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1、中國(guó)藥典2015年版四部色譜法概述中國(guó)藥典2015年版四部色譜法概述BEAConfidential.|2主要內(nèi)容2015年版藥典四部色譜法目錄及修訂情況色譜法的基本概念色譜法在中國(guó)藥典中的沿革中國(guó)藥典2015年版色譜法內(nèi)容概況BEAConfidential.|2主要內(nèi)容2015年版藥典2015版四部色譜法目錄2015版四部色譜法目錄BEAConfidential.|4色譜法的基本概念色譜法是利用混合物中各組分的理化性質(zhì)的差異(吸附力、溶解度、分子形狀和大小、分子極性、分子親和力等),使各組分以不同程度分布在兩個(gè)相中,其中一個(gè)相叫固定相,另一相流過(guò)此固定相叫作流動(dòng)相。由于各組分受流動(dòng)相作用產(chǎn)生的
2、推力和受固定相作用產(chǎn)生的阻力的不同,使各組分產(chǎn)生不同的移動(dòng)速度,使得結(jié)構(gòu)上只有微小差異的各組分得到分離。再配合相應(yīng)的光學(xué)、電學(xué)、電化學(xué)和或其他相關(guān)檢測(cè)手段,對(duì)各組分進(jìn)行定性和定量分析的方法。BEAConfidential.|4色譜法的基本概念色譜法中國(guó)藥典四部色譜法概況醫(yī)學(xué)課件毛細(xì)管電色譜法(CEC)色譜法GSC液相色譜法 (LC)柱色譜法平面色譜法毛細(xì)管電泳法 (CE)LLCLSCSECIECBPC紙色譜法薄層色譜法(TLC)LLCLLCLSC氣相色譜法(GC)柱色譜法GLC超臨界流體色譜法 (SFC)色譜法的分類(lèi)毛細(xì)管電色譜法(CEC)色譜法GSC液相色譜法 色譜法的基本概念分離原理吸附色
3、譜法分配色譜法離子交換色譜法排阻色譜法分離方法紙色譜法薄層色譜法柱色譜法高效液相色譜法氣相色譜法色譜法的基本概念分離原理分離方法色譜法在中國(guó)藥典中的沿革紙色譜法(1985)薄層色譜法(1985)柱色譜法(1985)高效液相色譜法(1985)氣相色譜法(1985)電泳法(1990)毛細(xì)管電泳法(2000)分子排阻色譜法(2000)離子色譜法(2010)超臨界流體色譜法(2015)臨界點(diǎn)色譜法(2015)色譜法在中國(guó)藥典中的沿革紙色譜法(1985)0501紙色譜法系以紙為載體,紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相,用展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)的分配色譜鑒別純度檢查含量測(cè)定0501紙色譜法系以紙為載體,紙上所含水分或
4、其他物質(zhì)為固定相0501紙色譜法二部P1000頁(yè)0501紙色譜法二部P1000頁(yè)0502薄層色譜法 薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上,在展開(kāi)容器內(nèi)用展開(kāi)劑展開(kāi),使供試品所含成分分離,所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖對(duì)比,亦可用薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描,用于鑒別、檢査或含量測(cè)定將舊版藥典“對(duì)照物”修訂為“對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”0502薄層色譜法 薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于0502薄層色譜法新版藥典規(guī)范了市售薄層板的要求: 市售薄層板按固定相種類(lèi)分為硅膠薄層板、聚酰胺薄層板、氧化鋁薄層板等;按固定相粒 徑大小分為普通薄層板(1040um)和高效薄層板 (510um);按硅膠板是否含有熒光劑
5、分為硅膠G 板和硅膠GF254板。操作方法:點(diǎn)樣點(diǎn)直徑限值由3mm修改為4mm。其他變化:基本整合舊版藥典一部和二部。0502薄層色譜法新版藥典規(guī)范了市售薄層板的要求:0502薄層色譜法儀器與材料薄層板點(diǎn)樣器展開(kāi)容器顯色劑顯色裝置檢視裝置 薄層掃描儀0502薄層色譜法儀器與材料0502薄層色譜法操作方法薄層板制備點(diǎn)樣展開(kāi)顯色與檢視記錄0502薄層色譜法操作方法0502薄層色譜法操作方法薄層板制備(1)市售薄層板 除聚酰胺薄膜外,110活化30分鐘;如被空氣雜質(zhì)污染,可以用溶劑預(yù)洗(2)自制薄層板0502薄層色譜法操作方法0502薄層色譜法操作方法點(diǎn)樣 在潔凈干燥的環(huán)境中 用專(zhuān)用毛細(xì)管或配合相應(yīng)
6、的半自動(dòng)、自動(dòng)點(diǎn)樣器械點(diǎn)樣于薄層板上 一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀 點(diǎn)樣基線距底邊1015mm ,高效板一般基線離底邊810mm。 圓點(diǎn)狀直徑一般不大于4mm,高效板一般不大于2mm;條帶狀寬度一般為510mm,高效板條帶寬度一般為48mm。 點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互不干擾為宜,一般不少于8mm,高效板供試品間隔不少于5mm0502薄層色譜法操作方法0502薄層色譜法展開(kāi)示意圖高效板上行一般為58cm0502薄層色譜法展開(kāi)示意圖高效板上行一般為58cm0502薄層色譜法操作方法顯示與檢視 有顏色的物質(zhì)直接可見(jiàn)光下檢視 無(wú)色物質(zhì)可用噴霧和浸漬以適宜的顯色劑顯色,或者加熱顯色 紫外熒光下
7、顯色(254nm和365nm) 在紫外光下有吸收的成分,可用GF254板(帶熒光劑),觀察淬滅形成的斑點(diǎn)0502薄層色譜法操作方法0502薄層色譜法操作方法記錄 攝像設(shè)備拍攝,記錄光學(xué)照片或電子圖像 薄層掃描儀掃描儀掃描或其他方式記錄色譜圖0502薄層色譜法操作方法0502薄層色譜法系統(tǒng)適用試驗(yàn)要求(1)比移值Rf = 0.20.80502薄層色譜法系統(tǒng)適用試驗(yàn)要求Rf = 0.20.80502薄層色譜法系統(tǒng)適用試驗(yàn)要求 按各品種項(xiàng)下要求對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn) 行系統(tǒng)適用性試驗(yàn),即用供試品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件 進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整 ,應(yīng)符合規(guī)定的要求。0502薄層色譜法系統(tǒng)適用試驗(yàn)要求Rf = 0.20.80
