根據(jù)。方法對540例診斷為新生兒化膿性腦膜炎患兒的血液和腦脊液進(jìn)展細(xì)菌培養(yǎng)，陽性標(biāo)本進(jìn)一步行藥敏試驗(yàn)和耐藥性分析，并搜集陽性標(biāo)本所對應(yīng)患兒的臨床資料和相關(guān)檢查結(jié)果做統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果在540例診斷為新生兒化膿性腦膜炎的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本中，共檢出75例陽性標(biāo)本，陽性檢出率為13.89%。其中，單純血培養(yǎng)陽性標(biāo)本共計(jì)37例，陽性率為6.85%；單純腦脊液培養(yǎng)陽性標(biāo)本20例，陽性率為3.70%；腦脊液培養(yǎng)和血培養(yǎng)均陽性標(biāo)本18例，陽性率為3.33%。陽性標(biāo)本所對應(yīng)的患兒臨床病癥，單純血培養(yǎng)陽性組以黃疸最為常見，而單純腦脊液培養(yǎng)陽性組和兩種培養(yǎng)均陽性組那么以發(fā)熱最為常見。陽性標(biāo)本腦脊液常規(guī)檢查和生化結(jié)果顯示，腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)和蛋白濃度在單純血細(xì)胞培養(yǎng)陽性組、單純腦脊液培養(yǎng)陽性組和兩種培養(yǎng)均為陽性組間存在差異，呈遞增趨勢，而葡萄糖含量呈遞減趨勢。陽性標(biāo)本病原菌分布結(jié)果顯示，單純血培養(yǎng)陽性組、單純腦脊液培養(yǎng)陽性組以及兩種培養(yǎng)均陽性組均以革蘭陰性菌檢出率最高，并且以大腸埃希菌為主；檢出的革蘭陽性菌中，血培養(yǎng)陽性組以表皮葡萄球菌為主，腦脊液培養(yǎng)陽性組以血漿凝固酶陰性的葡萄球菌為主，兩種培養(yǎng)均為陽性組那么以無乳鏈球菌為主。藥敏結(jié)果說明，大腸埃希菌對氨芐西林的耐藥率最高〔81.82%〕，并檢出超廣譜beta;-內(nèi)酰胺酶菌〔ESBLs〕2株，未出現(xiàn)對亞胺培南、美羅培南、厄他培南和阿米卡星耐藥的菌株；在檢出的革蘭陽性菌中，無乳鏈球菌對紅霉素和克林霉素均耐藥，未見青霉素、頭孢曲松和萬古霉素耐藥菌株。結(jié)論我院新生兒化膿性腦膜炎病原菌以革蘭陰性菌為主，且以大腸埃希菌最為常見，對多種抗生素具有耐藥性。

關(guān)鍵詞：新生兒；化膿性腦膜炎；病原菌；耐藥性

本文引用格式：王海平,黃海林,麻明彪,等.昆明地區(qū)新生兒化膿性腦膜炎別離菌分布及耐藥性分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2022,19(99):30-32,35.

PathogensandDrugResistanceAnalysisinNeonatalPurulentMeningitisofKunmingArea

WANGHai-ping,HUANGHai-lin,MAMing-biao,YUANMei,LIXiao-juan,QIHong-juan,SUMin,DUTing-yi*

(DepartmentofClinicalLaboratoryMedicine,TheChildren'sHospitalofKunmingMedicalUniversity,KunmingYunnan)

ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethebacteriadistributionanddrugresistanceanalysisinbloodandcerebrospinalfluid(CSF)ofneonatalpurulentmeningitis,andprovidelaboratoryevidenceforclinicaldiagnosisandtreatment.Meth-odsThebloodandcerebrospinalfluidof540childrendiagnosedwithneonatalpurulentmeningitiswerecultured,thedrugsusceptibilitytestanddrugresistanceanalysisofpositivespecimenswerefurthercarriedout,andtheclinicaldataandrelatedexaminationresultsofthechildrenwithpositivespecimenswerecollectedforstatisticalanalysis.ResultsIn540bacterialculturespecimensdiagnosedwithneonatalpurulentmeningitis,75positivespecimensweredetectedandthepositiveratewas13.89%.Amongthem,thenumberoftheonlypositivespecimensinbloodcultureamountedto37cases,thepositiveratewas6.85%,theonlypositivespecimensinCSFculturewas20cases,positiveratewas3.7%,and18casesinCSFcultureandbloodculturebothwerepositive,thepositiveratewas3.33%.Forclinicalsymptomsofchildrenwithpositivespecimens,thejaundicewasthemostmonintheonlypositivegroupofbloodculture,andfeverwasthemostmonintheonlypositivegroupofCSFcultureandthepositivegroupofbothcultures.TheroutineexaminationandbiochemicalresultsofCSFinpositivespecimensshowedthatthereweresignificantdifferencesinleukocytecount,proteinconcentrationandglucosecontentineachgroup.ThedistributionofpathogensinthepositivespecimenssuggestedthatGram-negativebacteriaweremostfrequentlyfoundintheonlypositivegroupofbloodculture,theonlypositivegroupofCSFcultureandthepositivegroupofbothcultures,andEscherichiacoliwasthemain.IntheGram-positivebacteriadetected,theonlypositivegroupofbloodculturewasmainlyepidermalstaphylococcus,andtheonlypositivegroupofCSFculturewasplasmacoagulase-negativestaphylococci,andthepositivegroupofbothcultureswasStreptococcusagalactiae.TheresultsofdrugsusceptibilityshowedthatEscherichiacolihadthehighestresistancetoampicillin(81.82%),andappearedtobesensitivetotheimipenem,meropenem,ceftriaxoneandvanycin.2strainsoftheultra-wide-spectrumbeta-caprolactam(ESBLs)weredetected.IntheGram-positivebacteriadetected,Streptococcusagalactiaewereresistanttoerythromycinandclindamycin,andsensitivetopenicillin,ceftriaxoneandvanycin.ConclusionInourhospital,gram-negativebacteriawasthemajorpathogensinneonatalpurulentmeningitis.Escherichiacoliwasthemostmonandresistanttoavarietyofantibiotics.

KEYWORDS:Newborn;Neonatalpurulentmeningitis;Pathogens;Drugresistance

0引言

新生兒化膿性腦膜炎是新生兒最常見的感染性疾病之一【1】，具有發(fā)病急，臨床病癥不典型，病情重，病死率高的特點(diǎn)。因新生兒免疫功能低下，且血腦屏障功能差，一旦發(fā)生重癥感染易發(fā)生化膿性腦膜炎，加之臨床表現(xiàn)不典型，更易造成漏診，導(dǎo)致延誤治療，使并發(fā)癥發(fā)生率增高，常留有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。足月新生兒的發(fā)病率為0.02%-0.10%，而早產(chǎn)兒的發(fā)病率更高，可以到達(dá)0.3%左右。該種疾病早期的體征和病癥并不明顯，引產(chǎn)早期診斷比擬困難，確診經(jīng)過治療后存活的新生兒也會(huì)有40%-50%出現(xiàn)不同的并發(fā)癥【1】，嚴(yán)重影響新生兒的安康成長。因此，早期診斷及治療是減少并發(fā)癥，防止發(fā)生嚴(yán)重后遺癥的關(guān)鍵。腦脊液〔Cerebrospinalfluid，CSF〕細(xì)菌培養(yǎng)仍然是顱內(nèi)細(xì)菌感染必不可少的實(shí)驗(yàn)診斷方法。本篇報(bào)道對2022年1月至2022年12月間新生兒科540例診斷為新生化膿性腦膜炎患兒的血液和CSF進(jìn)展細(xì)菌培養(yǎng)，對陽性標(biāo)本進(jìn)一步做藥敏試驗(yàn)，并搜集血培養(yǎng)和CSF培養(yǎng)陽性標(biāo)本所對應(yīng)的患兒臨床病癥、CSF常規(guī)和生化檢測結(jié)果進(jìn)展整理分析，旨在為新生化膿性腦膜炎的早期診斷提供新思路，并指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素治療。

1材料與方法

1.1患者信息采集

菌株所對應(yīng)的患者相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢查結(jié)果采集自實(shí)驗(yàn)室LIS系統(tǒng)，所對應(yīng)的患者診斷信息采集自醫(yī)院的病案管理系統(tǒng)。

