臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定培訓(xùn)課件

1、臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定苛養(yǎng)菌概述苛養(yǎng)菌的基本特征：對營養(yǎng)要求較高，在普通培養(yǎng)基上不生長或難以生長的一類細(xì)菌體外培養(yǎng)需添加特殊因子或其他營養(yǎng)成分2. 苛養(yǎng)菌分離和鑒定的基本要求： 采用 高營養(yǎng) 的培養(yǎng)基，延長培養(yǎng)時間 置于 CO2 或 微需氧 的環(huán)境，保持一定濕度 不能隨意丟棄無法鑒定的細(xì)菌，極有可能是苛養(yǎng)菌及少見菌第2頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定苛養(yǎng)菌概述苛養(yǎng)菌的基本特征：第2頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定目錄1.肺炎鏈球菌2.流感嗜血桿菌3. 腦膜炎奈瑟氏菌4. 淋病奈瑟氏菌5.布魯氏菌屬6.放線菌屬第3頁7.星形諾卡菌苛養(yǎng)菌8.溶血隱秘桿菌臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與

2、鑒定目錄1.肺炎鏈球菌2.流感嗜血桿菌3. 腦膜炎奈瑟氏菌4. 1.肺炎鏈球菌 1.1 概述 1.2 生物學(xué)性狀 1.3 檢測方法 1.4 藥敏分析第4頁 1.5 案例分析臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.肺炎鏈球菌 1.1 概述 1.2 生1.1 肺炎鏈球菌-概述第5頁肺炎鏈球菌社區(qū)感染常見病原菌之一，定植在正常人的鼻咽部。以肺部感染為主，大葉性肺炎多見。同時會導(dǎo)致耳部及鼻咽部的感染。嚴(yán)重時可繼發(fā)胸膜炎、膿胸、腦膜炎和敗血癥。常見送檢標(biāo)本類型有痰、咽拭子、尿液、腦脊液、血液、穿刺液 。肺炎球菌離開人體后很易死亡，痰培養(yǎng)分離率很低。易感人群：小于5歲及大于65歲肺炎鏈球菌疫苗第5頁臨床常見苛養(yǎng)菌的

3、培養(yǎng)與鑒定1.1 肺炎鏈球菌-概述第5頁肺炎鏈球菌社區(qū)感染常見病原菌之1.2 肺炎鏈球菌-生物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：CO2環(huán)境，哥倫比亞血平板。菌落形態(tài)：18-24h后血平板上形成草綠色溶血、灰色、半透明、圓形、針尖樣、表面光滑（有些菌株可表現(xiàn)為粘液狀）的菌落;培養(yǎng)48h后，臍凹狀菌落。涂片染色：G+球菌,矛頭狀 ,成雙或鏈狀排列，尖端向外。第6頁用放大鏡觀察臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.2 肺炎鏈球菌-生物學(xué)性狀第6頁用放大鏡觀察臨床常見苛養(yǎng)1.2 肺炎鏈球菌-生物學(xué)性狀莢膜是肺炎鏈球菌的主要毒力因子之一。根據(jù)莢膜特異性多糖抗原性，分為近90個血清型，成人致病以1-9型及12型最多，其中3型毒力最

4、強(qiáng)，常致嚴(yán)重肺炎。肺炎鏈球菌感染后，機(jī)體可建立較牢固的型特異性免疫，同型病菌的再次感染少見。第7頁第7頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.2 肺炎鏈球菌-生物學(xué)性狀莢膜是肺炎鏈球菌的主要毒力因子1.3 肺炎鏈球菌-檢測方法OPOptochin試驗: 敏感膽汁溶菌試驗: 陽性菊糖發(fā)酵試驗: 陽性莢膜腫脹試驗：陽性觸酶 ：陰性膽汁七葉甘 ：陰性甲型溶血鏈球菌(R)肺炎鏈球菌(S)第8頁 干擾肺炎鏈球菌葉酸的合成抑菌環(huán)直徑14mm為敏感抑菌環(huán)直徑18mm 確認(rèn)Optochin試驗第8頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.3 肺炎鏈球菌-檢測方法OPOptochin試驗: 敏1.3 肺炎鏈球菌-檢測方法第9頁標(biāo)