8、502薄層色譜法(1)比移值Rf = 0.20.80502薄層色譜法(1)比移值0502薄層色譜法(2)檢出限 指限量檢査或雜質(zhì)檢査時(shí),供試品溶液中被 測(cè)物質(zhì)能被檢出的最低濃度或量。 一般采用已知濃度的供試品溶液或?qū)φ諛?biāo)準(zhǔn)溶液 ,與稀釋若干倍的自身對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)溶液在規(guī)定 的色譜條件下,在同一薄層板上點(diǎn)樣、展開(kāi)、 檢視 ,后者顯清晰可辨斑點(diǎn)的濃度或量作為檢出限 。0502薄層色譜法(2)檢出限 指限量檢査或雜質(zhì)檢査時(shí),0502薄層色譜法(3)分離度(分離效能)供試品與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜中斑點(diǎn)均應(yīng)清晰分離 薄層掃描法用于限量檢查和含量測(cè)定時(shí),R1.00502薄層色譜法(3)分離度(分離效能)供試品與對(duì)照
9、標(biāo)準(zhǔn)物0502薄層色譜法(4)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(薄層掃描要求)同板同供試液(不顯色):RSD5.0%同板同供試液(顯色):RSD10.0%不同板同供試液(顯色和不顯色):RSD10.0%0502薄層色譜法(4)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(薄層掃描要求)0502薄層色譜法測(cè)定法鑒別:供試品與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)斑點(diǎn)顏色和比移值一限量檢查與雜質(zhì)檢查:半定量顏色(峰面積):供試品雜質(zhì)斑點(diǎn)雜質(zhì)對(duì)照品斑點(diǎn)顏色(峰面積):供試品雜質(zhì)斑點(diǎn)流動(dòng)相)離子交換分子排阻手性分離0512液相色譜法色譜柱反相(非極性:C18、C8、CN、NH2)(組分的出峰檢測(cè)器0512液相色譜法檢測(cè)器是液相色譜儀的“眼睛” 其作用是把色譜柱連續(xù)流出的樣品組分
10、轉(zhuǎn)變成易于測(cè)量的電信號(hào),被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收,得到樣品分離的色譜圖檢測(cè)器性能的好壞直接關(guān)系到分析結(jié)果的可靠性與準(zhǔn)確性通用型檢測(cè)器(例如:示差折光檢測(cè)器)專(zhuān)用型(選擇性)檢測(cè)器(例如:紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器)半通用型檢測(cè)器(例如:蒸發(fā)光散射檢測(cè)器)根據(jù)對(duì)各類(lèi)物質(zhì)響應(yīng)的差別,檢測(cè)器可分為三大類(lèi):檢測(cè)器0512液相色譜法檢測(cè)器是液相色譜儀的“眼睛”根據(jù)對(duì)各增加了超高效液相色譜柱內(nèi)徑(約2mm或更小),粒徑(約2m或更小)(結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí),應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn))溫度會(huì)影響分離效果,品種正文中未指明色譜柱溫度時(shí)系指室溫,應(yīng)注意室溫變化的影響。為改善分離效果可適當(dāng)提高色譜柱的溫度,但不宜超過(guò)
11、60。品種正文項(xiàng)下規(guī)定的條件除填充劑類(lèi)型、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類(lèi)型不得改變外,其余如色譜柱內(nèi)徑與長(zhǎng)度、填充劑粒徑、流動(dòng)相速度、流動(dòng)相組分比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器靈敏度等,均可適當(dāng)改變,以達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。0512液相色譜法增加了超高效液相0512液相色譜法流動(dòng)相的要求0512液相色譜法流動(dòng)相的要求0512液相色譜法HPLC:系統(tǒng)適用性要求(通則)中國(guó)藥典要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn),即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整,要求達(dá)到規(guī)定的要求或滿足在分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子等相關(guān)規(guī)定。色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、靈敏度、拖尾因子和重復(fù)性等五個(gè)參
12、數(shù)。按各品種正文項(xiàng)下要求對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適用性試驗(yàn),即用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液在規(guī)定的色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn),必要時(shí),可對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,以符合要求。0512液相色譜法HPLC:系統(tǒng)適用性要求(通則)0512液相色譜法要求:-理論塔板數(shù)N:大于規(guī)定值(按規(guī)定方法計(jì)算,具體品種)-拖尾因子T:應(yīng)在0.95-1.05之間(以峰高定量時(shí))-分離度R:應(yīng)大于1.5-重復(fù)性:連續(xù)進(jìn)樣5次,峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%-靈敏度:(新增)定量:10:1;定性:3:10512液相色譜法要求:0512液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(1)色譜柱理論板數(shù)(n) 具體品種要求不同用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能。