1.2標(biāo)本來源

2022年1月至2022年12月間，昆明醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院新生兒科收治，診斷為新生兒化膿性腦膜炎的住院患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考?實(shí)用新生兒學(xué)?【1】，行腰椎穿刺術(shù)后，留取合格的CSF培養(yǎng)標(biāo)本，總計(jì)為540例。

1.3CSF

常規(guī)檢查：行腰椎穿刺術(shù)后，留取合格的CSF標(biāo)本1-3mL，采用SYSMEX-XE5000體液形式進(jìn)展腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)，用日立7100全自動(dòng)生化儀檢測腦脊液的蛋白質(zhì)和葡萄糖濃度。

1.4CSF培養(yǎng)、細(xì)菌鑒定及藥物敏感性檢測

1.4.1CSF病原菌的別離培養(yǎng)

在抗生素使用前，采集患兒CSF1-3mL，立即接種至BD-BACTECPedsplus/F培養(yǎng)瓶，置BACTECFX全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)。根據(jù)血和CSF培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)展分組，為單純血培養(yǎng)陽性組、單純CSF培養(yǎng)陽性組以及兩種培養(yǎng)均陽性組。陽性瓶轉(zhuǎn)接種至血瓊脂平板和巧克力色瓊脂平板進(jìn)展別離培養(yǎng)，5%CO2環(huán)境下35℃培養(yǎng)16-18h。

1.4.2細(xì)菌鑒定及藥敏檢測

觀察菌落及染色后，以法國生物梅里埃公司提供的VITEK2-pact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)對細(xì)菌進(jìn)展鑒定及藥敏試驗(yàn)，嚴(yán)格按照系統(tǒng)要求進(jìn)展操作，結(jié)果判讀遵循CLSI執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的更新文件。

1.4.3質(zhì)量控制

嚴(yán)格參照文獻(xiàn)執(zhí)行【2】，使用的質(zhì)控菌株包括大腸埃希菌〔ATCC25922〕、銅綠假單胞菌〔ATCC27853〕、金黃色葡萄球菌〔ATCC25923〕及肺炎鏈球菌〔ATCC49247〕。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)處理采用GraphpadPrism6.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗(yàn)采用Shapiro-Wilknormality檢驗(yàn)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以〔均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差〕表示，比擬采用One-wayANOVA檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布那么以〔中位數(shù)四分位間距〕表示，比擬采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)(秩和檢驗(yàn))，P

2.2常規(guī)檢查與生化結(jié)果

陽性標(biāo)本CSF常規(guī)檢查和生化結(jié)果顯示，數(shù)據(jù)分布除了血培養(yǎng)陽性組中的葡萄糖濃度呈正態(tài)分布外，其余數(shù)據(jù)均為非正態(tài)分布。CSF白細(xì)胞計(jì)數(shù)和蛋白濃度在單純血培養(yǎng)陽性組、單純CSF培養(yǎng)陽性組以及兩種培養(yǎng)均為陽性組之間存在明顯差異，呈遞增趨勢；CSF中葡萄糖的濃度在這三組中也存在差異，呈遞減趨勢，見表2。

2.3病原菌分布

在540例診斷為新生兒化膿性腦膜炎的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本中，共檢出75例陽性標(biāo)本，陽性檢出率為13.89%〔75/540〕。其中，單純血培養(yǎng)陽性標(biāo)本37例，陽性率為6.85%〔37/540〕；單純CSF培養(yǎng)陽性標(biāo)本20例，陽性率為3.70%〔20/540〕；CSF培養(yǎng)和血培養(yǎng)均陽性標(biāo)本18例，陽性率為3.33%〔18/540〕。在三組細(xì)菌培養(yǎng)陽性的標(biāo)本中，均以革蘭陰性菌檢出率最高，并且以大腸埃希菌為主；檢出的革蘭陽性菌中，單純血培養(yǎng)陽性組以表皮葡萄球菌為主，單純CSF培養(yǎng)陽性組以血漿凝固酶陰性的葡萄球菌〔coagulase-negativestaphylococci，CNS〕為主，兩種培養(yǎng)均為陽性組那么以無乳鏈球菌為主，見表3。