5、本類型：菌液標(biāo)本類型：尿液、腦脊液科研熱點第9頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.3 肺炎鏈球菌-檢測方法第9頁標(biāo)本類型：菌液標(biāo)本類型：尿1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第10頁試驗條件培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血的MHA接種物：直接菌落懸滴法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)孵育： 352，5%CO2 ；20-24h紙片擴(kuò)散法檢測藥敏建議報告抗生素種類：青霉素類：苯唑西林大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素磺胺類：復(fù)方新諾明喹諾酮類：左氧四環(huán)素類：四環(huán)素糖肽類：萬古霉素增加使用D-抑菌圈試驗或肉湯微量稀釋法檢測誘導(dǎo)型克林霉素耐藥的信息。肺炎鏈球菌A組 首選試驗 并常規(guī)報告紅霉素C組 補(bǔ)充試驗 選擇性報告 *阿莫西林青霉素（苯

6、唑西林紙片） *阿莫西林-復(fù)方新諾明克拉維酸B組 首選試驗 選擇性報告 *頭孢吡肟*頭孢噻肟*頭孢呋辛*頭孢曲松頭孢洛林(非腦膜炎)克林霉素多西環(huán)素吉米沙星氯霉素左氧氟沙星莫西沙星*厄他培南氧氟沙星*亞胺培南*美羅培南泰利霉素利奈唑胺四環(huán)素萬古霉素利福平誘導(dǎo)實驗新增修訂紙片擴(kuò)散法第10頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第10頁試驗條件紙片擴(kuò)散法檢測藥1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第11頁用苯唑西林代替青霉素來進(jìn)行紙片擴(kuò)散法檢測第11頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第11頁用苯唑西林代替青霉素來進(jìn)1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第12頁PRSP的篩選常規(guī)工

7、作中可以用苯唑西林的紙片擴(kuò)散法來檢測青霉素的敏感性。苯唑西林抑菌圈直徑20mm19mm判定青霉素為敏感可能是青霉素結(jié)果不可靠必須測定青霉素的MIC此法僅適用于無生命危險感染的患者。 預(yù)測-內(nèi)酰胺類抗生素敏感第12頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第12頁PRSP的篩選苯唑西林抑1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第13頁-內(nèi)酰胺類抗生素K-B法未給出標(biāo)準(zhǔn),推薦用MIC法第13頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第13頁-內(nèi)酰胺類抗生素第131.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第14頁MIC法試驗條件方法 ：微量稀釋法直接上機(jī)(GP-68）及E-test法接種物：0.5

8、麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)孵育 ：352，5%CO2 ；20-24h 細(xì)菌生長區(qū)E test 塑料條橢圓形細(xì)菌生長抑制區(qū)256128 8016判讀抑菌濃度（MIC ug/ml)E-test法第14頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第14頁MIC法試驗條件 細(xì)菌1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第15頁藥物敏感中介耐藥青霉素注射（非腦膜炎）248青霉素注射（腦膜炎）0.06-0.12口服青霉素0.060.12-12腦膜炎分離株，需盡快用可靠方法檢測和報告青霉素和頭孢曲松(或頭孢噻肟或美羅培南)的MIC值對于非腦脊液標(biāo)本中分離出的肺炎鏈球菌，需同時使用腦膜炎和非腦膜炎的折點來報告青霉素的敏感性第15

9、頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.4 肺炎鏈球菌-藥敏分析第15頁藥物敏感中介耐藥青霉素1.5 肺炎鏈球菌-案例分析第16頁患者：男60歲，因“突發(fā)高熱，頸強(qiáng)直，腦膜刺激征，意 識不清住院”。既往史：2008年腦科手術(shù)史，術(shù)后肺炎鏈球菌導(dǎo)致化膿性腦膜炎。入院后：腦脊液常規(guī)：白色，混，WBC:3.08*106腦脊液涂片:革蘭陽性球菌腦脊液培養(yǎng)：草綠色溶血、灰色、圓形、針尖樣、臍凹狀菌落。Optochin試驗: 敏感,膽汁溶菌試驗: 陽性。治療過程：入院后經(jīng)驗用藥：頭孢曲松（廣譜三代，容易透過血腦屏障）獲知涂片報告后，加萬古霉素。兩周后，預(yù)后較好。23145第16頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定1.5