13、由于不同物質(zhì)在同一色譜柱上的色譜行為不同,采用理論板數(shù)作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí),應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì),一般為待測(cè)組分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。在規(guī)定的色譜條件下,注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液,記錄色譜圖,量出供試品主成分峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間tR(以分鐘或長(zhǎng)度計(jì),下同,但應(yīng)取相同單位)和峰寬(W)或半高峰寬(Wh/2),按n= 16( tR /W)2或n=5.54(tRWh2)2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。0512液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)0512液相色譜法無(wú)論是定性鑒別還是定量分析,均要求待測(cè)峰與其他峰、內(nèi)標(biāo)峰或特定的雜質(zhì)對(duì)照峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定外,待測(cè)組分與相鄰共存物之間的分離度
14、應(yīng)大于1.5系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(2)分離度(R) 0512液相色譜法無(wú)論是定性鑒別還是定量分析,均要求待測(cè)峰與其他峰、內(nèi)標(biāo)峰或特系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(3)靈敏度(S/N)定量測(cè)定時(shí),信噪比應(yīng)不小于10;定性測(cè)定時(shí),信噪比應(yīng)不小于3.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中可以設(shè)置靈敏度測(cè)試溶液來(lái)評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)的檢測(cè)能力。0512液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)0512液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(4)拖尾因子(T)以峰高作定量參數(shù)時(shí),除另有規(guī)定外,T值應(yīng)在0.951.05之間。0512液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)0512液相色譜法(5)重復(fù)性用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)響應(yīng)值得重復(fù)性能。 采用外標(biāo)法時(shí),通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,
15、除另有規(guī)定外,其峰面積測(cè)量值得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%; 采用內(nèi)標(biāo)法時(shí),通常配置相當(dāng)于80%、100%、120%的對(duì)照品溶液,加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液,配成3中不同的濃度,分別進(jìn)樣2次,計(jì)算平均校正因子,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%0512液相色譜法(5)重復(fù)性0512液相色譜法測(cè)定法(1) 內(nèi)標(biāo)法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,精密稱(chēng)(量)取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì),分別配成溶液,精密量取各適量,混合配成校正因子側(cè)定用的對(duì)照溶液。取一定量注入儀器,記錄色譜圖,測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高,按下式計(jì)算校正因子: 再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液,注入儀器,記錄色譜圖,測(cè)量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的
16、峰面積或峰高,按下式計(jì)算含量:0512液相色譜法測(cè)定法0512液相色譜法測(cè)定法(2) 外標(biāo)法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,精密稱(chēng)(量)取對(duì)照品和供試品,配制成溶液,分別精密取一定量,注入儀器,記錄色譜圖,測(cè)量對(duì)照品溶液和供試品溶液中待測(cè)成分的峰面積(或峰高),按下式計(jì)算含量:0512液相色譜法測(cè)定法0512液相色譜法測(cè)定法(3)加校正因子的主成分自身對(duì)照法 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí),可采用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。在建立方法時(shí),按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,精密稱(chēng)(量)取雜質(zhì)對(duì)照品和待測(cè)成分對(duì)照品各適量,配制測(cè)定雜質(zhì)校正因子的溶液,進(jìn)樣,記錄色譜圖,按上述(1)法計(jì)算雜質(zhì)的校正因子。此校正因子可直接載入各品種項(xiàng)下,用
17、于校正雜質(zhì)的實(shí)測(cè)峰面積。這些需作校正計(jì)算的雜質(zhì),通常以主成分為參照,采用相對(duì)保留時(shí)間定位,其數(shù)值一并載入各品種項(xiàng)下。0512液相色譜法測(cè)定法0512液相色譜法測(cè)定法 (3)加校正因子的主成分自身對(duì)照法 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí),按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度,將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤海鳛閷?duì)照溶液;進(jìn)樣,記錄色譜圖,必要時(shí),調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)范圍(以噪聲水平可接受為限)使對(duì)照溶液的主成分色譜峰的峰高約達(dá)滿量程的10%25%。除另有規(guī)定外,一般進(jìn)樣不少于3針,通常含量低于0.5%的雜質(zhì),峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)小于10%;含量在0.5%2%的雜質(zhì),峰面積的RSD應(yīng)小于5%;含量大于2%的雜質(zhì),峰
