2019版：器官移植生物樣本庫(kù)建設(shè)實(shí)踐指引全文

1、2019版：器官移植生物樣本庫(kù)建設(shè)實(shí)踐指南（全文）器官移植經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的不斷發(fā)展，已經(jīng)成為治療各種終末期疾病 最為有效的手段1。我國(guó)器官移植總量位于世界第二，國(guó)內(nèi)已批準(zhǔn)開(kāi)展器 官移植手術(shù)的醫(yī)院有173家，涉及的移植器官包括肝臟、腎臟、心臟、肺 臟、小腸、胰腺、胰島細(xì)胞等2。器官移植領(lǐng)域中存在的眾多科學(xué)問(wèn)題需 要借助豐富和高質(zhì)量的生物樣本進(jìn)行研究，建設(shè)規(guī)范化生物樣本庫(kù)有助于 保障生物樣本質(zhì)量，發(fā)揮樣本資源價(jià)值3。我國(guó)生物樣本庫(kù)在中國(guó)醫(yī)藥 生物技術(shù)協(xié)會(huì)生物樣本庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)（試行）ISBER生物樣本庫(kù)最佳實(shí)踐2012 等標(biāo)準(zhǔn)的指導(dǎo)下健康發(fā)展4，眾多具有專(zhuān)業(yè)特色的生物樣本庫(kù)應(yīng)運(yùn)而生 5。目前，國(guó)內(nèi)眾多從事

2、器官移植醫(yī)院相繼開(kāi)展了生物樣本資源保存工作， 但是國(guó)內(nèi)外尚無(wú)針對(duì)器官移植生物樣本庫(kù)建設(shè)的指導(dǎo)性文件，不利于器官 移植生物樣本庫(kù)的規(guī)范化建設(shè)。為此，由中華醫(yī)學(xué)會(huì)器官移植學(xué)分會(huì)” 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)組織生物樣本庫(kù)分會(huì)器官移植學(xué)組”中國(guó)生物樣本 庫(kù)聯(lián)盟和“全國(guó)生物樣本標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)器官移植工作組”共同起草了 器官移植生物樣本庫(kù)建設(shè)實(shí)踐指南（以下簡(jiǎn)稱(chēng)指南”）以指導(dǎo)規(guī)范化建 設(shè)器官移植生物樣本庫(kù)。本指南依照ISBER生物樣本庫(kù)最佳實(shí)踐2018中國(guó)醫(yī)藥生物 技術(shù)協(xié)會(huì)生物樣本庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)（試行）Canadian Tissue Repository Network.2012中國(guó)生物樣本庫(kù)一理論與實(shí)踐等指南、專(zhuān)著

3、和數(shù)十 篇國(guó)內(nèi)外參考文獻(xiàn)，采用美國(guó)肝病研究學(xué)會(huì)（AASLD）推薦的醫(yī)學(xué)證據(jù)等級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（表1）6,對(duì)器官移植樣本庫(kù)的建設(shè)、樣本采集、保存、倫理等 問(wèn)題提出指導(dǎo)意見(jiàn)。.i招不畏孽*劉拇a址墩泉區(qū)詬該上罕H UA族卷”品卜堂“附即GFlHRrS走/外忻liR#*，口帆十曬由國(guó)公1明,收1明力賽惚IRC L學(xué)1HJ性.IH揖年界成M邛獨(dú)身力%讓何奧如口片 ii - H”根也閻 & &忖舊匚苗話(huà)色濘咕而海南 量常療加出肋才裁* &的,五川加在本也的H 件母：i!由泰吃律行、單肝置利祖拙好力位向常M4 宜fi批仕仲5附加kS-ttS史牙嶗IIU &UI工卻由您整口白干戈曲齊H Nt金力年懂 市川忖甫。需

4、件注七若桂聽(tīng)鵬我里醇 ft if KA4砧防工E洋lt1E的iS沂可陸.推開(kāi)訛胛圖ft 中占也比尼吼忐尤始的,*IIU &UI表1 循證醫(yī)學(xué)證據(jù)推薦分級(jí)系統(tǒng)設(shè)規(guī)劃（一）場(chǎng)和設(shè)備器官移植生物樣本庫(kù)的建設(shè)應(yīng)規(guī)劃足夠的空間以滿(mǎn)足不斷增加的樣本資源儲(chǔ)存需求，樣本保存預(yù)估總量可參考（每例樣本分裝份數(shù)X每年樣本例 數(shù)X5年X120%）分別計(jì)算出室溫、普通低溫、超低溫、液氮等保存環(huán)境的樣本量，以預(yù)估總量/保存容器容量計(jì)算出保存容器數(shù)量和所需空間。器官 移植生物樣本庫(kù)應(yīng)規(guī)劃獨(dú)立的樣本采集室、處理室、儲(chǔ)存室（有/無(wú)熱源）、信息管理室和質(zhì)控室等，涉及組織樣本采集的樣本庫(kù)，為縮短樣本離體后 處理時(shí)間應(yīng)在手術(shù)室附近區(qū)