10、肺炎鏈球菌-案例分析第16頁患者：男60歲，因“突發(fā)2.流感嗜血桿菌 2.1 概述 2.2 生物學(xué)性狀 2.3 檢測方法 2.4 藥敏分析第17頁第17頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.流感嗜血桿菌 2.1 概述 2.2 嗜血桿菌屬（Haemophilus）副流感嗜血桿菌H. parainfluenzae溶血性嗜血桿菌H. paraphrophilus副嗜沫嗜血桿菌H. paraegyptius嗜沫嗜血桿菌H. aphrophilus 杜克嗜血桿菌H. ducreyi流感嗜血桿菌H. influenzae 第18頁牙齦部定植性病軟下疳呼吸道及全身感染心內(nèi)膜炎亞急性心內(nèi)膜炎口咽部定植臨床常見苛養(yǎng)菌

11、的培養(yǎng)與鑒定嗜血桿菌屬（Haemophilus）副流感溶血性副嗜沫嗜沫嗜2.1 流感嗜血桿菌-概述第19頁呼吸道繼發(fā)感染原發(fā)感染鼻咽炎喉頭炎急性氣管炎 肺炎、中耳炎、 腦膜炎（2個月3歲） 心包炎、化膿性關(guān)節(jié)炎菌血癥敗血癥流感嗜血桿菌社區(qū)感染常見病原菌之一，常引起急性化膿性感染，有莢膜的b型強(qiáng)毒株可以通過呼吸道飛沫傳播。流感嗜血桿菌感染可分為原發(fā)性感染和繼發(fā)感染。原發(fā)感染以小兒多見。繼發(fā)感染：多是內(nèi)源性感染，以成人多見。常見送檢標(biāo)本類型有痰、咽拭子、肺泡灌洗液、腦脊液、血液、穿刺液 。臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.1 流感嗜血桿菌-概述第19頁呼吸道繼發(fā)感染原發(fā)感染鼻咽2.2 流感嗜血桿菌-生

12、物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：需氧，CO2環(huán)境中，最適宜的培養(yǎng)基是巧克力平板（加入萬古霉素和制霉菌素），不同嗜血桿菌對因子的需求不同。血平板上有衛(wèi)星現(xiàn)象。菌落形態(tài)：35，1824h培養(yǎng)形成微小、無色透明、不溶血，呈露滴樣小菌落。涂片染色：革蘭陰性小桿菌，無芽胞。粘液型菌株有莢膜。第20頁X因子 血紅素X因子為存在于血紅蛋白中的一種血紅素，為含鐵的卟啉，耐高溫，V因子 輔酶或輔酶血液中所含的V因子通常處于被抑制狀態(tài)，經(jīng)8090加熱10min后可使V因子釋放第20頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.2 流感嗜血桿菌-生物學(xué)性狀第20頁X因子 血紅素2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法第21頁衛(wèi)星試驗卟啉試驗糖發(fā)酵試驗吲

13、哚快速法試驗?zāi)蛩孛冈囼灥?1頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法第21頁衛(wèi)星試驗第21頁臨床常2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法金黃色葡萄球菌 衛(wèi)星試驗X因子 V因子V因子血平板 MH平板 流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌在血瓊脂培養(yǎng)基上共同培養(yǎng)時可見衛(wèi)星現(xiàn)象，因葡萄球菌能合成V因子，使其菌落周圍生長的流感嗜血桿菌菌落較大，遠(yuǎn)離者則較小。細(xì)菌種類血平板MH平板需要因子流感嗜血桿菌+-X+V副流感嗜血桿菌+V第22頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法金黃色葡萄球菌 2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法第23頁 MH平板因子實驗流感嗜血桿菌V X X+V副流感嗜血桿菌

14、X 黃色區(qū)域表示細(xì)菌生長第23頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法第23頁 細(xì)菌生長因子莢膜溶血吲哚脲酶觸酶鳥AAXV流感嗜血桿菌：af型未定型+DDDD+DD副流感嗜血桿菌：三個型未定型DDDD溶血嗜血桿菌+D副溶血嗜血桿菌+DD杜克氏嗜血桿菌D埃及嗜血桿菌+嗜沬嗜血桿菌+副嗜沬嗜血桿菌嗜血桿菌屬根據(jù)吲哚、脲酶和鳥氨酸脫羧酶可分為8個生物型。2.3 流感嗜血桿菌-檢測方法未定型為無莢膜株B定型為有毒株第24頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定莢膜溶血吲哚脲酶觸酶鳥AAXV流感嗜血桿菌：2.4 流感嗜血桿菌-藥敏分析第25頁僅用于流感流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌A組 首選試驗 并