18、面積的RSD應(yīng)小于2%。然后,取供試品溶液和對(duì)照溶液適量,分別進(jìn)樣,除另有規(guī)定外,供試品溶液的記錄時(shí)間,應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍,測(cè)量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積,分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對(duì)照溶液主成分的峰面積比較,計(jì)算各雜質(zhì)含量。0512液相色譜法測(cè)定法0512液相色譜法測(cè)定法 (4)不加校正因子的主成分自身對(duì)照法 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí),若沒(méi)有雜質(zhì)對(duì)照品,也可采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法。同上述(3)法配制對(duì)照溶液并調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度后,取供試品溶液和對(duì)照溶液適量,分別進(jìn)樣,前者的記錄時(shí)間,除另有規(guī)定外,應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍,測(cè)量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對(duì)照溶液
19、主成分的峰面積比較,計(jì)算雜質(zhì)含量。0512液相色譜法測(cè)定法0512液相色譜法測(cè)定法 (5)面積歸一化法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,配制供試品溶液,取一定量注入儀器,記錄色譜圖。測(cè)量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分率。 用于雜質(zhì)檢查時(shí),由于峰面積歸一化法測(cè)定誤差大,因此,通常只用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量。除另有規(guī)定外,一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。0512液相色譜法測(cè)定法0512液相色譜法中國(guó)藥典四部色譜法概況醫(yī)學(xué)課件離子色譜法系采用高壓輸液泵系統(tǒng)將規(guī)定的洗脫液泵入裝有填充劑的色譜柱對(duì)可解離物質(zhì)進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品由洗脫液帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分
20、離后,進(jìn)入檢測(cè)器(必要時(shí)經(jīng)過(guò)抑制器或衍生系統(tǒng)),由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄并處理色譜信號(hào)。離子色譜法常用于無(wú)機(jī)陰離子、無(wú)機(jī)陽(yáng)離子、有機(jī)酸、糖醇類(lèi)、氨基糖類(lèi)、氨基酸、蛋白質(zhì)、糖蛋白等物質(zhì)的定性和定量分析。它的分離機(jī)理主要為離子交換,即基于離子交換色譜固定相上的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子之間進(jìn)行的可逆交換;離子色譜法的其他分離機(jī)理還有形成離子對(duì)、離子排阻等。0513 離子色譜法離子色譜法系采用高壓輸液泵系統(tǒng)將規(guī)定的洗脫液泵入裝有填充劑的 0514 分子排阻色譜法分子排阻色譜法是根據(jù)待測(cè)組分的分子大小進(jìn)行分離的一種液相色譜技術(shù)。分子排阻色譜法的分離原理為凝膠色譜柱的分子篩機(jī)制。色譜柱多以親
21、水硅膠、凝膠或經(jīng)過(guò)修飾的凝膠如葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose) 等為填充劑。 0514 分子排阻色譜法分子排阻色譜法是根 采用氣體為流動(dòng)相(載氣)流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后,被載氣帶入色譜柱進(jìn)行分離,各組分先后進(jìn)入檢測(cè)器,用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。0521 氣相色譜法與2010年版藥典相比無(wú)修訂 采用氣體為流動(dòng)相(載氣)流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分0521 氣相色譜法1、載氣系統(tǒng)2、進(jìn)樣系統(tǒng)3、分離系統(tǒng) 4、溫控系統(tǒng)5、檢測(cè)系統(tǒng)6、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)氣相色譜儀流程圖0521 氣相色譜法1、載氣系統(tǒng)氣相色譜儀流程圖 0521 氣
22、相色譜法 0521 氣相色譜法 0521 氣相色譜法系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)照高效液相色譜法(通則0512)項(xiàng)下規(guī)定系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 0521 氣相色譜法系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)照高效液相色譜法(0521 氣相色譜法0521 氣相色譜法 各品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件,除檢測(cè)器種類(lèi)、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得改變外,其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體牌號(hào)、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等,均可適當(dāng)改變,以適應(yīng)具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般色譜圖約于30分鐘內(nèi)記錄完畢。0521 氣相色譜法 各品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件,除檢測(cè)器種類(lèi)、固測(cè)定法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法面積歸一化法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法精密