2.4藥敏結(jié)果

在檢出的革蘭陰性菌中，對22株大腸埃希菌中的18株進(jìn)展藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示大腸埃希菌對氨芐西林的耐藥率最高〔81.82%〕，其次為頭孢唑啉〔37.5%〕和頭孢曲松〔31.8%〕，而對亞胺培南、美羅培南、厄他培南和阿米卡星未出現(xiàn)耐藥菌株。此外，本組大腸埃希菌中，檢出超廣譜beta;-內(nèi)酰胺酶菌〔ESBLs〕2株。在檢出的革蘭陽性菌中，無乳鏈球菌對紅霉素和克林霉素均耐藥，未見青霉素、頭孢曲松和萬古霉素耐藥菌株。產(chǎn)單核李斯特菌對青霉素和復(fù)方新諾明敏感，見表4。

3討論

新生兒化膿性腦膜炎是新生兒受細(xì)菌感染后，病原菌先侵入血液，以后通過血液循環(huán)到達(dá)腦膜引起腦膜的炎癥，局部患兒可出現(xiàn)腦本質(zhì)性病變。該疾病是小兒、尤其是嬰幼兒時(shí)期常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病。新生兒化膿性腦膜炎由于其臨床表現(xiàn)特異性不強(qiáng)，且病癥與敗血癥相似，所以該病早期臨床診斷較為困難【3】。在此篇文章中我們對細(xì)菌培養(yǎng)陽性標(biāo)本所對應(yīng)的患兒臨床表現(xiàn)進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示發(fā)熱是該疾病的重要表現(xiàn)，占所有陽性標(biāo)本的46.7%，與徐業(yè)燕等【4】、華雪瑩等【5】研究報(bào)道一致。但值得一提的是，在單純血培養(yǎng)陽性的患兒中，其常見臨床病癥表現(xiàn)為黃疸，而并非以發(fā)熱，但是當(dāng)病原菌透過血腦屏障進(jìn)入CSF引起腦膜炎癥，患兒發(fā)熱率高達(dá)70%，局部患兒臨床病癥也可出現(xiàn)抽搐、腸道反響和咳嗽。

新生兒化膿性腦膜炎的發(fā)病機(jī)制是病原菌首先侵入血液，由于新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不夠成熟，免疫力較差而不能及時(shí)去除感染的病原菌。隨后病原菌通過血液循環(huán)到達(dá)血腦屏障，由于新生兒血腦屏障功能差，補(bǔ)體濃度低，且中性多形核粒細(xì)胞吞噬及趨化功能差，血液循環(huán)相對旺盛，所以病原菌極易通過血腦屏障進(jìn)入CSF而形成化腦，也有少數(shù)病例是由病原菌直接侵入腦膜引起。細(xì)菌進(jìn)入CSF后迅速繁殖并大量釋放多種炎性細(xì)胞因子，導(dǎo)致血腦屏障通透性增加，白細(xì)胞和蛋白質(zhì)大量進(jìn)入CSF，CSF中白細(xì)胞數(shù)量和蛋白質(zhì)含量由此而升高[6-7]。由于CSF中大量白細(xì)胞消耗葡萄糖，致病菌對葡萄糖的分解及細(xì)菌毒素致炎性代謝產(chǎn)物的增加，抑制了細(xì)胞膜的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)功能，使CSF中葡萄糖的含量隨之下降。我們對細(xì)菌培養(yǎng)陽性所對應(yīng)患兒的CSF進(jìn)展白細(xì)胞計(jì)數(shù)，并檢測其CSF中的蛋白質(zhì)濃度和葡萄糖含量，結(jié)果顯示CSF培養(yǎng)陽性患兒的CSF中白細(xì)胞和蛋白質(zhì)含量明顯高于單純的血培養(yǎng)陽性組，而CSF中的葡萄糖的濃度剛好相反，三種指標(biāo)變化趨勢符合疾病理論。