15、常規(guī)報告氨芐西林C組 補(bǔ)充試驗 選擇性報告 阿奇霉素克拉霉素阿莫西林氨曲南阿莫西林-克拉維酸復(fù)方新諾明頭孢克羅2頭孢丙烯2頭孢克肟3頭孢泊肟3B組 首選試驗 選擇性報告氨芐西林-舒巴坦頭孢洛林頭孢呋辛（口服）頭孢呋辛2環(huán)丙沙星左氧氟沙星頭孢噻肟頭孢他啶頭孢曲松莫西沙星氧氟沙星厄他培南亞胺培南氯霉素利福平泰利霉素美羅培南四環(huán)素試驗條件培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：嗜血桿菌試驗培養(yǎng)基（HTM） 肉湯稀釋法：HTM肉湯接種物：直接菌落懸滴法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)孵育： 352，5%CO2 ；20-24h氨芐西林和阿莫西林是治療流感嗜血桿菌的首選藥物。 -內(nèi)酰胺酶的檢測可作為一種快速試驗方便地檢出流感嗜血桿菌對

16、氨芐西林和阿莫西林的耐藥性,常用的檢測方法為顯色頭孢菌素法-頭孢硝噻吩法，我院目前陽性率在20%左右。從腦脊液中分離的流感嗜血桿菌，常規(guī)中只報告氨芐西林、一種三代頭孢菌素、氯霉素和美羅培南的試驗結(jié)果。第25頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定2.4 流感嗜血桿菌-藥敏分析第25頁僅用于流感流感嗜血桿菌3. 腦膜炎奈瑟氏菌第26頁 3.1 概述 3.2 生物學(xué)性狀 3.3 鑒別要點 3.4 藥敏分析 3.5 案例分析第26頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3. 腦膜炎奈瑟氏菌第26頁 3.1 概述 3.1 腦膜炎奈瑟氏菌-概述第27頁腦膜炎奈瑟菌存在于攜帶者和腦膜炎患者的鼻咽部。通過飛沫經(jīng)空氣傳播，冬末春初為

17、流行高峰。感染后多數(shù)患者呈攜帶狀態(tài)或隱性感染。少數(shù)出現(xiàn)呼吸道感染癥狀，僅極少數(shù)發(fā)展成敗血癥，累及腦膜，形成化膿性腦脊髓膜炎。人工培養(yǎng)物如不及時轉(zhuǎn)種，超過48h常死亡。該菌能產(chǎn)生自溶酶，故采集時標(biāo)本不宜放冰箱，應(yīng)保溫立即送檢。根據(jù)腦膜炎奈瑟菌夾膜多糖抗原的不同， 可分為A、B、C等13 個血清群，我國主要是由A群和C群引起。第27頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3.1 腦膜炎奈瑟氏菌-概述第27頁腦膜炎奈瑟菌存在于攜帶者3.2 腦膜炎奈瑟氏菌-生物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：5%-10%的CO2 ,培養(yǎng)基：血平板和巧克力。菌落形態(tài)：光滑、凸起、半透明、濕潤。涂片染色：革蘭陰性球菌，腎形或咖啡豆?fàn)睿济嫦鄬?、成?/p>

18、排列位。腦脊液涂片時，常位于中性粒細(xì)胞內(nèi)外。第28頁第28頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3.2 腦膜炎奈瑟氏菌-生物學(xué)性狀第28頁第28頁臨床常見苛3.3 腦膜炎奈瑟氏菌-鑒別要點第29頁氧化酶實驗： 陽性觸酶試驗： 陽性吲哚實驗： 陰性DNA酶： 陰性硝酸鹽還原實驗：陰性麥芽糖： 分解 淋病奈瑟菌的鑒別 與不動桿菌的鑒別 葡萄糖： 分解 莫拉菌的鑒別自動鑒定儀可上機(jī)檢測第29頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3.3 腦膜炎奈瑟氏菌-鑒別要點第29頁氧化酶實驗： 3.4 腦膜炎奈瑟氏菌-藥敏分析第30頁不必進(jìn)行常規(guī)的藥敏試驗，臨床耐藥率不高。臨床經(jīng)驗性用藥通常有：青霉素是首選，對氯霉素，廣譜的頭孢菌素

