酶聯(lián)免疫方法原理與詳細操作步驟課件

1、酶聯(lián)反應(yīng)知識簡介03/11/15酶聯(lián)反應(yīng)知識簡介03/11/151.ELISA的原理2.ELISA的類型3.試劑準備：免疫吸附劑 結(jié)合物 酶底物的準備 4.對照設(shè)定5.標本的采取和保存6.結(jié)果判斷 1.ELISA的原理 ELISA是一種免疫測定（immunoassay，IA） 。基礎(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進行定性或定量分析。1.ELISA的原理 ELISA是一種免疫測定（immunoassay，IA酶免疫測定類型 這種固相酶免疫測定方法在1971年最初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定（Enz

2、yme Linked ImmunoSorbent Assay），簡稱ELISA。酶免疫技術(shù)酶免疫組化酶免疫測定均相酶免疫測定非均相酶免疫測定固相酶免疫測定液相酶免疫測定酶免疫測定類型 這種固相酶免疫測定方法在1971年最初建立時1.1抗原抗體反應(yīng) 1.1.1可逆性 抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+AbAgAb 抗體的親和力（affinity），可以用平衡常數(shù)K表示：K=AgAbAgAb ,AgAb的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。1.1抗原

3、抗體反應(yīng) 1.1.1可逆性 抗原與抗體結(jié)1.1.2特異性 抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點之間。化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補關(guān)系，具有高度的特異性。 測定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。1.1.2特異性 抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與1.1.3最適比例 1.1.3最適比例 1.1.4敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5-10g/ml免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿標記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍，達ng/ml水平例如，HBsAg，其敏感度可達0.1ng/ml。1.1.4敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平1.4免疫測定在臨床檢驗

4、中的應(yīng)用由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣。1.4免疫測定在臨床檢驗中的應(yīng)用2ELISA的類型 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即免疫吸附劑（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體，稱為結(jié)合物（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物。 可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。 2ELISA的類型 ELISA可用于測定抗原，也可用于2.2.1雙抗體夾心法測抗原此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HB

5、sAg、HBeAg、AFP等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。2.2.1雙抗體夾心法測抗原此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分2.2.2 雙抗原夾心法測抗體 用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBsAg的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標記方法。2.2.2 雙抗原夾心法測抗體 用特異性抗原進行包被和2.2.3 間接法測抗體 傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。2.2.3 間接

6、法測抗體 傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點是只要變2.2.4 競爭法測抗體 當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。 2.2.4 競爭法測抗體 當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或2.2.5 競爭法測抗原 小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標抗原愈少，最后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。2.2.5 競爭法測抗原 小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心2.2.6 捕獲包被法測抗體Ig

7、M的檢測常用于傳染病的診斷。用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。此法常用于病毒性感染的早期診斷。2.2.6 捕獲包被法測抗體IgM的檢測常用于傳染病的診斷。2.2.7 ABS-ELISA法 ：固相支持物；：樣品；：特異性IgG；：生物素化抗小鼠IgG （Biotin）；：辣根過氧化物酶HRP-酶標鏈親和素（Avidin）；：DAB顯色液；：顯色；2.2.7 ABS-ELISA法 ：固相支持物；3. ELISA的試劑(A、B、C三部分)ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。（1）已包被抗原或抗體的固相載

8、體（免疫吸附劑）；（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對照品和陽性對照品，參考標準品；（5）結(jié)合物及標本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液3. ELISA的試劑(A、B、C三部分)ELISA中有三ELISA的試劑準備A 固相載體 聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。 聚氯乙烯。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。 良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。ELISA的試劑準備A 固相載體 聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白3.1.2

9、 包被的方式 將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。 蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。3.1.2 包被的方式 將抗原或抗體固定在過程稱為包被不易吸附的非蛋白質(zhì)抗原可用間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法。親和素生物素 即用親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大

10、應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。 優(yōu)點：試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附的非蛋白質(zhì)抗原可用間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析包被用抗原：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。合成多肽抗原是抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一個抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由于分子量太小，往往難于直接吸附于固相上。借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附，間接地結(jié)合到固相載體表面

11、。包被用抗原：3.1.4 包被用抗體IgG對聚苯乙烯有強吸附力，其聯(lián)結(jié)發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點暴露于外。取材于抗血清或含單克隆抗體的培養(yǎng)液.須除去雜抗體后才能用于ELISA，以保證試驗的特異性。腹水中單抗的濃度較高，特異性亦較強，因此不需要作吸收層析處理，直接包被。在某些情況下，用多種單抗混合包被，可取得更好的效果。3.1.4 包被用抗體IgG對聚苯乙烯有強吸附力，其聯(lián)結(jié)發(fā)3.1.5 包被的條件pH9.6碳酸鹽緩沖液pH7.2的磷酸鹽緩沖液pH7-8的Tris-HCL緩沖液。 加入包被液后，在4-8冰箱中放置過夜，37中保溫2小時。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實