5、域規(guī)劃樣本采集室。生物樣本庫(kù)建設(shè)的場(chǎng)地 應(yīng)按照有效運(yùn)行的宗旨設(shè)計(jì)，保障樣本及相關(guān)信息的采集、接收等一系列 工作正常實(shí)施，并且最大程度降低工作人員職業(yè)性疾病風(fēng)險(xiǎn)；設(shè)備應(yīng)從成 本、使用效率、常規(guī)和特殊管理、軟硬件維護(hù)等方面提供指導(dǎo)性條例。具 體要求應(yīng)參照中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)生物樣本庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)（試行）執(zhí)行。采 集和保存具有傳染性樣本（如含乙型肝類(lèi)病毒、丙型肝類(lèi)病毒、HIV、蒼白 螺旋體等）時(shí)應(yīng)參照病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例和生物安全 實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范7,8等要求進(jìn)行建設(shè)和管理。推薦意見(jiàn)1 :器官移植樣本庫(kù)應(yīng)依照中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)生物樣 本庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)（試行）和病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例等相關(guān)標(biāo)

6、準(zhǔn) 規(guī)范化建設(shè)，組織樣本采集室應(yīng)與手術(shù)室相鄰。（I C）（二）人員要求器官移植生物樣本庫(kù)應(yīng)指派專(zhuān)職人員負(fù)責(zé)全面管理，生物樣本的處理、 保存、信息及質(zhì)量控制應(yīng)指定專(zhuān)職人員負(fù)責(zé)。組織樣本采集人員應(yīng)為病理 診斷專(zhuān)業(yè)或經(jīng)過(guò)系統(tǒng)化的病理專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)9,倫理、財(cái)務(wù)及樣本質(zhì)量檢測(cè)（病 理形態(tài)及生物大分子等）可由相關(guān)科室人員兼職負(fù)責(zé)，工作人員數(shù)量應(yīng)根據(jù) 預(yù)估樣本量合理規(guī)劃。生物樣本庫(kù)工作崗位為專(zhuān)業(yè)技術(shù)崗，工作人員應(yīng)取 得相關(guān)專(zhuān)業(yè)技術(shù)資格認(rèn)定和中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)組織生物樣本庫(kù)分會(huì) 頒發(fā)的崗前培訓(xùn)證書(shū)10。推薦意見(jiàn)2:器官移植樣本庫(kù)工作人員應(yīng)取得相關(guān)專(zhuān)業(yè)和行業(yè)技術(shù)資 格認(rèn)定，設(shè)立專(zhuān)職技術(shù)人員負(fù)責(zé)樣本采集、處理、保存

7、、質(zhì)控及信息化管 理等。（IC）二組織機(jī)構(gòu)建設(shè)構(gòu)建完善的器官移植生物樣本庫(kù)組織機(jī)構(gòu)是保障其科學(xué)、規(guī)范運(yùn)行的 必要條件，依照現(xiàn)行生物樣本庫(kù)組織機(jī)構(gòu)建設(shè)要求應(yīng)成立科學(xué)技術(shù)委員會(huì) 倫理委員會(huì)和管理和執(zhí)行機(jī)構(gòu)4。其中，生物樣本庫(kù)所在單位已有 科學(xué)技術(shù)委員會(huì)“和“倫理委員會(huì)”的，可由其行使生物樣本庫(kù)相關(guān)職能，且 必須分別將生物樣本庫(kù)相關(guān)工作納入其正常的工作職責(zé)范圍?？茖W(xué)技術(shù)委 員會(huì)”的主要職能是對(duì)生物樣本采集和使用相關(guān)工作的科學(xué)審查，并對(duì)生物 樣本采集、處理、保存、質(zhì)量控制、信息化管理等相關(guān)技術(shù)，給予指導(dǎo)和 規(guī)范，其中器官移植專(zhuān)業(yè)人員占比不少于60% ；倫理委員會(huì)”的主要職能 是對(duì)生物樣本采集、入庫(kù)保存

8、、出庫(kù)使用、以及樣本轉(zhuǎn)移和銷(xiāo)毀等全程工 作進(jìn)行監(jiān)督，并提供相關(guān)法律和倫理支持，確保樣本捐贈(zèng)者、樣本管理者、 樣本使用者的權(quán)益均在國(guó)家相關(guān)法律下受到保護(hù)，樣本相關(guān)工作合乎國(guó)際 倫理規(guī)范4。其應(yīng)由醫(yī)學(xué)、倫理、法律相關(guān)專(zhuān)業(yè)人員和代表社會(huì)群體利益 的非專(zhuān)業(yè)人員構(gòu)成11。管理和執(zhí)行機(jī)構(gòu)”的成員應(yīng)包含從事器官移植的 臨床及科研人員和樣本庫(kù)技術(shù)操作人員，職責(zé)包括：（1）規(guī)劃樣本庫(kù)的整體 發(fā)展方向；（2）制定生物樣本庫(kù)的制度；（3）制定樣本采集的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 （SOP） ； （4）負(fù)責(zé)樣本的采集、處理、儲(chǔ)存、出庫(kù)、運(yùn)輸、質(zhì)量檢測(cè)等日常 工作。推薦意見(jiàn)3 :器官移植生物樣本庫(kù)應(yīng)組建科學(xué)技術(shù)委員會(huì)”倫理委員 會(huì)和

9、管理和執(zhí)行機(jī)構(gòu)以監(jiān)督、指導(dǎo)日常工作。（C）三、倫理規(guī)范和知情同意器官移植生物樣本資源的采集和應(yīng)用須通過(guò)倫理委員會(huì)”的審查11 。 “倫理委員應(yīng)根據(jù)原國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)”涉及人的生物醫(yī)學(xué)研 究倫理審查辦法和赫爾辛基宣言紐倫堡法典以及聯(lián)合國(guó)教科文 組織頒布的世界人類(lèi)基因組與人權(quán)宣言等規(guī)范，對(duì)保障捐贈(zèng)者的知情 同意權(quán)利、捐贈(zèng)者隱私保護(hù)、合理使用樣本等情況進(jìn)行全面、客觀的審查1。知情同意是對(duì)從事人體取樣調(diào)查的倫理要求，是生命倫理學(xué)最基本的 體現(xiàn)12。器官移植樣本的采集涉及供者和受者兩個(gè)群體，并且存在 多類(lèi)型樣本（組織、血液、尿液等）和多次采集的情況，因此，樣本采集知 情同意書(shū)應(yīng)包括采集對(duì)象、樣本