23、稱(chēng)(量)取某個(gè)雜質(zhì)或待測(cè)成分對(duì)照品適量,配制成適當(dāng)濃度的對(duì)照品溶液,取一定量,精密加入到供試品溶液中,根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定雜質(zhì)或主成分含量,再扣除加入的對(duì)照品溶液含量,即得供試品溶液中某個(gè)雜質(zhì)和主成分含量。 (當(dāng)采用頂空進(jìn)樣時(shí),由于供試品和對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中,故可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響;當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí),應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果為準(zhǔn)。)0521 氣相色譜法前面三種方法要求與液相色譜一致測(cè)定法0521 氣相色譜法前面三種方法要求與液相色譜一致對(duì)于生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑,應(yīng)在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效去除。除正文已明確列有“殘留溶劑”檢查的品種必須依法
24、進(jìn)行該項(xiàng)檢查外,其他未在“殘留溶劑”項(xiàng)下明確列出的有機(jī)溶劑與未在正文中列有此項(xiàng)檢查的品種,如生產(chǎn)過(guò)程中引入或產(chǎn)品中殘留有機(jī)溶劑,均應(yīng)按附錄“殘留溶劑測(cè)定法”檢查并應(yīng)符合相應(yīng)溶劑的限度規(guī)定。(凡例十七)VE氣相色譜法對(duì)于生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑,應(yīng)在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效中國(guó)藥典四部色譜法概況醫(yī)學(xué)課件0521 氣相色譜法0521 氣相色譜法0531超臨界流體色譜法(新增)流動(dòng)相為CO2,價(jià)格低,更環(huán)保。0532臨界點(diǎn)色譜法(新增)是根據(jù)聚合物的功能基團(tuán)、嵌段結(jié)構(gòu)的差異進(jìn)行聚合物分離的一種色譜技術(shù)。中國(guó)藥典四部色譜法概況醫(yī)學(xué)課件2015版藥典四部解析2015版中國(guó)藥典四部主要變化理化部分2關(guān)于色譜
25、柱小粒徑色譜柱,提速趨勢(shì)很多方法,都沒(méi)有規(guī)定具體的色譜柱規(guī)格,便于企業(yè)根據(jù)自己的實(shí)際情況,選擇合適的規(guī)格色譜柱。粒徑較小的色譜柱,柱效較高,所需柱長(zhǎng)較短,從而柱長(zhǎng)較短,從而可縮短分析時(shí)間。同時(shí),粒徑較小的色譜柱,對(duì)操作環(huán)境與規(guī)范性的要求也更高。等度洗脫方法,較容易進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換。梯度洗脫方法,需要注意梯度表與柱長(zhǎng)的比例關(guān)系,以及系統(tǒng)的梯度延遲體積轉(zhuǎn)換。2015版藥典四部解析2015版中國(guó)藥典四部主要變化2015版藥典四部解析2015版中國(guó)藥典四部主要變化理化部分2關(guān)于檢測(cè)器檢測(cè)器的種類(lèi)與作用檢測(cè)器是液相色譜儀的“眼睛”其作用是把色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉(zhuǎn)變成易于測(cè)量的電信號(hào),被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收,得到
26、樣品分離的色譜圖檢測(cè)器性能的好壞直接關(guān)系到分析結(jié)果的可靠性與準(zhǔn)確性根據(jù)對(duì)各類(lèi)物質(zhì)響應(yīng)的差別,檢測(cè)器可分為三大類(lèi):通用型檢測(cè)器(例如:示差折光檢測(cè)器)專(zhuān)用型(選擇性)檢測(cè)器(例如:紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器)半通用型檢測(cè)器(例如:蒸發(fā)光散射檢測(cè)器)2015版藥典四部解析2015版中國(guó)藥典四部主要變化2015版藥典四部解析2015版中國(guó)藥典四部主要變化理化部分2關(guān)于檢測(cè)器衡量檢測(cè)器的指標(biāo)靈敏度:S=R/Q-R是檢測(cè)器響應(yīng)值的增量-Q是樣品量的增量噪音:沒(méi)有樣品時(shí)檢測(cè)器的最大輸出信號(hào)漂移:檢測(cè)器在一段時(shí)間內(nèi)響應(yīng)值的變化線性動(dòng)態(tài)范圍:最大線性響應(yīng)與最小檢出限之比最低檢測(cè)限:樣品產(chǎn)生兩或三倍于噪音信號(hào)時(shí)的濃
27、度信噪比:S/N注意:最低檢測(cè)限和信噪比不是一個(gè)單純的檢測(cè)器指標(biāo)。它實(shí)際上是評(píng)價(jià)整個(gè)色譜柱系統(tǒng)的指標(biāo),包括了色譜系統(tǒng)、分離機(jī)理、色譜柱內(nèi)的綜合性指標(biāo)2015版藥典四部解析2015版中國(guó)藥典四部主要變化VD高效液相色譜法(2)檢測(cè)器選擇性紫外、熒光、電化學(xué)通用型蒸發(fā)光散射、示差折光VD高效液相色譜法(2)檢測(cè)器VD高效液相色譜法(3)流動(dòng)相反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)(采用紫外末端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),首選乙腈-水系統(tǒng)),如經(jīng)使用不合適時(shí),再選用其他溶劑系統(tǒng)。應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動(dòng)相,必須使用時(shí),應(yīng)盡可能選用含較低濃度緩沖液的流動(dòng)相。其中,調(diào)整流動(dòng)相組分比例時(shí),以組分比例較低者(小于或等于5
28、0%)相對(duì)于自身的改變量不超過(guò)30%且相對(duì)于總量的改變量不超過(guò)10%為限,如30%相對(duì)改變量的數(shù)值超過(guò)總量的10%時(shí),則改變量以總量的10%為限。VD高效液相色譜法(3)流動(dòng)相VD高效液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)理論板數(shù)分離度重復(fù)性拖尾因子VD高效液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)VD高效液相色譜法測(cè)定法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法加校正因子的主成分自身對(duì)照法不加校正因子的主成分自身對(duì)照法面積歸一化法VD高效液相色譜法測(cè)定法司帕沙星P221司帕沙星消旋山莨菪堿P866消旋山莨菪堿硫酸卡那霉素P967氨基糖苷類(lèi)抗生素蒸發(fā)光散射檢測(cè)法硫酸卡那霉素氨基糖苷類(lèi)抗生素蒸發(fā)光散射檢測(cè)法阿米卡星P388柱前衍生化法阿米卡星柱前衍生化法V