12、驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/ml-20ug/ml。3.1.5 包被的條件pH9.6碳酸鹽緩沖液3.1.6 封閉封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑：0.05%-0.5%的BSA; 10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價廉，可以高濃度使用（5%）。 所有的ELISA固相均需封閉？3.1.6 封閉封閉(blocking)是繼包被之后用高濃3.4 洗滌液在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸鹽緩沖液。3.4

13、洗滌液ELISA的試劑準備B 3.2 結(jié)合物 即酶標記的抗體（或抗原）是ELISA中關(guān)鍵的試劑 1 酶的催化活性 2抗體（或抗原）的免疫活性 3含有或少含有游離的抗體（或抗原） 4結(jié)合物尚要有良好的穩(wěn)定性。ELISA的試劑準備B 3.2 結(jié)合物 即酶標記3.2.1 結(jié)合物用的抗原和抗體 制備結(jié)合物時所用純度較高的IgG，以免在與酶聯(lián)結(jié)時其他雜蛋白的干擾。最好用層析純化的抗體，這樣全部酶結(jié)合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進行反應(yīng)，實驗結(jié)果本底淺淡。在ELISA中用酶標抗原的模式不多，總的要求是抗原必須是高純度的。3.2.1 結(jié)合物用的抗原和抗體 制備結(jié)合物時所用純度較3.2.2酶純度高，

14、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，專一性強，性質(zhì)穩(wěn)定，來源豐富，價格不貴，受檢標本中不存在相同的酶。酶結(jié)合物保留活性部分和催化能力，底物易于制備和保存，價格低廉，有色產(chǎn)物易于測定等。在ELISA中，HRP，AP，葡萄糖氧化酶，-D-半乳糖苷酶和脲酶等。HRP是一種糖蛋白，含糖量約為18%，分子量為44000，是一種復(fù)合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成，是一種卟啉蛋白質(zhì)。3.2.2酶純度高，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，專一性強，性質(zhì)穩(wěn)定3.2.3 結(jié)合物的制備酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。（1）戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團試劑，可使酶與蛋白質(zhì)的氨基通過它而聯(lián)結(jié)。

15、有效（結(jié)合率達60%-70%）和重復(fù)性好。 交聯(lián)反應(yīng)是隨機的，結(jié)合物的大小也不均一，酶與酶，抗體與抗體之間也有可能交聯(lián)，影響效果。（2）過碘酸氧化法：適用含糖量較高的酶。過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基很活潑，可與蛋白質(zhì)上的氨基形成chiff氏堿而結(jié)合。簡便有效.3.2.3 結(jié)合物的制備酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即 結(jié)合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中最后的酶活性測定。但游離的抗體則會與酶標抗體競爭相應(yīng)的固相抗原，因此制備的酶結(jié)合物應(yīng)予純化，去除游離的酶和抗體后用于檢測，效果更好。 制得結(jié)合物，最適的工作濃度就是指結(jié)合物稀釋至這一濃度時，能維護一個低的本底，并獲得測定的最佳

16、靈敏度，達到最合適的測定條件和測定費用的節(jié)省。 結(jié)合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中最后的酶活性測3.2.4結(jié)合物的保存 酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，易失活。高濃度較為穩(wěn)定，凍干后可在普通冰箱中保存一年左右。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油，加入蛋白保護劑。另外再加入抗生素（例如慶大霉素）和防腐劑（HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉）。3.2.4結(jié)合物的保存 酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，易失3.2.5 結(jié)合物的稀釋液 用于稀釋高濃度的結(jié)合物以配成工作液。為避免結(jié)合物在反應(yīng)中直接吸附在固相載體上：0.1%牛血清白蛋白， 0.05%吐溫20 。試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時不需再

17、行稀釋，在4-8保存期可達6個月。3.2.5 結(jié)合物的稀釋液 用于稀釋高濃度的結(jié)合物以配成工試劑準備 C 酶的底物試劑準備 C 酶的底物3.3 酶的底物3.3.1 HRP的底物OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后，在492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是HRP結(jié)合物最常用的底物。 DH2+ H2O2 D+ 2H2O 上式中， DH2為供氧體， H2O2為受氫體。DH2一般為無色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物。DH2如：鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS 。E3.3 酶的底物3.3.1 HRP的底物OPD氧化后的產(chǎn)TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍色。TMB性質(zhì)