迄今為止，CSF細(xì)菌培養(yǎng)是診斷新生兒化膿性腦膜炎的金標(biāo)準(zhǔn)，也是指導(dǎo)臨床應(yīng)用抗生素進(jìn)展治療的重要實(shí)驗(yàn)室檢查。本研究對540例診斷為新生兒化膿性腦膜炎的患者進(jìn)展血和CSF細(xì)菌培養(yǎng)，共檢出75例陽性標(biāo)本，陽性檢出率為僅13.89%，其中，血培養(yǎng)檢出陽性55例，檢出率為73.33%；CSF培養(yǎng)檢出陽性38例，檢出率僅為50.67%，較血培養(yǎng)檢出率低。分析其原因可能是局部患兒入院以前就服用過抗生素，從而將病原菌控制在血行播散期，防止其透過血腦屏障浸入CSF。新生兒化膿性腦膜炎致病菌不同于其他年齡段的兒童，且在不同國家地區(qū)及不同年代會(huì)有所不同，歐美興隆國家多以B族鏈球菌、大腸埃希菌以及李斯特菌等常見，開展中國家以B族鏈球菌較為多見[8]。在亞洲，我國臺灣地區(qū)以及韓國均報(bào)道B族鏈球菌，大腸埃希菌為最常見新生兒化膿性腦膜炎致病菌[9]。不同地區(qū)患兒病原構(gòu)成也存在差異。在本研究檢出的75例陽性標(biāo)本中，無論是血培養(yǎng)，還是CSF培養(yǎng)，均以革蘭陰性菌最為常見，且病原菌以大腸埃希菌為主，結(jié)果與朱敏麗等[10]，與本地區(qū)黃海林[11]等人研究報(bào)道一致。大腸埃希菌是寄居在人體腸道以及生殖道的正常菌群，分娩過程(特別是自然分娩者)為新生兒暴露于該菌的高風(fēng)險(xiǎn)期，后期因新生兒腸道黏膜通透性大以及腸道免疫因子分泌缺乏等原因，使新生兒成為大腸埃希菌感染的高危人群。此外人體抗大腸埃希菌抗體屬于IgM，不能通過胎盤，新生兒對此菌缺乏先天的免疫才能，因此該菌成為新生兒化膿性腦膜炎的主要病原菌[12,13]。在檢出的革蘭陽性菌中，血培養(yǎng)常見為表皮葡萄球菌，而CSF培養(yǎng)那么為CNS和無乳鏈球菌，其中檢出的CNS經(jīng)分析考慮為污染菌可能。與本地區(qū)黃海林[11]等報(bào)道的兒童組革蘭陽性以肺炎鏈球菌為主存在差異。近年來研究顯示，無乳鏈球菌也是我國引起新生兒早發(fā)型及晚發(fā)型感染的主要革蘭陽性菌，是新生兒期重癥肺炎、敗血癥、腦膜炎的常見病原菌。無乳鏈球菌與圍生期感染親密相關(guān)，無乳鏈球菌寄居于母親泌尿道和胃腸道的黏膜處，產(chǎn)婦攜帶無乳鏈球菌比例達(dá)4%~40%[14]，產(chǎn)婦生殖道無乳鏈球菌定植、病原菌的因素以及新生兒的免疫程度等都與新生兒無乳鏈球菌感染相關(guān)[15]。

藥敏結(jié)果顯示，常見病原菌大腸埃希菌對氨芐西林、四環(huán)素和復(fù)方諾明耐藥率在50%以上，同時(shí)對哌拉西林、頭孢唑啉、頭孢曲松和環(huán)丙沙星有一定的耐藥率，未檢出對亞胺培南、美羅培南、厄他培南和阿米卡星耐藥的菌株；檢出的革蘭陽性菌中，無乳鏈球菌對紅霉素和克林霉素耐藥，且對左氧氟沙星和四環(huán)素也有一定的耐藥率。近年來，由于抗生素的不標(biāo)準(zhǔn)使用，致使耐藥菌株不斷擴(kuò)大，導(dǎo)致難治性化膿性腦膜炎也不斷增多。因此，為了降低細(xì)菌耐藥率，應(yīng)該長期堅(jiān)持嚴(yán)格掌握抗菌藥物的使用指證，并合理標(biāo)準(zhǔn)抗生素的應(yīng)用。

綜上所述，對疑診是新生兒化膿性腦膜炎的患兒，應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)，特別是出現(xiàn)發(fā)熱、黃疸、抽搐等臨床病癥應(yīng)及早抽血進(jìn)展血培養(yǎng)，或并行腰穿進(jìn)展CSF培養(yǎng)。根據(jù)血培養(yǎng)或CSF培養(yǎng)，并結(jié)合其藥敏結(jié)果，對患兒進(jìn)展早期診斷以及合理應(yīng)用抗生素進(jìn)展治療。

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