10、類(lèi)型、采集次數(shù)、應(yīng)用方向及捐贈(zèng)者權(quán)益 等重要信息。樣本采集應(yīng)在捐贈(zèng)者（供者、受者）簽署”樣本采集和保存知情 同意書(shū)”（簡(jiǎn)稱(chēng)“知情同意書(shū)”）后進(jìn)行，因器官移植樣本的特殊性，在樣本入 庫(kù)前可根據(jù)實(shí)際情況決定所需簽署的知情同意文件。生物樣本庫(kù)工作人員 有義務(wù)對(duì)捐贈(zèng)者簽署的知情同意書(shū)進(jìn)行解釋。推薦意見(jiàn)4:器官移植涉及的生物樣本采集和應(yīng)用均需獲得倫理委員 會(huì)批準(zhǔn)。（IA）推薦意見(jiàn)5 :生物樣本的采集應(yīng)在捐贈(zèng)者簽署”樣本采集和保存知情同 意書(shū)”后進(jìn)行。（IA）四、生物樣本的應(yīng)用審核鑒于器官移植樣本整體數(shù)量較少，需謹(jǐn)慎審核樣本使用，有助于發(fā)揮 其最大科研和臨床價(jià)值。申請(qǐng)生物樣本應(yīng)用人員必須如實(shí)填寫(xiě)并遞交生物

11、 樣本使用申請(qǐng)及研究方案，向科學(xué)技術(shù)管理委員會(huì)和倫理委員會(huì)”提交 紙質(zhì)申請(qǐng)。對(duì)已立項(xiàng)的研究項(xiàng)目，使用樣本時(shí)根據(jù)科研項(xiàng)目的立項(xiàng)級(jí)別， 研究者只需提供項(xiàng)目立項(xiàng)的批復(fù)文件、立項(xiàng)時(shí)科學(xué)技術(shù)管理委員會(huì)和 倫理委員會(huì)”的相關(guān)審查文件即可。生物樣本庫(kù)應(yīng)將現(xiàn)存樣本分為”常見(jiàn)樣 本和稀有樣本兩類(lèi)。常見(jiàn)樣本：（1）易于獲取（如全器官樣本，手術(shù)切除 樣本、血液樣本等）和/或（2）獲取例數(shù)不少于30例/年和/或（3）庫(kù)存份數(shù)不 少于3份。稀有樣本：（1）不易獲取（如供體樣本、活檢、穿刺樣本等）和/ 或(2)獲取少于30例/年和/或(3)庫(kù)存份數(shù)少于3份。樣本應(yīng)用審核要求： (1)樣本出庫(kù)審定時(shí)應(yīng)根據(jù)現(xiàn)存樣本類(lèi)型、數(shù)量

12、及是否符合研究所需等多方 面綜合考慮；(2)評(píng)審委員人數(shù)不少于5名且為奇數(shù)；(3)評(píng)審委員對(duì)與自 身利益相關(guān)項(xiàng)目應(yīng)采取回避機(jī)制。常見(jiàn)樣本和稀有樣本”需分別不少于 60%和80%的評(píng)審委員同意方可出庫(kù)。生物樣本庫(kù)應(yīng)在收到紙質(zhì)審批同意 后48 h內(nèi)完成樣本出庫(kù)并詳細(xì)填寫(xiě)紙質(zhì)出庫(kù)記錄13。推薦意見(jiàn)6:器官移植生物樣本庫(kù)應(yīng)依照樣本獲取難易程度、類(lèi)型及 數(shù)量等將現(xiàn)有樣本進(jìn)行分類(lèi)管理，依據(jù)樣本稀有程度制定出庫(kù)審定標(biāo)準(zhǔn)。 (工C)推薦意見(jiàn)7:已獲批的省部級(jí)以上的科研項(xiàng)目，由于已經(jīng)通過(guò)各項(xiàng)審 核，因此，項(xiàng)目中涉及的生物樣本使用時(shí)科學(xué)技術(shù)管理委員會(huì)和倫理委 員會(huì)無(wú)須再次審核。(IB)五、信息化管理信息化管理與信

13、息應(yīng)用是醫(yī)學(xué)研究和器官移植生物樣本庫(kù)管理必不可 少的重要組成部分。其中，全面和專(zhuān)業(yè)的管理軟件是構(gòu)建信息化管理的基 礎(chǔ)14。選擇信息化管理軟件首先要與自身樣本庫(kù)的設(shè)計(jì)和運(yùn)作需要的工 作流程相符合，應(yīng)結(jié)合各單位自身的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)架和工作特點(diǎn)，挑選成熟的商 業(yè)化軟件，管理軟件應(yīng)能適應(yīng)三種數(shù)據(jù)收集方法，包括手工、文本導(dǎo)入和 /或從所在醫(yī)院的HIS或LIS系統(tǒng)實(shí)時(shí)或定時(shí)獲取需要的數(shù)據(jù)集15。臨床和樣本采集、處理和儲(chǔ)存過(guò)程中獲取的信息是體現(xiàn)生物樣本價(jià)值 的重要保障，也是樣本庫(kù)實(shí)行信息化管理以及信息應(yīng)用的基本因素16, 與捐贈(zèng)者和生物樣本相關(guān)的臨床信息應(yīng)該以表達(dá)捐贈(zèng)者和生物樣本的生物特征為主的數(shù)據(jù)集形式進(jìn)行規(guī)劃，