19、敏感。對臨床細(xì)菌性腦膜炎經(jīng)驗治療失敗的細(xì)菌，都應(yīng)該進(jìn)行-內(nèi)酰胺酶過篩和MIC試驗試驗條件培養(yǎng)基：微量肉湯法：補(bǔ)充離子的MH肉湯，加 2%-5%的凍融馬血。 瓊脂稀釋法：MH瓊脂加5%的羊血。接種物：直接菌落懸滴法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。孵育： 352，5%CO2 ；20-24h第30頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3.4 腦膜炎奈瑟氏菌-藥敏分析第30頁不必進(jìn)行常規(guī)的藥敏試3.5 腦膜炎奈瑟氏菌-藥敏分析應(yīng)該在生物安全柜中進(jìn)行腦膜炎奈瑟菌的相關(guān)操作第31頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3.5 腦膜炎奈瑟氏菌-藥敏分析應(yīng)該在生物安全柜中進(jìn)行腦膜炎3.5 腦膜炎奈瑟氏菌-案例分析患者：男，足月出生九天，因

20、無明顯誘因出現(xiàn)發(fā)熱,擬 “新生兒感染”收住入院兒科NICU。入院后： 血常規(guī)：WBC10.01*09/L。腦脊液常規(guī):無色透明，潘氏(+)，細(xì)胞計數(shù)0.316109/L。血培養(yǎng)及腦脊液: 血培養(yǎng)陽性，腦脊液培養(yǎng)陰性。送至CDC確認(rèn)為B群腦膜炎奈瑟菌。咽拭子培養(yǎng):3名密切接觸者檢出一株B群腦膜炎奈瑟菌株（系患者的外祖母）。藥敏試驗：對頭孢三嗪、 頭孢噻肟、 利福平、 氨芐西林、四環(huán)素、 米諾霉素、環(huán)丙沙星均敏感；而對磺胺甲基異噁唑、復(fù)方新諾明均耐藥。治療過程：予以獨立病房隔離治療，頭孢曲松、青霉素抗感染及物理降溫后，病情平穩(wěn)。3214第32頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定3.5 腦膜炎奈瑟氏菌-案例

21、分析患者：男，足月出生九天，因無4. 淋病奈瑟氏菌第33頁 4.1 概述 4.2 生物學(xué)性狀 4.3 鑒別要點 4.4 藥敏分析臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定4. 淋病奈瑟氏菌第33頁 4.1 概述 4.1 淋病奈瑟氏菌-概述第34頁淋病奈瑟菌侵入泌尿生殖系統(tǒng)繁殖，引起化膿性感染。胎兒可經(jīng)產(chǎn)道感染造成新生兒淋病性急性結(jié)膜炎。實驗室在運送淋球菌培養(yǎng)及涂片標(biāo)本時要注意保溫。出現(xiàn)耐頭孢菌素的淋病奈瑟菌是一個重大的公共衛(wèi)生問題。人是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主。臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定4.1 淋病奈瑟氏菌-概述第34頁淋病奈瑟菌侵入泌尿生殖系統(tǒng)4.2 淋病奈瑟氏菌-生物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：5%-10%的CO2

22、,培養(yǎng)基：改良Thayer-Martin(MTM)培養(yǎng)基（加入萬古霉素、多粘菌素、制霉菌素、三甲氧芐二氨嘧啶TMP）。菌落形態(tài)：灰白色、光滑、凸起、半透明。涂片染色：革蘭陰性球菌，腎形或咖啡豆?fàn)?，凹面相對、成對排列位。涂片操作時不要用力涂擦，應(yīng)該在玻片上滾動。第35頁直接涂片報告方式為：找到革蘭陰性雙球菌（細(xì)胞內(nèi)）臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定4.2 淋病奈瑟氏菌-生物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：5%-10%的CO4.3 淋病奈瑟氏菌-鑒別要點第36頁氧化酶實驗： 陽性觸酶試驗： 陽性吲哚實驗： 陰性DNA酶： 陰性硝酸鹽還原實驗：陰性麥芽糖： 不分解 與不動桿菌的鑒別 葡萄糖： 分解腦膜炎奈瑟菌的鑒別莫拉菌