29、E氣相色譜法系采用氣體為流動(dòng)相(載氣)流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后,被載氣帶入色譜柱進(jìn)行分離,各組分先后進(jìn)入檢測(cè)器,用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。VE氣相色譜法系采用氣體為流動(dòng)相(載氣)流經(jīng)裝有填充劑的VE氣相色譜法載氣源進(jìn)樣部分色譜柱柱溫箱檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)VE氣相色譜法載氣源VE氣相色譜法VE氣相色譜法VE氣相色譜法各品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件,除檢測(cè)器種類(lèi)、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得改變外,其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體牌號(hào)、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等,均可適當(dāng)改變,以適應(yīng)具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般
30、色譜圖約于30分鐘內(nèi)記錄完畢。VE氣相色譜法各品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件,除檢測(cè)器種類(lèi)、固定液VE氣相色譜法測(cè)定法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法面積歸一化法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法(當(dāng)采用頂空進(jìn)樣時(shí),由于供試品和對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中,故可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響;當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時(shí),應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果為準(zhǔn)。)VE氣相色譜法測(cè)定法對(duì)于生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑,應(yīng)在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效去除。除正文已明確列有“殘留溶劑”檢查的品種必須依法進(jìn)行該項(xiàng)檢查外,其他未在“殘留溶劑”項(xiàng)下明確列出的有機(jī)溶劑與未在正文中列有此項(xiàng)檢查的品種,如生產(chǎn)過(guò)程中引入或產(chǎn)品中殘留有機(jī)溶劑,均應(yīng)按附錄“殘留溶劑
31、測(cè)定法”檢查并應(yīng)符合相應(yīng)溶劑的限度規(guī)定。(凡例十七)VE氣相色譜法對(duì)于生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑,應(yīng)在后續(xù)的生產(chǎn)環(huán)節(jié)予以有效頭孢泊肟酯P198殘留溶劑頭孢泊肟酯VF電泳法是指帶電荷的供試品(蛋白質(zhì)、核苷酸等)在惰性支持介質(zhì)(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠)中,在電場(chǎng)的作用下,向其對(duì)應(yīng)的電極方向按各自的速度進(jìn)行泳動(dòng),使組分分離成狹窄的區(qū)帶,用適宜的檢測(cè)方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜并計(jì)算其含量的方法。VF電泳法是指帶電荷的供試品(蛋白質(zhì)、核苷酸等)在惰性支VG毛細(xì)管電泳法是指以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)供試品中各組分的淌度(單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的遷移速度)和(或)分配行
32、為的差異而實(shí)現(xiàn)各組分分離的一種分析方法。VG毛細(xì)管電泳法是指以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直鹽酸頭孢吡肟P671鹽酸頭孢吡肟VH分子排阻色譜法是根據(jù)待測(cè)組分的分子大小進(jìn)行分離的一種液相色譜技術(shù)。分子排阻色譜法的分離原理為凝膠色譜柱的分子篩機(jī)制。VH分子排阻色譜法是根據(jù)待測(cè)組分的分子大小進(jìn)行分離的一種頭孢拉定P195頭孢拉定VJ離子色譜法系采用高壓輸液泵系統(tǒng)將規(guī)定的洗脫液泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離的色譜分析方法。注入的供試品由洗脫液帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離后,經(jīng)過(guò)抑制器或衍生系統(tǒng)進(jìn)入檢測(cè)器,由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。VJ離子色譜法系采用高壓輸液泵系統(tǒng)將規(guī)定的洗脫液泵入裝有一、離子色
33、譜的基本原理87生命至上技澤天下一、離子色譜的基本原理87生命至上技澤天下88生命至上技澤天下88生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理89生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理89生命至上技澤天下淋洗液在線發(fā)生器不用化學(xué)試劑,只用水(RFIC)環(huán)保:不直接接觸化學(xué)試劑使用方便:只用水和鼠標(biāo),省時(shí)省力重現(xiàn)性好:消除試劑雜質(zhì)的干擾、配制溶液的誤差和操作誤差,結(jié)果更可靠。增加IC的應(yīng)用效能,提高靈敏度和分離度,改善重現(xiàn)性,擴(kuò)展應(yīng)用,優(yōu)良的不同時(shí)間和不同實(shí)驗(yàn)室之間的可比性。普通等濃度泵即可作梯度淋洗,梯度淋洗和等濃度淋洗同樣簡(jiǎn)單方便,延長(zhǎng)泵的使用壽命。90生命至上技澤天下淋洗液在線發(fā)生器90