14、可以“必須的(Mandatory)和選擇性 的(Optional)兩種方式?jīng)Q定構(gòu)成數(shù)據(jù)集的多個(gè)數(shù)據(jù)元素，用以表達(dá)捐贈(zèng)者 和相應(yīng)生物樣本的特征。上述的臨床信息至少應(yīng)包含捐贈(zèng)者”必須的數(shù)據(jù) 集：第一個(gè)數(shù)據(jù)集“身份信息，該數(shù)據(jù)集應(yīng)該包含以下幾個(gè)數(shù)據(jù)元素： 捐贈(zèng)者在樣本庫(kù)的編碼(如果有其他來(lái)源的編碼，將其他編碼一律設(shè)置為 別名”(Alias) ；(2)姓名；(3)住址；(4)通訊方式；(5)住院/門(mén)診號(hào)。其中上 述的(2)(4)三條數(shù)據(jù)元素，因?yàn)樯婕半[私和數(shù)據(jù)安全信息，將以保密方 式管理。具體方法為：這三個(gè)數(shù)據(jù)元素構(gòu)成一個(gè)編碼，該編碼分別以 keyldl、keyId2和keyId3分別指定到其相應(yīng)的姓

15、名、住址和通訊方式， 編碼作為一個(gè)新的數(shù)據(jù)元素替代原來(lái)的三個(gè)元素。將此數(shù)據(jù)元素和其相應(yīng) 內(nèi)容特別另外保存，只有有權(quán)限的人可以提取應(yīng)用，儲(chǔ)存方式可以類(lèi)似 Microsoft Excel worksheet 或 Micarosoft Access 數(shù)據(jù)庫(kù)方式儲(chǔ)存和管 理。第二個(gè)數(shù)據(jù)集“家族史主要是家族中主要成員的疾病史，根據(jù)該樣本 資源的特別情況設(shè)置必要的數(shù)據(jù)元素，如父母、祖父母、直系兄弟姐妹的 相關(guān)疾病，比如糖尿病、高血壓、心臟病、腎臟病、神經(jīng)精神疾病、乳腺 腫瘤/婦科腫瘤、出血性疾病及其他腫瘤等。第三個(gè)數(shù)據(jù)集“遺傳史”主要是捐贈(zèng)者的遺傳病史，根據(jù)該樣本資源的 特別情況設(shè)置必要的數(shù)據(jù)元素，如父母

16、、祖父母、直系兄弟姐妹的相關(guān)疾病，比如多囊腎、遺傳性腎炎、肝豆?fàn)詈俗冃?、a 1-抗胰蛋白酶缺陷癥、Wilson病等遺傳性疾病。其余相關(guān)信息（如治療史、手術(shù)史及預(yù)后等）同樣以數(shù)據(jù)集的方式?jīng)Q定其 中所有的數(shù)據(jù)元素，并可將其中的數(shù)據(jù)元素根據(jù)實(shí)際可以獲取的情況分為 ”必須的“和“選擇性的”。所有數(shù)據(jù)集和其中相應(yīng)的數(shù)據(jù)元素以表格形式描 述。另外，與生物樣本相關(guān)的數(shù)據(jù)集的“基本屬性”可有三個(gè)最基本數(shù)據(jù)元 素一樣本類(lèi)型、器官/組織部位、添加劑（比如抗凝劑）；捐贈(zèng)者為供者時(shí)除 提供上述數(shù)據(jù)集外還應(yīng)提供死亡時(shí)間、死亡原因和供體器官冷/熱缺血時(shí)間 等數(shù)據(jù)元素。上述信息建議由醫(yī)院網(wǎng)絡(luò)內(nèi)直接獲取/共/受者間的信息應(yīng)建

17、 立關(guān)聯(lián)性，有助于資料的完整性。樣本信息應(yīng)包括采集、處理、儲(chǔ)存、質(zhì) 控和應(yīng)用等方面信息16,每份樣本應(yīng)完整錄入來(lái)源、類(lèi)型、體積、處理 方式、編碼、采集時(shí)間、冷熱缺血時(shí)間、儲(chǔ)存位置、存儲(chǔ)溫度及凍融次數(shù) 等；質(zhì)控信息應(yīng)包括溫度監(jiān)控記錄、質(zhì)控時(shí)間、方法和結(jié)果等17;應(yīng)用 信息應(yīng)包括樣本類(lèi)型、數(shù)量及項(xiàng)目名稱(chēng)和取得成果等。信息錄入應(yīng)以詞條 形式錄入并設(shè)置警示功能，避免重要信息遺漏，同時(shí)應(yīng)該有輸入信息的合 理性驗(yàn)證功能18。推薦意見(jiàn)8:器官移植樣本庫(kù)需建立完善和安全的信息化管理平臺(tái)， 以數(shù)據(jù)集的形式對(duì)捐贈(zèng)者及生物樣本的相關(guān)信息進(jìn)行規(guī)劃管理。（IA）推薦意見(jiàn)9 :數(shù)據(jù)集需包括“身份信息“家族史”“遺傳史”和