23、的鑒別臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定4.3 淋病奈瑟氏菌-鑒別要點第36頁氧化酶實驗： 陽4.4 淋病奈瑟氏菌藥敏分析第37頁A組 首選試驗并常規(guī)報告淋病奈瑟菌i頭孢曲松頭孢克肟環(huán)丙沙星四環(huán)素C組 補(bǔ)充試驗選擇性報告 大觀霉素試驗條件培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法： GC瓊脂基礎(chǔ)+1%特定的生長添加劑 接種物：直接菌落懸滴法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)孵育： 352，5%CO2 ；20-24h2013年CLSI將頭孢曲松、頭孢克肟、環(huán)丙沙星和四環(huán)素從試驗報告C組移到試驗報告A組，并注明不需要進(jìn)行常規(guī)試驗，根據(jù)疾病預(yù)防控制中心(CDC)指南推薦僅考慮用作治療失敗的備選 。 不需要常規(guī)試驗。 臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定

24、4.4 淋病奈瑟氏菌藥敏分析第37頁A組 淋病4.4 淋病奈瑟氏菌藥敏分析第38頁紙片擴(kuò)散法測試淋病奈瑟菌，某種抗菌藥物試驗結(jié)果是“中介”，提示結(jié)果不可靠，需要重復(fù)試驗臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定4.4 淋病奈瑟氏菌藥敏分析第38頁紙片擴(kuò)散法測試淋病奈瑟菌5.布魯氏菌 5.1 概述 5.2 生物學(xué)性狀 5.3 檢測方法 5.4 藥敏分析第39頁 5.3 案例分析臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.布魯氏菌 5.1 概述 5.2 生物5.1 布魯氏菌-概述布魯菌是國家乙類傳染病，動物源性疾病，引起變態(tài)反應(yīng)性人畜共患病，實驗室注意生物防護(hù)。所有操作在生物安全柜，廢棄物高壓滅菌；結(jié)果上報疾控中心；人感染后，

25、主要表現(xiàn)為發(fā)熱、發(fā)冷、全身痛和多汗，肝腫大，外周非侵蝕性關(guān)節(jié)炎等,反復(fù)發(fā)燒呈“波浪熱”。先侵入淋巴再入血，癥狀極不典型容易誤診。易感人群：畜牧業(yè)及皮革加工行業(yè)。國內(nèi)以羊型布魯菌病最為多見，未經(jīng)治療者的自然病程為36個月。細(xì)胞內(nèi)寄生菌。布魯菌含有兩種抗原物質(zhì)：A抗原和M抗原。第40頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.1 布魯氏菌-概述布魯菌是國家乙類傳染病，動物源性疾病，5.2 布魯氏菌-生物學(xué)性狀 培養(yǎng)條件：CO2環(huán)境，哥倫比亞血平板專性需氧。菌落形態(tài)：37培養(yǎng)在血瓊脂平板培養(yǎng)5-7天可形成灰色不溶血菌落。在固體培養(yǎng)基上菌落為無色、半透明、圓形、表明光滑、邊緣整齊。涂片染色：革蘭氏陰性短小球桿菌，

26、革蘭染色經(jīng)常著色不佳，易堆積，吉姆染色呈紫色。第41頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.2 布魯氏菌-生物學(xué)性狀 培養(yǎng)條件：CO2環(huán)境，哥5.3 布魯氏菌-檢測方法第42頁血清學(xué)試驗在國內(nèi)外用于布魯菌的診斷-疾控中心 感染病原菌后，2周后會產(chǎn)生抗體。常見的血清試驗有虎紅試驗（RB）,血清凝集試驗。氧化酶陽性（+）、觸酶陽性（+） 、 H2S陽性（+）血培養(yǎng)報陽時間3-5天。直接上機(jī)鑒定轉(zhuǎn)種延長時間涂片第42頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.3 布魯氏菌-檢測方法第42頁血清學(xué)試驗在國內(nèi)外用于布魯5.3 布魯氏菌-檢測方法第43頁楊銘，汪定成,邵海連等，全自動血培養(yǎng)儀中布魯菌陽性報警時間及其他病原菌的

27、比較J.中國感染控制雜志2013,12（6）:451-453第43頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.3 布魯氏菌-檢測方法第43頁楊銘，汪定成,邵海連等，全5.4 布魯氏菌-藥敏分析不推薦布魯氏菌進(jìn)行體外藥敏試驗。利福平對本病有效，利福平加四環(huán)素（多西環(huán)素），療程6周，為世界衛(wèi)生組織推薦的治療方案。利福平是具有較強(qiáng)的胞內(nèi)滲透作用。羊、豬型感染者以四環(huán)素與鏈霉素合用為宜。第44頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.4 布魯氏菌-藥敏分析第44頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.5 布魯氏菌-藥敏分析患者：男，12歲，因“間斷右髖關(guān)節(jié)痛月余”就診。病史：4月前開始發(fā)熱，關(guān)節(jié)痛間斷?；純焊赣H為野味加工者，患兒有

