臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理共20張課件

1、臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理PP文檔演模板臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理PP文檔演模板第一節(jié)常用臨床生物化學(xué)分析技術(shù)一、光譜分析技術(shù)二、電泳技術(shù)三、離心技術(shù)(了解)四、層析技術(shù)五、電化學(xué)分析技術(shù)光譜分析技術(shù)NASA)吸收光譜分析法二)發(fā)射光譜分析法(三)散射光譜分析法臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管第一節(jié)常用臨床生物化學(xué)分析技術(shù)一、光譜分析技術(shù)二、電泳技術(shù)三、離心技術(shù)(了解)四、層析技術(shù)五、電化學(xué)分析技術(shù)第一節(jié)常用臨床生物化學(xué)分析技術(shù)光譜分析技術(shù)NASA)吸收光譜分析法二)發(fā)射光譜分析法(三)散射光

2、譜分析法光譜分析技術(shù)()吸收光譜分析法1.原理:利用物質(zhì)吸收光譜譜系特征,確定其性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或含量的技術(shù)2.方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn):(1)靈敏度高,檢測(cè)濃度在10510-2mol/l范圍。(2)操作簡(jiǎn)便、快速、選擇性好和應(yīng)用廣泛。(3)原子吸收分光光度法使用空心陰極燈作光源,譜線(xiàn)簡(jiǎn)單,由譜線(xiàn)重疊引起的干擾小(4)原子吸收分光光度法自動(dòng)化程度高,在復(fù)雜樣品分析中,可直接測(cè)定多種元素。缺點(diǎn):(1)比色法需有標(biāo)準(zhǔn)品,有些反應(yīng)的顯色劑本身顏色會(huì)影響測(cè)定方法的靈敏度和特異性。(2)紫外法的吸收池需用石英玻璃作光學(xué)面。(3)原子法需特定元素的空心陰極燈,對(duì)難熔元素測(cè)定的靈敏度不夠理想O CONTINUE()吸收光譜

3、分析法3類(lèi)型:可見(jiàn)光及紫外光、原子吸收分光光度法(參考方法)4臨床應(yīng)用(1)可見(jiàn)光及紫外光法多用于酶試劑終點(diǎn)法及化學(xué)法測(cè)定的項(xiàng)目(2)原子吸收分光光度法中用于Ca2+、Mg2+定值或參考方法3類(lèi)型:可見(jiàn)光及紫外光、原子吸收分光光度法(參考方法)(二)發(fā)射光譜分析法1.原理:利用物質(zhì)發(fā)射光譜特征,來(lái)確定其性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或含量的技術(shù)。2類(lèi)型:熒光分析法:靈敏度高,檢測(cè)范圍廣,臨床常用火焰光度法:操作煩瑣,干擾因素多,已淘汰3影響熒光強(qiáng)度的因素:(1)溶劑。與熒光強(qiáng)度成反比。(2)熒光物質(zhì)的濃度。F=I,工是激發(fā)光強(qiáng)度。濃度很小且厚度不變時(shí)成正比。反之,則反比。(3)溫度。多數(shù)情況下,與熒光強(qiáng)度成反比。

4、(4)溶液pH。不定4方法學(xué)評(píng)價(jià):靈敏度高、選擇性好、取樣量少,但干擾因素較多5臨床應(yīng)用:糖類(lèi)、胺類(lèi)、DNA與RNA酶與輔酶,vt類(lèi)及Ca2+、Fe3十、Zn2+等(二)發(fā)射光譜分析法(三)散射光譜分析法(比濁法)1.原理:利用光線(xiàn)通過(guò)混懸顆粒后產(chǎn)生的散射光譜特征,確定其性質(zhì)2類(lèi)型:散射比濁法:根據(jù)光線(xiàn)通過(guò)混懸液后,光線(xiàn)減弱的程度來(lái)測(cè)定其濃度。不需特殊儀器。透射比濁法:速率和終點(diǎn)法。通過(guò)光線(xiàn)透過(guò)的強(qiáng)度來(lái)確定顆粒的濃度。需特殊儀器如激光比濁儀3影響比濁法測(cè)定的因素:1)混懸顆粒大小;(2)顆粒形狀;(3)混懸液的穩(wěn)定性。因此,使用比濁法必須做到:(1)溶液中顆粒的分散度盡可能相同;(2)混濁液至

5、少10min內(nèi)保持穩(wěn)定。4臨床應(yīng)用:免疫球蛋白、載脂蛋白、補(bǔ)體、ASo、RF等。(三)散射光譜分析法(比濁法)二、電泳技術(shù)()原理:利用帶電粒子在電場(chǎng)中向所帶電荷相反的電極移動(dòng)的性能,對(duì)物質(zhì)分子進(jìn)行分析測(cè)定。(二)電泳技術(shù)的分類(lèi)與特點(diǎn)1移動(dòng)界面電泳( moving boundary electrophoresis):已淘汰2區(qū)帶電泳( zone electrophoresis):一類(lèi)是濾紙、醋酸纖維素膜、硅膠等;一類(lèi)是淀粉、瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠等。其中后者的優(yōu)點(diǎn)是:(1)使用細(xì)微多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支持介質(zhì),可消除電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)使分辨率提高;(2)幾乎不吸附蛋白質(zhì),電泳無(wú)拖尾現(xiàn)象;(3)蛋白質(zhì)

6、在低濃度瓊脂糖膠電泳時(shí)可自由穿透,阻力小,透明度高,敏感性高。因此,取代第類(lèi)電泳。CONTINUE二、電泳技術(shù)三)方法學(xué)評(píng)價(jià)設(shè)備簡(jiǎn)單,操作方便,具較高的分辨率及選擇性,不足之處是干擾因素較多。(四)電泳技術(shù)的影響因素顆粒性質(zhì),電場(chǎng)強(qiáng)度,溶液性質(zhì),pH值,離子強(qiáng)度,溶液粘度,電滲和支持物等。(五)區(qū)帶電泳的臨應(yīng)用測(cè)定項(xiàng)目有:血清蛋白、血紅蛋白、糖化血紅蛋白、腦脊液和尿液蛋白、脂蛋白及脂蛋白(a)、LDH、ALP、CK的同工酶及亞型。毛細(xì)管區(qū)帶電泳可分離的項(xiàng)目包括:多肽、氨基酸、DNA、酶分子等研究熱點(diǎn)。三)方法學(xué)評(píng)價(jià)四、層析技術(shù)(一)原理:利用固定相和流動(dòng)相理化性質(zhì)的差異而建立起來(lái)的分析技術(shù)。當(dāng)

7、流動(dòng)相(待分離物質(zhì))經(jīng)過(guò)固定相時(shí),由于各組分的理化性質(zhì)差異,與兩相發(fā)生相互作用(吸附、結(jié)合)的能力不同,在兩相中的分配不同,隨著流動(dòng)相的推進(jìn),各組分在兩相中進(jìn)行不斷再分配。與固定相作用弱的組分,受到阻力小,向前移動(dòng)速度快,反之,移動(dòng)速度慢,從而達(dá)到將樣品中各單一組分分離的目的。(二)層析技術(shù)的類(lèi)型:1按兩相所處狀分:液-液層析法、液固層析法、氣-液層析法、氣-固層析法2按操作模式不同分:柱層析法、薄層析法、紙層析法、薄膜層析法3.按層析原理分:吸附層析法-固定相是固體吸附劑分配層析法-固定相是靜止的液體CONTINUE四、層析技術(shù)臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理共20張課件臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理共20張課件臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理共20張課件臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理共20張課件臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理共20張課件臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)與實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量