18、生物樣本” 基本屬性”等數(shù)據(jù)元素，供/受者數(shù)據(jù)元素應(yīng)建立關(guān)聯(lián)性。（Ha B） 六、質(zhì)量管理體系建設(shè)完善的質(zhì)量管理體系（Quality Management System , QMS）和運(yùn)營(yíng) 質(zhì)量管理是建設(shè)規(guī)范化生物樣本庫(kù)的關(guān)鍵，可有效保障生物樣本和實(shí)驗(yàn)結(jié) 果的質(zhì)量19。前期策劃、文件制定、試運(yùn)行和體系審核是建立QMS的 四個(gè)步驟，其中質(zhì)量管理體系文件包括管理職責(zé)、質(zhì)量手冊(cè)、程序文件、 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)和記錄表單等，應(yīng)覆蓋生物樣本庫(kù)運(yùn)營(yíng)全過(guò)程。質(zhì)量 保證(QA)和質(zhì)量控制(QC)是QMS中重要的兩個(gè)組成部分，QA是完整的 管理運(yùn)作系統(tǒng)，包含規(guī)劃、實(shí)施、建檔、記錄、評(píng)估和改進(jìn)幾個(gè)方面。QC

19、是一個(gè)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)量結(jié)果、判定是否達(dá)到預(yù)期要求、對(duì)質(zhì)量問(wèn)題采取措 施進(jìn)行補(bǔ)救并防止再發(fā)的過(guò)程，包括室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC)、室間質(zhì)量評(píng)價(jià) (EQA)以及樣本質(zhì)量評(píng)估20。IQC的主要控制點(diǎn)包括樣本接收前變量、樣本處理過(guò)程控制和方法學(xué) 驗(yàn)證，應(yīng)注重對(duì)采集流程的控制，各種操作應(yīng)嚴(yán)格依照SOP標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行， 包括樣本采集部位的準(zhǔn)確性、樣本離體后時(shí)間、處理及保存過(guò)程等。EQA 是由權(quán)威外部機(jī)構(gòu)組織實(shí)施的質(zhì)量評(píng)價(jià)，國(guó)內(nèi)可申請(qǐng)中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié) 會(huì)組織生物樣本庫(kù)分會(huì)(BBCMBA)組織的生物樣本庫(kù)質(zhì)量達(dá)標(biāo)檢查，國(guó) 際可申請(qǐng)“生物與環(huán)境樣本庫(kù)學(xué)會(huì)(ISBER)委托盧森堡聯(lián)合生物樣本庫(kù) (IBBL)組織的“生物樣本

20、庫(kù)樣本質(zhì)量控制檢測(cè)能力測(cè)試”。推薦意見(jiàn)10 :根據(jù)生物樣本的應(yīng)用要求制定完善的質(zhì)量管理體系對(duì)器 官移植生物樣本庫(kù)運(yùn)行過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量管控。(I B)推薦意見(jiàn)11 :器官移植生物樣本庫(kù)應(yīng)經(jīng)過(guò)外部評(píng)審機(jī)構(gòu)的評(píng)定。(Ha B)七、樣本的質(zhì)量評(píng)估質(zhì)量評(píng)估包括對(duì)組織、體液、細(xì)胞和核酸樣本的評(píng)估，生物樣本在采 集、處理及儲(chǔ)存的過(guò)程中常存在諸多不可控因素21,因此，在制定樣本 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)以滿(mǎn)足預(yù)期實(shí)驗(yàn)需求為宜。評(píng)估方法包括”定期隨機(jī)抽樣” 和“針對(duì)性”評(píng)估兩種方法，前者是定期按一定比例隨機(jī)抽取生物樣本進(jìn)行 質(zhì)量檢測(cè)，是目前常用的方法，但會(huì)消耗現(xiàn)存樣本且提高質(zhì)量評(píng)估成本， 后者是針對(duì)未能滿(mǎn)足QMS標(biāo)準(zhǔn)的樣本進(jìn)

21、行檢測(cè)，可減少質(zhì)量評(píng)估樣本用 量和成本，但需有完整QMS體系監(jiān)管。組織樣本評(píng)估需要從病理形態(tài)、分子水平和特定指標(biāo)等幾個(gè)方面對(duì)樣 本進(jìn)行評(píng)價(jià)22。庫(kù)存組織樣本均應(yīng)有對(duì)應(yīng)組織切片用于病理學(xué)評(píng)估并長(zhǎng) 期保存，病理學(xué)評(píng)估是評(píng)價(jià)組織壞死程度、腫瘤成分比例、采集準(zhǔn)確性和 完整性的金標(biāo)準(zhǔn)23，腫瘤成分比例不少于75%為質(zhì)量良好，可用于大多 數(shù)研究，腫瘤或壞死成分比例少于65%原則上可不予保存。接受移植的腫 瘤患者（如肝臟移植）術(shù)前使用各種抗腫瘤治療可導(dǎo)致腫瘤存在不同程度的 壞死，可借助顯微切割技術(shù)獲取腫瘤組織保存。組織樣本可采用RT-PCR 技術(shù)、凝膠電泳、質(zhì)譜分析等方法對(duì)其核酸（DNA、RNA）和蛋白的質(zhì)