28、羊接觸史。入院后： 1. 進(jìn)行血和骨髓培養(yǎng)，48h后血培養(yǎng)儀報警陽性，涂片革蘭染色鏡檢為陰性短小球桿菌呈細(xì)沙樣堆積。陽性瓶轉(zhuǎn)種至血平板及巧克力平板，繼續(xù)培養(yǎng)至 ，巧克力平板上可見無色、透明、濕潤、細(xì)小菌落生長，血平板菌落更小。2.初步生化反應(yīng)氧化酶陽性，觸酶陽性。3.使用法國生物梅里埃VITEK-2 COMPACT鑒定系統(tǒng)，結(jié)果為羊布魯菌。4.血清凝集試驗滴度1：800（1:100為陽性）治療過程：1.間斷用頭孢噻肟、頭孢哌酮-舒巴坦治療，未出現(xiàn)明顯緩解。 2.利福平加四環(huán)素，療程6周，體溫下降，預(yù)后較好。第45頁123456第45頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定5.5 布魯氏菌-藥敏分析患者：男

29、，12歲，因“間斷右髖關(guān)節(jié)6.放線菌屬 6.1概述 6.2 生物學(xué)形狀 6.3 檢測方法 6.4 藥敏分析第46頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定6.放線菌屬 6.1概述 6.2 生物學(xué)臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定培訓(xùn)課件6.2 放線菌屬-生物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：5%-10%的CO2 , 微需氧環(huán)境，厭氧培養(yǎng)可生長。培養(yǎng)基：血平板，沙保羅瓊脂可生長。菌落形態(tài)：在血平板上形成灰白色或淡黃色粗糙而不規(guī)則的菌落，不溶血。涂片染色：革蘭陽性，絲狀或發(fā)絲狀，常形成分枝狀無隔菌絲 。硫磺樣顆粒壓片，在鏡下可見放射狀排列的菌絲，形似菊花狀。第48頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定6.2 放線菌屬-生物學(xué)性狀第48頁臨床常見苛

30、養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒6.3 放線菌屬-檢測方法第49頁 溶血(-) 葡萄糖(+) 甘露醇(+) 吲哚(-) 過氧化氫酶試驗(-)第49頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定6.3 放線菌屬-檢測方法第49頁 溶血(-6.4 放線菌屬-藥敏分析臨床常規(guī)不做藥敏羧芐西林，氯霉素，克林霉素和紅霉素敏感羧芐西林為首選藥物第50頁第50頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定6.4 放線菌屬-藥敏分析第50頁第50頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培7.星型諾卡菌 7.1 概述 7.2 生物學(xué)性狀 7.3 檢測方法 7.4 藥敏分析第51頁 7.5 案例分析臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定7.星型諾卡菌 7.1 概述 7.2 生7.1 星型諾卡菌-概述

31、諾卡菌屬是廣泛分布與土壤中的一群需氧性放線菌。易感人群：免疫力低下者第52頁血行播散，引起腦膜炎與腦膿腫 侵入皮下組織引起慢性化膿性肉芽腫與瘺管形成腦脊液，膿液，血痰，肺泡灌洗液，穿刺液膿液，組織巴西諾卡菌外源性感染足分枝菌病臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定7.1 星型諾卡菌-概述諾卡菌屬是廣泛分布與土壤中的一群需氧7.2 星型諾卡菌-生物學(xué)性狀培養(yǎng)條件：5%-10%的CO2，專性需氧菌 。培養(yǎng)基：血平板及沙保培養(yǎng)基（一周）。菌落形態(tài)：菌落大小不等，顆粒狀。不同種類可產(chǎn)生不同色素，星形諾卡菌菌落呈黃色或深橙色，表面無白色菌絲；巴西諾卡菌菌落表面有白色菌絲生長；涂片染色：G+桿菌，有細(xì)長的分支菌絲，亦或有桿狀或球狀存在。諾卡菌具有弱抗酸性，脫色劑必須用 2%硫酸溶液。第53頁1%鹽酸乙醇 第53頁臨床常見苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)與鑒定7.2 星型諾卡菌-生物學(xué)性