18、較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液。酶反應(yīng)終止后，TMB產(chǎn)物由藍色呈黃色，可在比色計中定量，最適吸收波長為450nm。ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些試劑盒所采用。HRP對氫受體的專一性很高，僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(urea peroxide)。 TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍色。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶AP的底物為磷酸酯酶，一般采用對硝基苯磷酸酯作為底物。產(chǎn)物為黃色的對硝基酚，在405nm波長處有吸收峰。用NaOH終止酶反應(yīng)后，黃色可穩(wěn)定一時間。AP也有發(fā)熒光底物（磷酸4-甲基傘酮），可用于ELISA作熒光測定，敏感度

19、較高于用顯色底物的比色法。AP的底物為磷酸酯酶，一般采用對硝基苯磷酸酯作為底物。產(chǎn)物為3.5 酶反應(yīng)終止液常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。3.5 酶反應(yīng)終止液4 對照設(shè)定 陽性對照品(positive control)和陰性對照品(negative control)是檢驗試驗有效性的控制品，同時也作為判斷結(jié)果的對照。陽性對照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測標本的組成相一致，多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì)。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱；在測定中得到的吸光值與受檢標本吸光值比較，可以估計標本物質(zhì)的量。4 對照設(shè)定 陽性對照品(pos

20、itive control參考標準品 定量測定（如甲胎蛋白質(zhì)，癌胚抗原測定等）應(yīng)含有制作標準曲線用的參考標準品，應(yīng)包括覆蓋可檢測范圍的4-5個濃度，一般均配入含蛋白保護劑及防腐劑的緩沖液中.陰性對照品須先行檢測確定不含待測物質(zhì)。例如HBsAg檢測的陰性對照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是陰性。參考標準品 定量測定（如甲胎蛋白質(zhì)，癌胚抗原測定等）應(yīng)含有5 標本的采取和保存 體液、分泌物和排泄物等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。以血清標本為例：血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份同血清。血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標本應(yīng)避免溶血：紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以

21、HRP為標記的ELISA測定中，可能會增加非特異性顯色。5 標本的采取和保存 體液、分泌物和排泄物等均可作標本以測定加樣: 在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。基本操作注意事項加樣: 在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加保溫抗原抗體完成反應(yīng)的保溫過程稱為溫育(incubation)。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育？溫育常采用的溫度有43、37、室溫和4（冰箱溫度）等。37是實驗室中常用的保溫溫度

22、，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。保溫抗原抗體完成反應(yīng)的保溫過程稱為溫育(incubation保溫方式：ELISA儀器附有特制的電熱塊，水浴。若用保溫箱：ELISA板放在濕盒內(nèi)，在盒底墊濕的紗布，最后將ELISA板放在濕紗布上。反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng)，操作時的室溫應(yīng)嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標準室溫溫度是指20-25，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定。保溫方式：ELISA儀器附有特制的電熱塊，水浴。洗滌洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻也決定

23、著實驗的成敗。ELSIA洗滌：達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有流水沖洗式和浸泡式兩種：洗滌洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻也決定著實（1）流水沖洗式 流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液為蒸餾水，自來水。洗滌效果更為徹底，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣適用于微量滴定板的洗滌。讓水流沖擊板孔表面，洗

24、滌效果更佳。 （2）浸泡式 微量滴定板多采用。洗滌液為非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。（1）流水沖洗式 流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液顯色顯色是酶催化無色的底物生成有色產(chǎn)物的溫育反應(yīng)。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行。TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯

25、色達頂峰，隨即逐漸減弱，至2小時后即可完全消退至無色。顯色顯色是酶催化無色的底物生成有色產(chǎn)物的溫育反應(yīng)。反應(yīng)的溫度比色拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀中。 以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進行計算。結(jié)果以光密度（oplical density，OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence，A），兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長為492nm，表示方法為A492n

26、m或OD492nm。比色拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀中。酶標比色儀酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指測讀ELISA光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準確性為1%，重復(fù)性達0.5%。操作時室溫宜在15-30，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀A值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀。各種酶標儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細閱讀說明書。酶標比色儀酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指測讀ELISA光度計。6 結(jié)果判斷 6.1 定性測定定性測定的結(jié)果判斷作出“有”或“無”的回答，分別用“陽性”、“陰性