22、量進(jìn) 行檢測(cè)24。體液樣本（如全血、血清、血漿、尿液、膽汁等質(zhì)量評(píng)估可因采集、處 理和儲(chǔ)存方法的不同對(duì)其物質(zhì)含量、分子功能產(chǎn)生不同程度的影響，可以 在保存前用特定的分子標(biāo)志物評(píng)估其完整性能否滿(mǎn)足科研設(shè)計(jì)要求。細(xì)胞 樣本的質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)包括細(xì)胞數(shù)量、活性和污染（細(xì)菌、病原體和病毒）程 度等幾個(gè)方面。可采用細(xì)胞計(jì)數(shù)板/儀測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，臺(tái)盼藍(lán)染色法或熒光 染料標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞活性，細(xì)菌培養(yǎng)等檢測(cè)污染情況25,26。生物樣本內(nèi)或提取后的核酸評(píng)估包括測(cè)定其完整性（分子量、RIN值）、 濃度和純度27。DNA樣本可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)其片段大小和完 整性，通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其濃度（OD260 nm值）

23、和純度（OD260 nm/280 nm值）。RNA樣本的完整性目前推薦檢測(cè)其RIN值判定（RIN值 接近10完整性最好、RIN值不小于7為合格）或通過(guò)28S/18S比值判定， 可通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的濃度和純度。為保證樣本質(zhì)量檢測(cè)結(jié) 果的客觀性，可將樣本送至第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)28。推薦意見(jiàn)12 :根據(jù)樣本類(lèi)型及應(yīng)用方向采用針對(duì)性”評(píng)估方法有選擇 性地進(jìn)行形態(tài)學(xué)、核酸質(zhì)量、細(xì)胞活性等質(zhì)量評(píng)價(jià)。（I B） ，1生物樣本的采集和處理組織樣本.切除器官樣本不同類(lèi)型切除器官的組織樣本采集方案（部位、順序、大小及數(shù)量）和操 作流程應(yīng)根據(jù)器官類(lèi)型、采集地點(diǎn)及預(yù)期應(yīng)用方向并與臨床和病理醫(yī)師商

24、討后制定29。生物樣本具有潛在生物危害性，嚴(yán)禁樣本采集人員在無(wú)防 護(hù)措施下進(jìn)行樣本采集。具有傳染性的樣本應(yīng)根據(jù)其危害程度，依照相關(guān) 規(guī)定采取人員和環(huán)境防護(hù)30。樣本采集人員應(yīng)在采集前詳細(xì)了解病變部 位、范圍、性質(zhì)以及有無(wú)傳染性疾病等基本情況，采集占位病變樣本時(shí)還 應(yīng)了解占位大小、數(shù)量和治療史等。切除器官樣本采集過(guò)程煩瑣，不可控 因素較多，應(yīng)詳細(xì)記錄采集過(guò)程，以備預(yù)期研究提供基線(xiàn)資料31。器官移植手術(shù)復(fù)雜導(dǎo)致樣本離體時(shí)間不定，為保障樣本中生物大分子 的穩(wěn)定性和活性，要求采集人員與手術(shù)人員建立良好的溝通機(jī)制。組織樣 本采集至少需要兩名工作人員協(xié)同完成，一名負(fù)責(zé)樣本的采集及分裝，另 一名負(fù)責(zé)采集過(guò)程

25、中的輔助工作。全器官樣本離體后應(yīng)放置于裝有冷藏介 質(zhì)（28 ）的無(wú)菌容器中即刻轉(zhuǎn)運(yùn)至采集室，并于離體后30 min內(nèi)完成 采集、分裝及低溫保存，分裝后的樣本應(yīng)放置在低于保存溫度的容器中進(jìn) 行轉(zhuǎn)運(yùn)32。離體時(shí)間超過(guò)30 min的樣本也應(yīng)進(jìn)行采集，隨后對(duì)樣本進(jìn) 行質(zhì)量評(píng)估，滿(mǎn)足要求的樣本可進(jìn)行長(zhǎng)期保存。樣本采集區(qū)域、采集器械和物品應(yīng)保持清潔無(wú)菌，盡量使用一次性器 材，避免交叉和二次污染。組織樣本的切割和分裝應(yīng)在低溫（28 ）環(huán)境 中進(jìn)行并置于浸濕的無(wú)菌紗布上操作，用于RNA研究樣本的采集器械應(yīng) 進(jìn)行RNA酶滅活處理，并將樣本放置于RNA保護(hù)劑中長(zhǎng)期儲(chǔ)存33。采 集前應(yīng)測(cè)量器官的大小、重量和體積（排

26、水法）并對(duì)表面和病變部位進(jìn)行拍 照存檔。采集順序應(yīng)依照非病變區(qū)、病變旁區(qū)、病變區(qū)以及無(wú)菌區(qū)、有菌 區(qū)原則依次進(jìn)行。在不影響病理診斷的前提下，每病變區(qū)域分裝份數(shù)不少 于10份，每份樣本體積不大于0.5 cm3，多個(gè)占位病變應(yīng)分別采集保存， 以便于開(kāi)展多項(xiàng)臨床和科學(xué)實(shí)驗(yàn)，樣本采集應(yīng)盡量避免出血、壞死區(qū)。占 位性病變直徑在0.51.0 cm時(shí)，沿病變最大徑剖開(kāi),2/3用于病理診斷， 1/3放置于RNA保護(hù)劑中保存，直徑小于0.5 cm的病變不進(jìn)行樣本采集 和保存12。附帶其他臟器或組織時(shí)，應(yīng)依照臨床技術(shù)操作規(guī)范病理學(xué) 分冊(cè)，ISBN 7801941950）進(jìn)行采集，根據(jù)科研及臨床需要保存組織樣 本3