34、生命至上技澤天下檢測(cè)方式電導(dǎo)檢測(cè)具有電導(dǎo)性化合物的通用型檢測(cè)器離子色譜最常用的檢測(cè)器安培法在特定的條件下可對(duì)某些化合物直接進(jìn)行氧化還原反應(yīng)紫外可見(jiàn)光度法紫外直接吸收或可見(jiàn)光光度法測(cè)定選擇性強(qiáng)可進(jìn)行柱后衍生熒光法HPLC質(zhì)譜91生命至上技澤天下檢測(cè)方式91生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理92生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理92生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理93生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理93生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理94生命至上技澤天下一、離子色譜技術(shù)的基本原理94生命至上技澤天下樣品的前處理0.22,0.45um濾膜去除顆粒狀雜質(zhì)C
35、18預(yù)處理小柱、On-GuardRP柱去除有機(jī)分子石墨化碳黑柱去除色素On-GuardP柱去除土壤中腐殖酸、苯環(huán)類(lèi)的化合物On-GuardH、Na柱去除溶液中的金屬離子On-GuardAg柱去除溶液中的Cl-離子,主要測(cè)定高氯(海水)物質(zhì)中的NO2-,NO3-等離子在線離線除糖氨基酸樣品分析時(shí),除去糖對(duì)氨基酸檢測(cè)時(shí)的干擾95生命至上技澤天下樣品的前處理0.22,0.45um濾膜去除顆粒狀雜質(zhì)95離子色譜法應(yīng)用96生命至上技澤天下離子色譜法應(yīng)用96生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用97生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用97生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用98
36、生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用98生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用99生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用99生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用100生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用100生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用101生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用101生命至上技澤天下102生命至上技澤天下帕米膦酸二鈉注射液102生命至上技澤天下帕米膦酸二鈉注射液三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用103生命至上技澤天下三、離子色譜在藥品分析中的應(yīng)用103生命至上技澤天下BEAConfidential.|104C
37、apitalizationTitleandgraphiclabelsareinitialcapstwo-to-threeletterarticlesarenotcapped(e.g.,ThisistheTitle)Bulletedtextissentencecapsinitialcaponfirstwordonlynoperiodatend(e.g.,Thisisthebulletedcopy)PropernamesareinitialcapsandacronymsareallcapsBEAConfidential.|104CapitalizaBEAConfidential.|105Bulle
38、tSlideWithTwoColumnsHeadingis20pt.ArialBoldMulti-columnbulletitemsare20pt.ArialSecondlevelbulletis16pt.ArialSecondlevelbulletFirstlevelbulletSecondlevelbulletSecondlevelbulletSecondlevelbulletHeadingis20pt.ArialBoldMulti-columnbulletitemsare20pt.ArialSecondlevelbulletis16pt.ArialSecondlevelbulletFir
39、stlevelbulletSecondlevelbulletInstructions:Whenusingatwocolumnbulletedslide,youshouldneveruse3rdlevelbullets.BEAConfidential.|105BulletSlidBEAConfidential.|106HighlightingBulletPointsSamplebulletpointUseblue(R:0,G:114,B:234)tohighlightspecificbulletpointswithinyourslidecopySamplebulletpointSamplebul
40、letpointSamplebulletpointUsethisboxtohighlightcallouttextwhichisnotincludedinyourbulletcopyBEAConfidential.|106HighlightiBEAConfidential.|107AgendaSlideTopicOneTopicTwoTopicThreeTopicFourTopicFiveTopicSixTopicSevenBEAConfidential.|107AgendaSlidBEAConfidential.|108AgendaSlideTopicOneTopicTwoTopicThre
41、eTopicFourTopicFiveTopicSixTopicSevenInstructions:Todeemphasizeagendaitemsusegraycolor(178,180,179)BEAConfidential.|108AgendaSlidBEAConfidential.|109NumberedListsListcontentis20pt.Arial1Listcontentis20pt.Arial5Listcontentis20pt.Arial4Listcontentis20pt.Arial3Listcontentis20pt.Arial2Listcontentis20pt.