27、4。樣本采集過(guò)程應(yīng)盡量避免破壞器官整體形態(tài)，剩余樣本應(yīng)放置于 標(biāo)本缸內(nèi)用中性福爾馬林溶液浸泡并編號(hào)后長(zhǎng)期保存，可用于今后的形態(tài) 學(xué)、蛋白及部分核酸相關(guān)研究32。.活檢組織樣本活檢組織樣本（供/受者）的臨床和研究?jī)r(jià)值巨大，主要用于供體器官的質(zhì)量評(píng)估和術(shù)后并發(fā)癥的病理診斷，活檢方式包括手術(shù)切取活檢、穿刺活 檢、內(nèi)鏡導(dǎo)管活檢等35,涉及的移植器官包括肝臟、腎臟、心臟、肺、 小腸等?；顧z組織樣本獲取過(guò)程為有創(chuàng)性操作且獲取量少，因此，應(yīng)在符 合倫理且對(duì)捐贈(zèng)者充分告知并獲得允許的情況下自愿留取；活檢組織樣本 應(yīng)在滿(mǎn)足病理診斷的前提下，依據(jù)預(yù)期研究目的制定科學(xué)的采集方案并選 擇最優(yōu)的保存方法?；顧z組織樣本應(yīng)

28、在臨床專(zhuān)家的指導(dǎo)下獲取，且不會(huì)對(duì)捐贈(zèng)者造成危害 的情況下優(yōu)先選擇楔形切除樣本，獲取的組織樣本體積約23 mm3且應(yīng) 即刻放置凍存管內(nèi)編碼、保存，根據(jù)采集份數(shù)依次放入RNA保護(hù)劑、氣 相液氮中保存17。生物樣本庫(kù)不再留取活檢組織的病理質(zhì)控樣本，可借 助臨床病理診斷結(jié)果作為質(zhì)控依據(jù)。每例保存的活檢組織樣本建議保存同 期血液和/或尿液樣本并記錄相關(guān)臨床信息36。推薦意見(jiàn)13 :針對(duì)器官類(lèi)型制定合理的組織樣本采集方案和流程，確 保樣本采集不影響病理診斷的準(zhǔn)確性。（I B）推薦意見(jiàn)14 :切除器官離體后應(yīng)在潔凈無(wú)菌區(qū)域內(nèi)盡快完成組織樣本 采集并完整記錄采集過(guò)程，每例樣本應(yīng)多份保存。（IA）推薦意見(jiàn)15

29、:活檢組織樣本在符合倫理且對(duì)捐贈(zèng)者充分告知并獲得允 許的前提下自愿留取。（皿B）推薦意見(jiàn)16 :活檢組織樣本應(yīng)在RNA保護(hù)劑、氣相液氮中保存。（IA)（二）體液樣本器官移植涉及的體液樣本種類(lèi)包括血液、尿液、胸腔積液、腹水、膽汁等/共/受者應(yīng)于器官移植前24 h內(nèi)采集血液和/或尿液樣本一份，受者 在移植后依據(jù)預(yù)期研究方向制定體液樣本的采集類(lèi)型、間隔周期和數(shù)量， 推薦在移植后7 d、14 d和出院前采集，所有有創(chuàng)性的體液樣本的采集應(yīng) 與臨床檢查同時(shí)進(jìn)行26。.血液樣本：采集和保存前應(yīng)依據(jù)預(yù)期實(shí)驗(yàn)所需用量制定采集和處理方案。血液樣 本采集后應(yīng)置于28 環(huán)境中暫存并盡快（24 h）完成處理和保存。全血

30、 分離后的血清或血漿分裝至若干（約5管）凍存管內(nèi)（250 pl/管）于-80 以下保存，棕黃層加入冷凍保護(hù)劑后-140 以下保存37。抗凝血可提 取血漿、血沉棕黃層（含白細(xì)胞）、紅細(xì)胞，可供核酸檢測(cè)和活細(xì)胞提取， 不同類(lèi)型的抗凝劑對(duì)后續(xù)研究也有影響，常用EDTA抗凝管采血。非抗凝 血可獲取血清和血凝塊，可供DNA基因分型和其他代謝產(chǎn)物研究38。.液樣本：采集方法取決于所要分析的類(lèi)型，采集前需要清洗外陰并采集排尿后 的清潔中段尿液，其細(xì)胞和微生物污染率較低。晨尿（高濃度）有利于檢測(cè) 白細(xì)胞、紅細(xì)胞和激素等，隨機(jī)采集適合于常規(guī)篩查和細(xì)胞學(xué)研究，分段 采集用于比較尿液和血液中分析物的濃度，定時(shí)采集可

31、以用來(lái)比較某些生 物分子的排泄模式，采集時(shí)間是12 h和24 h37。采集容器應(yīng)為防漏的 無(wú)菌干燥廣口容器，容量為503 000 ml,根據(jù)分析物檢測(cè)的要求可添 加乙二胺四乙酸（EDTA）、酸化劑或焦亞硫酸鈉等防腐劑，尿液收集后冷藏 并保存。尿液樣本要離心去除細(xì)胞及碎片，脫細(xì)胞的尿液和分離的細(xì)胞分 裝后放置于-80 以下環(huán)境保存。尿液膜常溫保存可用于尿中蛋白、 microRNA及代謝產(chǎn)物的保存，有利于降低保存成本，節(jié)省儲(chǔ)存空間39。.胸腔積液、腹水、膽汁等：采集和保存過(guò)程中應(yīng)遵循無(wú)菌操作原則，樣本獲取后應(yīng)置于28 環(huán)境中靜置暫存并盡快(24 h)完成處理和保存。胸、腹水處理同尿液樣 本，-80

32、 以下保存。膽汁樣本可供科學(xué)研究項(xiàng)目尚不清楚，建議不經(jīng) 過(guò)離心直接分裝(0.5 ml/管)，置于液氮環(huán)境中保存。推薦意見(jiàn)17 :依據(jù)器官移植類(lèi)型和預(yù)期應(yīng)用方向制定體液樣本采集種 類(lèi)、數(shù)量及時(shí)間點(diǎn)。(IC)推薦意見(jiàn)18 :體液樣本應(yīng)依據(jù)樣本類(lèi)型，進(jìn)行成分提取后保存。(I A)(三)活性組織/細(xì)胞樣本隨著移植領(lǐng)域研究的不斷發(fā)展，要求保存具有生物活性樣本以供腫瘤 耐藥檢測(cè)、人源腫瘤異物移植(PDX)模型建立、原代細(xì)胞培養(yǎng)、干細(xì)胞分 離及移植免疫學(xué)研究使用40。樣本離體后采集/處理時(shí)間、無(wú)菌采集技術(shù)、 梯度降溫及復(fù)溫程序是影響生物活性的重要因素41。樣本處理的SOP文 件應(yīng)在實(shí)踐中不斷改進(jìn)和完善中建立

33、。簡(jiǎn)要采集和處理流程：在無(wú)菌環(huán)境下快速獲取具有生物活性的樣本并 于超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行樣本分離、分裝。用于PDX模型建立的樣本可即刻 接種于裸鼠體內(nèi)或放入特殊保存液中置于28環(huán)境中保存48 h,但 隨保存時(shí)間的延長(zhǎng)，組織活性逐漸降低42。用于原代細(xì)胞培養(yǎng)的組織樣 本應(yīng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)剪碎組織后根據(jù)組織類(lèi)型選擇適宜濃度的消化酶和 時(shí)間對(duì)組織進(jìn)行細(xì)胞化處理，商品化的組織處理儀和試劑可降低對(duì)組織活 性的影響26。處理后的活性細(xì)胞溶液可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或低溫凍存。細(xì)胞 凍存前應(yīng)測(cè)定細(xì)胞濃度和活細(xì)胞比例，將細(xì)胞放入無(wú)菌凍存管內(nèi)加入自配 的冷凍保護(hù)劑或其他商品化保護(hù)劑，混勻后進(jìn)行程控降溫并于液氮中保 存，嚴(yán)禁反復(fù)凍

34、融，細(xì)胞復(fù)溫應(yīng)在37 恒溫水浴箱中快速完成43。推薦意見(jiàn)19 :活性組織/細(xì)胞樣本的采集和處理應(yīng)在樣本離體后即刻 進(jìn)行，采集和處理應(yīng)執(zhí)行無(wú)菌操作規(guī)程。(IA)推薦意見(jiàn)20 :器官移植生物樣本庫(kù)應(yīng)開(kāi)展血液中白細(xì)胞的活性保存， 有利于移植免疫學(xué)研究。(IC) 九、生物樣本的保存科學(xué)合理的生物樣本保存方法和溫度可保證樣本預(yù)期應(yīng)用質(zhì)量，節(jié)省 空間，降低成本，提高存取便捷性，是建設(shè)生物樣本庫(kù)的關(guān)鍵。器官移植 生物樣本庫(kù)應(yīng)根據(jù)樣本類(lèi)型、預(yù)期儲(chǔ)存時(shí)間和應(yīng)用方向選擇適宜的保存方 法和溫度。生物樣本保存方法包括處理后保存、整體保存和分裝保存。處理后保 存是獲取樣本后即刻提取其預(yù)期研究所需的生物大分子(DNA、R

35、NA、蛋 白等)進(jìn)行保存，可避免生物大分子降解，但其處理成本高，應(yīng)用方向單一, 主要用于研究目的明確的小規(guī)模樣本保存44。整體保存適用體積小或前 處理對(duì)質(zhì)量影響較大的樣本，如活檢樣本等。分裝保存是將樣本根據(jù)預(yù)期 研究要求，等體積分裝若干凍存管內(nèi)進(jìn)行保存，可提高樣本的多方向應(yīng)用 價(jià)值，避免反復(fù)凍融對(duì)質(zhì)量的影響，但會(huì)增加樣本庫(kù)的工作量和保存成本， 不規(guī)范的分裝操作可導(dǎo)致樣本質(zhì)量不一，應(yīng)用自動(dòng)化分裝平臺(tái)可降低對(duì)樣 本質(zhì)量的影響45。生物樣本的保存溫度包括：室溫（425 ）、低溫（-604 ）、深 低溫（-80-60 ）和超低溫（-196-80 ）。室溫用于福爾馬林固 定的樣本、組織蠟塊、切片的保存，其對(duì)生物大分子的保存效果不佳，并 應(yīng)控制保存區(qū)域的濕度和避免樣本蟲(chóng)蛀。冷凍干燥保存、干化學(xué)基質(zhì)保存 和穩(wěn)定劑保存是新興的常溫保存技術(shù)，也是未來(lái)樣本保存發(fā)展方向，但上 述方法保存樣本時(shí)限短，成本高，不推薦大規(guī)模樣本保存使用46。低溫 環(huán)境中04 用于樣本處理前的短期（組織樣本4 h、體液樣本12 h） 保存，此溫