42、Arial1Listcontentis20pt.Arial2Listcontentis20pt.Arial3Listcontentis20pt.Arial1Listcontentis20pt.Arial2Listcontentis20pt.Arial4Listcontentis20pt.Arial3Listcontentis20pt.Arial1Listcontentis20pt.Arial2Listcontentis20pt.Arial5Listcontentis20pt.Arial4Listcontentis20pt.Arial3Listcontentis20pt.Arial1Listco
43、ntentis20pt.Arial2BEAConfidential.|109NumberedLiBEAConfidential.|110OneBigPointHeader24pt.ArialAddtexttosupportyourmainpointforthisslide.Thetextboxwillscaletofitwithinthegraybox.BEAConfidential.|110OneBigPoinBEAConfidential.|111Subtitlesare28pt.Arial(R:122,G:128,B:131)UsingSubtitlesandAdjustingtheBu
44、lletTextBoxSelectthesubtitletextboxabove,CopythenPasteitontotheslidethatrequiresasubtitleThisensuresthatsubtitlesandbulletedtextwillbeintheexactposition(asshowonthisslide)throughoutthepresentationandwillnotjumpfromslide-to-slideBulletedtextissentencecapsinitialcaponfirstwordonlynoperiodatend(e.g.,Th
45、isisthebulletedcopy)SubtitlesneverhaveaperiodattheendBEAConfidential.|111SubtitlesaBEAConfidential.|112SlideTransitionGuidelinesThedefaultPowerPointslidetransitionsetting(foundundertheSlideShowMenuoptions)is“NoTransition”TheslidetransitionswhileinterestingoftendetractfromcommunicatingyourmessageThe“
46、RandomTransition”shouldneverbeusedinapresentationToadjusttheslidetransitions,goto“SlideShow”“SlideTransition”BEAConfidential.|112SlideTransBEAConfidential.|113SlideAnimationGuidelinesThepurposeofslideanimationandbuildsistoenhancethemessage,notdetractfromitBecauseofthis,itisimportanttouseslideanimati
47、onsparinglyandonlywhennecessaryToadjusttheslideanimations,select“CustomAnimation”undertheTaskPaneUse“Appear”optionfortheanimationBEAConfidential.|113SlideAnimaBEAConfidential.|114SettingBlackandWhitePrintingPreferencesTosettheblackandwhiteprintingpreferences:SelectgrayscaleorpureblackandwhiteviewVie
48、wColor/GrayscaleGrayscaleThiswilldisplaytheslideingrayscalemodeandwillallowyoutoseehowtheslidewillprintClickonaslideobjectandselectGrayscaleSettingfromthemenuYouwillseealistingofoptionstochoosefromAutomaticisthedefaultandisacceptableExperimentwithalternateGrayscalesettingstoensureoptimumprintingSele
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50、ingsettingsto“dontshow”SelectViewColor/GrayscaleGrayscaleRight-clickonthetransparentobjectSelectGrayscaleSettingDontShowThehighlightboxbelowisincludedasanexampleofanobjectwithproperlysetblackandwhiteprintingsettingsThisprocessaccommodatesforaprintingbugwithinPowerPointapplicationBEAConfidential.|115
51、SettingBlaBEAConfidential.|116SavingThisTemplateasYourDefaultDesignTemplateOpentheBEACorporateTemplateGototheFilemenuandselect“Saveas”AtthebottomoftheSaveAsdialogbox,click“Saveastype,”andchoose“DesignTemplate”Inthe“Filename”box,typetheword“Blank”Click“Save”Thefilewillbesavedas“Blank.pot,”whichPowerP
52、ointrecognizesasadefaulttemplatefileBEAConfidential.|116SavingThisBEAConfidential.|117ApplyingtheCorporateTemplateSlideDesigntoanExistingPresentationOpenanexistingpresentation,selectallslidesfromtheslidesorterviewandselectEditCopyOpenacopyofthenewBEAtemplateand“paste”theslidesintotheslidesorterviewA
53、“pasteoptions”clipboardiconwillappearRollyourmouseovertheiconandfollowthedownarrowSelect“Usedesigntemplateformatting”SelecteachslideandapplyadesigntemplateRight-clickonslidesintheslidesorterviewandselect“SlideDesign”IntheSlideDesignpane,rollyourmouseovertheBEAstyleyouwanttoapply,clickthearrowinsidet
54、hethumbnailandselect“applytoselectedslides”Continuedonslide18BEAConfidential.|117ApplyingthBEAConfidential.|118ApplyingtheCorporateTemplateSlideDesigntoanExistingPresentation(Cont.)Next,eachslidewillneedtohavetheappropriateslidelayoutappliedRight-clickonslidesintheslidesorterviewandselect“SlideLayou
55、t”IntheSlideLayoutpane,mouseoverthedesiredlayoutthumbnailandselect“applytoselectedslides”GraphicelementsontheslidesmayneedtobeadjustedtoreflectthenewcolorpaletteSomeslideelementswillneedlayoutadjustmentstoconformtothenewtemplatedesignBEAConfidential.|118ApplyingthBEAConfidential.|119ImportingSlidesf
56、romAnotherPresentationOpenthepresentationyouareconvertingandacopyoftheBEAtemplateinSlideSorterViewSelecttheslide(s)youwouldliketoimport,andchooseEditCopySelecttheBEACorporatetemplateSelecttheslideyouwanttheimportedslide(s)tofollow,andchooseEditPasteTheimportedslidesshouldtakeontheBEAtemplateEnsureea
57、chslidehastheappropriateslidelayoutappliedRight-clickonslidesintheslidesorterviewandselect“SlideLayout”IntheSlideLayoutpane,mouseoverthedesiredlayoutthumbnailandselect“applytoselectedslides”BEAConfidential.|119ImportingSBEAConfidential.|120“Usethisformatforquotes.Textsizeshouldbeaminimumof22pt.andca
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